( PDF ) Estudo químico e atividades microbiológicas de espécies do gêneroPsidium (Myrtaceae)

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UNIVERSIDADE REGIONAL DO CARIRI - URCA

PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA- PRPGP

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE - CCBS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA BIOLÓGICA - DQB

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOPROSPECÇÃO MOLECULAR

ESTUDO QUÍMICO E ATIVIDADES MICROBIOLÓGICAS DE

ESPÉCIES DO GÊNERO Psidium (Myrtaceae)

CARLA KARINE BARBOSA PEREIRA

CRATO, CE

2010

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CARLA KARINE BARBOSA PEREIRA

ESTUDO QUÍMICO E ATIVIDADES MICROBIOLÓGICAS DE

ESPÉCIES DO GÊNERO Psidium

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Bioprospecção Molecular da

Universidade Regional do Cariri – URCA,

como requisito parcial para obtenção do título

de Mestre em Bioprospecção Molecular.

Orientador: Prof. Dr. José Galberto Martins da Costa

CRATO, CE

2010

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Ana Paula Saraiva de Sousa – CRB 3/1000

Pereira, Carla Karine Barbosa Pereira

P436e Estudo químico e atividades microbiológicas de espécies do gênero

Psidium (Myrtaceae)/ Carla Karine Barbosa Pereira. – Crato-CE, 2010.

120p.il.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Mestrado em

Bioprospecção Molecular da Universidade Regional do Cariri – URCA

Orientador: José Galberto Martins da Costa

1. Psidium (Myrtaceae)- estudo químico. 2 Óleo essencial

3. Atividade antimicrobiana I. Título.

CDD: 615.323

CARLA KARINE BARBOSA PEREIRA

ESTUDO QUÍMICO E ATIVIDADES MICROBIOLÓGICAS DE

ESPÉCIES DO GÊNERO Psidium

Dissertação submetida à Coordenação do Programa de Pós-Graduação Stricto sensu em

Bioprospecção Molecular da Universidade Regional do Cariri – URCA, como requisito

parcial para obtenção do título de Mestre em Bioprospecção Molecular. Área de

concentração: Bioprospecção de Produtos Naturais.

Aprovada em 18 de Outubro de 2010

BANCA EXAMINADORA

______________________________________________________________________

Prof. Dr. José Galberto Martins da Costa – Orientador

Universidade Regional do Cariri – URCA

______________________________________________________________________

Prof. Dr. Henrique Douglas Melo Coutinho – Avaliador Interno

Universidade Regional do Cariri – URCA

______________________________________________________________________

Prof. Dr. Flávio Furtado de Farias – Avaliador Externo

Faculdade de Ciências Aplicadas Dr. Leão Sampaio – FALS

______________________________________________________________________

Prof. Dr. Irwin Rose de Alencar – Avaliador Interno Suplente

Universidade Regional do Cariri – URCA

Dedico este trabalho a Deus, razão da minha existência,

aos meus pais Carlos Alberto Feijó Pereira e Benicia Maria Barros Barbosa Pereira,

por toda dedicação, apoio, oração e amor insubstituível,

a meu noivo Marcos André Rodrigues da Silva Júnior,

pela compreensão, incentivo, cuidado e amor,

e aos meus irmãos Herisson Barbosa Pereira, Alyson Barbosa Pereira,

Vanessa Kelly Barbosa Pereira, a minha cunhada Rosana Maria de Oliveira Pereira

e a minha avó Maria José Barros Barbosa,

pela paciência, carinho e apoio.

AGRADECIMENTOS

A Deus, porque até aqui me conduziu em triunfo, e por ter me capacitado, me

dado sabedoria, saúde, tranqüilidade e forças para superar todos os obstáculos desta

caminhada.

Aos meus pais Carlos Alberto Feijó Pereira e Benicia Maria Barros Barbosa Pereira,

por seu amor incondicional, por sua oração, paciência e sabedoria, e onde sempre encontrei a

tranqüilidade e paz nos momentos mais turbulentos, incentivo nos momentos de desânimo e

festa nos momentos das conquistas. Obrigada por serem esses exemplos de vida e por

acreditarem e incentivarem sempre meus projetos.

Ao meu noivo Marcos André Rodrigues da Silva Júnior pelo seu incentivo, orações e

apoio, por estar sempre pronto a me ajudar, e por sempre colocar meu bem estar à frente de

todas as coisas. Obrigada por sua atenção, dedicação, amor e amizade e por sempre ouvir

minhas queixas e preocupações, por ser meu ombro amigo nas horas mais difíceis, e estar

sempre pronto a me aconselhar e me auxiliar.

Aos meus irmãos Herisson Barbosa Pereira, Alyson Barbosa Pereira e Vanessa Kelly

Barbosa Pereira, a minha cunhada Rosana Maria de Oliveira Pereira e minha avó Maria José

Barros Barbosa, pela compreensão, apoio e amor. Obrigada por entenderem minha falta, por

suas orações, por apoiarem meus projetos e estarem sempre prontos a me ajudar no que for

preciso.

Ao meu orientador Prof. Dr. José Galberto Martins da Costa, pela oportunidade,

paciência, dedicação e incentivo durante todo o meu caminhar acadêmico, sempre me

auxiliando e aconselhando e sempre demonstrando confiança em meu trabalho. Obrigada por

sua compreensão e preocupações durante todo esse tempo em que convivemos.

A Prof. Msc. Fabíola Fernandes Galvão Rodrigues por sua amizade, incentivo e apoio

dedicados a mim e a meu trabalho ao longo da minha caminhada acadêmica. Obrigada por sua

atenção, conselhos e dedicação, e por estar sempre disponível mesmo estando sobrecarregada

com suas obrigações.

Ao Prof. Dr. Henrique Douglas Melo Coutinho da Universidade Regional do Cariri –

URCA e ao Prof. Dr. Flávio Furtado de Farias da Faculdade de Ciências Aplicadas Dr. Leão

Sampaio – FALS por terem aceito o convite de avaliarem o trabalho e pela atenção, cuidado e

importantes contribuição feitas a este.

Ao Prof. Dr. Sidney Gonçalves Lima, do Departamento de Química da Universidade

Federal do Piauí – UFPI, pela obtenção dos espectros dos óleos essenciais.

Ao Herbário Caririense Dárdano de Andrade Lima, sob supervisão da Prof. Dr, Maria

Arlene Pessoa da Silva da Universidade Regional do Cariri – Urca, e ao amigo Antônio

Carlito, pela catalogação das exsicatas e encaminhamento para a identificação botânica.

Obrigada pela paciência.

Aos professores do Programa de Pós-Graduação em Bioprospecção Molecular pelo

incentivo e pela oportunidade de crescimento intelectual durante este curso.

As amigas Eidla Mikaelle Maciel do Nascimento, Samara Alves Brito, Helenicy Veras

e Magaly Lima Mota, pela amizade, conselhos, apoio, incentivo, sinceridade e lealdade.

Obrigada pela ajuda e por muitas vezes terem feito o papel de família quando estes estavam

longe, agradeço a Deus a oportunidade de ter conhecido pessoas tão especiais como vocês.

Aos meus colegas de mestrado pelo incentivo e pelos bons momentos que desfrutamos

durante esta caminha. Em especial agradeço a Vanessa Bitu, Gerlânia de Oliveira e Elaine

Cristina pelo apoio, amizade, incentivo e ajuda, louvo a Deus por ter colocado vocês em

minha vida.

A toda equipe do Laboratório de Pesquisa de Produtos Naturais (LPPN), Thiago Silva,

Natálya Fechinne, Francisco Stefânio, Erlânio de Oliveira, Fábio Fernandes, George Souza,

Walmir Emanuel, Liana Oliveira, Manuele Eufrásio, Mário Eduardo e Aracélio Viana, pela

ajuda, preocupação e apoio e pelos bons momentos que passamos juntos. Agradeço também a

pessoa de Luiz Leandro da Silva (seu Luiz) e a Josniel Pires, pela ajuda nas coletas e pelo

apoio durante todo este processo. Obrigada, a ajuda de vocês foi essencial para este trabalho.

Aos colegas e professores de outros laboratórios pela amizade, companheirismo e

disponibilidade em tudo o que precisei.

Ao Instituto Federal de Educação Tecnológica do Ceará – IFCE, campus Juazeiro do

Norte, representado na pessoa do Prof. João Marcos, pelo auxílio no levantamento

bibliográfico.

A Fundação Oswaldo Cruz – FIOCRUZ, ao Hospital Universitário da Universidade

Federal da Paraíba – UFPB e a Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoas de Nível

Superior – CAPES, pelas doações dos microorganismos e pelo suporte financeiro.

Enfim, os meus sinceros agradecimentos a TODOS aqueles que, direta ou

indiretamente, contribuíram para a realização deste trabalho e aos que aqui não foram

mencionados.

Muito Obrigada!!!

“

““

“A verdade vem de DEUS,

A verdade vem de DEUS,A verdade vem de DEUS,

A verdade vem de DEUS,

onde quer que a encontramos,

onde quer que a encontramos,onde quer que a encontramos,

onde quer que a encontramos,

e é nossa”.

e é nossa”. e é nossa”.

e é nossa”.

Richard Sibbes

Richard SibbesRichard Sibbes

Richard Sibbes

SUMÁRIO

LISTA DE FIGURAS

LISTA DE TABELAS

LISTA DE GRÁFICOS

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

RESUMO

ABSTRACT

1. INTRODUÇÃO

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo geral 22

2.2 Objetivos específicos 22

3. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

3.1 Família Mirtaceae 24

3.2 Gênero Psidium 25

3.3 Espécies estudadas 25

3.3.1 Psidium sobraleanum Proença Landrum 25

3.3.2 Psidium myrsinites DC. A 26

3.3.3 Psidium guajava 28

3.4 Levantamento do gênero Psidium 31

4. MATERIAIS E MÉTODOS

4.1 Material vegetal 45

4.2 Obtenção dos óleos essenciais 45

4.3 Análise por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa

(CG/EM)

4.4 Atividade antimicrobiana 48

4.4.1 Difusão em disco 49

4.4.2 Microdiluição 49

4.4.2.1 Concentração Inibitória Mínima (CIM) 49

4.4.2.2 Concentração Fungicida Mínima (CFM) 51

4.5 Modulação 51

4.5.1 Contato gasoso 51

4.5.2 Atividade moduladora 52

4.6 Análise Estatística 54

5. RESULTADOS E DISCUSSÕES

5.1 Levantamento do gênero Psidium 56

5.2 Constituintes químicos dos óleos essenciais 59

5.3 Atividade antibacteriana pelo método de difusão em disco 64

5.4 Atividade antibacteriana pelo método de contato gasoso 68

5.5 Atividade antibacteriana por microdiluição 75

5.5.1 Concentração inibitória mínima (CIM) 75

5.5.2 Atividade moduladora 79

5.6 Atividade antifúngica pelo método de difusão em disco 82

5.7 Atividade antifúngica por microdiluição 85

5.7.1 Concentração inibitória mínima (CIM) 85

5.7.2 Concentração fungicida mínima (CFM) 87

5.7.3 Atividade moduladora 89

6. CONCLUSÃO

REFERÊNCIAS

LISTA DE FIGURAS

Figura

. Foto da espécie Psidium sobraleanum. 26

Figura

A - Foto da espécie Psidium myrsinites 1; B - Foto da espécie Psidium

myrsinites 2 e C - Foto da espécie Psidium myrsinites 3.

Figura

Foto da espécie Psidium guajava. 31

Figura

Extração do óleo pelo método de hidrodestilação, (A) Aparelho tipo

Clevenger e (B) Folhas em processo de extração.

Figura 5.

Metodologia de extração dos óleos essenciais do gênero Psidium. 47

Figura

Métodos de análises microbiológicas. (A) Difusão em Agar; (B)

Contato gasoso; (C) Microdiluição.

Figura 7.

Estruturas dos constituintes químicos majoritários presentes nos óleos

das espécies de Psidium.

LISTA DE TABELAS

Tabela

Publicações sobre espécies de Psidium no período entre 2000 - 2010. 32

Tabela

Composição química

dos óleos essenciais das folhas frescas das

espécies do gênero Psidium.

Tabela

Descrição dos parâmetros de classificação de atividade dos óleos. 64

Tabela

Atividade antibacterina de Psidium sobraleanum, Psidium myrsinites

1, Psidium myrsinites 2, Psidium myrsinites 3 e Psidium guajava pelo

método de difusão em disco.

Tabela

Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium myrsinites 2. 68

Tabela

Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium myrsinites 3. 69

Tabela

Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium myrsinites 1.

Tabela

Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium sobraleanum.

Tabela

Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium guajava.

Tabela

Concentração Inibitória Mínima (CIM)

dos óleos essenciais de

Psidium sobraleanum, Psidium myrsinites 1, Psidium myrsinites 3,

Psidium myrsinites 2 e Psidium guajava.

Tabela 1

Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium sobraleanum.

Tabela

Atividade moduladora do óleo essencial Psidium myrsinites 2.

Tabela

Atividade moduladora do óleo essencial de Psidum guajava.

Tabela

Atividade antifúngica pelo método de difusão em disco dos óleos de

Psidium sobraleanum, Psidium myrsinites 2, Psidium myrsinites 1,

Psidium myrsinites 3 e Psidium guajava.

Tabela

Concentração Inibitória Mínima dos óleos essenciais de Psidium

myrsinites 2, Psidium myrsinites 3, Psidium myrsinites 1, Psidium

sobraleanum e Psidium guajava.

Tabela

Concentração Fungicida Mínima (CFM) dos óleos essenciais das

espécies de Psidium.

Tabela

Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium myrsinites 2.

Tabela

Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium sobraleanum.

Tabela

Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium myrsinites 1.

Tabela

Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium myrsinites 3.

Tabela

Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium guajava.

LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 1.

Espécies do gênero Psidium estudadas nos últimos 10 anos. 57

Gráfico 2

Partes mais estudadas da espécie Psidium guajava. 57

Gráfico 3

Tipo de preparação mais utilizadas nos estudos com Psidium

guajava.

Gráfico 4

Atividades apresentadas pela espécie Psidium guajava nos estudos.

LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS

AMI.

– amicacina;

ATCC

– American Type Culture Collection

BHI

- Brain Heart Infusion;

C.a

–

Candida albicans

CET.

–

Cetoconazol

CFM

–

Concentração Fungicida Mínima

CG/EM

– Cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas;

CIM

– Concentração Inibitória Mínima;

C.k

–

Candida krusei

CLSI/NCCLS

– Clinical and Laboratory Standards Institute

CSD

–

Caldo Sabourand Dextrose

C.t

–

Candida tropicalis

DMSO

– Dimetilsulfóxido;

FIOCRUZ

- Fundação Oswaldo Cruz;

GEN.

– gentamicina;

–

Índice Kovats

INCQS

– Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde;

– litro;

LPPN

– Laboratório de Pesquisa de Produtos Naturais;

- Muller-Hilton;

– milímetros;

– Multiresistente;

OEAA

–

Óleo essencial de Psidium myrsinites 3

OEAE

Óleo essencial de Psidium myrsinites 1

OEAP

–

Óleo essencial de Psidium myrsinites 2

OEAV

–

Óleo essencial de Psidium sobraleanum

–

Óleo essecial de Psidium guajava

PCA

- Plate Count Agar;

PDA

–

Potate Dextrose Agar;

SPSS

Statistical Package for the Social Sciences

TOB.

– tobramicina;

UFC

– Unidade formadora de colônias

UFPB

– Universidade Federal da Paraíba;

µg

– micrograma;

µg/mL

–

micrograma por mililitro

URCA

– Universidade Regional do Cariri;

≥

- maior ou igual a

> - maior que

Porcentagem

RESUMO

As espécies do gênero Psidium apresentam frutos que são muito utilizados para alimentação

pela população. Na medicina popular estas espécies são utilizadas, em processos de

cicatrização por suas propriedades

adstringentes, além disso, são usadas como calmante,

anticonvulsivante, estimulante digestivo e menstrual, antiséptico, antioxidante, depressor do

sistema nervoso central, febrífugo, contra feridas, úlceras, dor de dente, tosse, dor de garganta

e inflamação. O presente trabalho relata o estudo químico e a avaliação das atividades

antimicrobianas apresentadas pelos óleos essenciais de cinco espécies do gênero Psidium. Os

óleos essenciais foram extraídos das folhas frescas de Psidium myrsinites 1 (araçá encarnado),

Psidium myrsinites 2 (araçá preto), Psidum myrsinites 3 (araçá amarelo), Psidium

sobraleanum (araçá de veado) e Psidium guajava (goiaba), por hidrodestilação e os

constituintes químicos identificados por CG/EM. Como compostos majoritários destacam-se

o acetato de nerila (35,7 e 32,7 %), 1,8-cineol (16,2%); δ-cadinol (29,3%) e limoneno

(96,2%). Os óleos essenciais foram avaliados para a atividade antimicrobiana isoladamente e

em interação direta e indireta com os antibióticos aminoglicosídeos e antifúngicos, por

microdiluição e contato gasoso. Os resultados do screening da atividade antimicrobiana

mostraram que todos os óleos obtiveram atividade, mesmo que discreta, frente a todas as

linhagens bacterianas e leveduras. Na atividade moduladora foi observada uma interferência

dos óleos para todos os aminoglicosídeos e antifúngicos analisados por microdiluição e

contato gasoso, sendo observada uma interação sinérgica na maioria das associações com os

óleos. Sendo assim, os óleos essenciais das espécies do gênero Psidium podem vir a ser

potenciais agentes terapêuticos para o tratamento de patologias causadas por agentes

microbianos, atuando como antimicrobiano e modulador das atividades de antibióticos, bem

como fornece uma contribuição para o conhecimento das atividades biológicas das espécies

do gênero Psidium.

Palavras-Chave: óleos essenciais; atividade antimicrobiana; Psidium myrsinites 1; Psidium

myrsinites 2; Psidum myrsinites 3; Psidium sobraleanum ; Psidium guajava.

ABSTRACT

Psidium species are used as food plants by people. In popular medicine, the species are used

in healing process because their astringent properties. Besides this, they are used as

tranquilizer, anticonvulsant, digestive and menstrual stimulant, antiseptic, antioxidant, central

nervous system depressor, febrifugue, wound healing, ulcers, toothache, cough, sore throat

and inflammation. This work reports the chemical study and the antimicrobial activity

evaluation of essential oils from five species of Psidium. The essential oils were extracted by

hydrodistillation from fresh leaves of Psidium myrsinites 1 (araçá encarnado), Psidium

myrsinites 2 (araçá preto), Psidum myrsinites 3 (araçá amarelo), Psidium sobraleanum (araçá

de veado) and Psidium guajava (goiaba). The chemical constituents were identified by

GC/MS. The majoritary compounds found were neryl acetate (35.7 and 32.7%), 1.8-cineole

(16.2%), δ-cadinol (29.3%) and limonene (96.2%). The essential oils were analysed for their

antimicrobial activity alone and the interaction with aminoglycosides antibiotics and

antifungics, by microdillution and gaseous contact assays. The results obtained from

antibacterial screening showed that the five essential oils were active against all bacterial and

yeast strains. On the modulatory activity test, it was observed that the essential oils influenced

the aminoglycosides and antifungic profiles. The synergism of the essential oils and

aminoglycosides was verified too. In conclusion, the essential oils from Psidium species can

be source of potential therapeutic tools to treat infectious diseases, acting as antimicrobial and

modulators of antibiotic activity. This study also provides a contribution to the knowledge of

biological activities from Psidium species.

Key-words: essential oils; antimicrobial activity; Psidium myrsinites 1; Psidium myrsinites 2;

Psidum myrsinites 3; Psidium sobraleanum; Psidium guajava.

INTRODUÇÃO

1. INTRODUÇÃO

A Fitoterapia, do grego therapeia = tratamento e phyton = vegetal, é definida como o

estudo de plantas medicinais e suas aplicações terapêuticas no tratamento e cura de doenças e

vem crescendo notadamente nestes últimos anos (YUNES, PEDROSA e CECHINEL FILHO,

2001).

O uso de plantas no tratamento e na cura de enfermidades é muito antigo (MACIEL

et al., 2002), acredita-se que na China deve ter surgido no ano 3000 a.C. No Brasil, essa

prática também têm sido utilizada durante muito tempo, por grupos indígenas em seus rituais

religiosos e de cura (DI STASI, 2007).

Nos últimos anos tem-se verificado um grande avanço científico envolvendo os

estudos químicos e farmacológicos de plantas medicinais que visam obter novos compostos

com propriedades terapêuticas (CECHINEL e YUNES, 1998), com a finalidade de suprir as

novas exigências de uma população cada vez maior e mais duradoura.

A avaliação do potencial terapêutico de plantas medicinais e de alguns de seus

constituintes, tais como flavonóides, alcalóides, triterpenos, sesquiterpenos, taninos, lignanas,

etc, tem sido objeto de incessantes estudos, onde já foram comprovadas as ações

farmacológicas através de testes pré-clínicos com animais (CALIXTO et al., 1991).

Além disso, produtos oriundos de plantas têm demonstrado potencial antimicrobiano

frente a uma grande variedade de microorganismos, dentre fungos, bactérias e vírus, e

significativa atividade antioxidante (ASOLINI et al., 2006).

Neste contexto, o gênero Psidium se destaca por apresentar espécies com grande

potencial terapêutico e diversas atividades biológicas e farmacológicas, dentre elas: atividade

antioxidante, hepatoprotetora, antitumoral, antimicrobiana, antiinflamatória, e anticestódea

(ABREU et al., 2006; UBOH, OKON e EKONG, 2010; CHEN et al., 2009; NAIR,

KALARIYA e CHANDA, 2007; GONÇALVES et al., 2008; ARIMA e DANNO, 2002;

CHOI et al., 2008; TEMGENMOGLA e ARUN, 2006).

Essas atividades justificam seus usos na medicina popular como antiséptico, no

tratamento de diabetes, antiinflamatórios, contra cáries, como tratamento para diarréia e dores

no estômago devido a indigestão, no tratamento de gastrite e de laringites (MEJÍA e

RENGIFO¸ 2000; MITCHELL e AHMAD, 2006; TEIXEIRA et al., 2003; HOLETZ et al.,

2002).

Sendo assim, esse estudo tem objetivo de avaliar as atividades microbiológicas dos

óleos essenciais de cincos espécies do gênero Psidium, a saber, Psidium guajava, Psidium

sobraleanum, Psidium myrsinites 1, Psidium myrsinites 2 e Psidium myrsinites 3, e identificar

a composição química de seus óleos a fim de validar seu uso como agente terapêutico, para a

síntese e elaboração de novos fitofármacos e/ou fitomedicamentos.

OBJETIVOS

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo geral

Realizar o estudo químico e avaliar as atividades antimicrobianas de cinco espécies do

gênero Psidium.

2.2 Objetivos específicos

• Identificar as espécies, partes das plantas, tipo de preparação e atividades biológicas

do gênero Psidium, na literatura naacional e internacional;

• Extrair e caracterizar quimicamente os óleos essenciais das espécies P. guajava, P.

sobraleanum, P. myrsinites 1, P. myrsinites 2 e P. myrsinites 3;

• Avaliar o espectro de ação e o grau de inibição dos óleos essenciais das cinco

espécies, frente a linhagens de bactérias e fungos;

• Verificar o efeito modificador da atividade antimicrobiana, por contato direto e por

contato gasoso, frente a bactérias e fungos por óleos essenciais.

REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

3. REVISÃO BIBLIOGRÁFIA

3.1 Família Myrtaceae

A família Myrtaceae compreende cerca de 100 gêneros e 3.500 espécies de árvores e

arbustos que se distribuem por todos os continentes, à exceção da Antártica, mas com nítida

predominância nas regiões tropicais e subtropicais do mundo (BARROSO, 1991;

MARCHIORI e SOBRAL, 1997). Todas as mirtáceas brasileiras estão incluídas na Tribo

Myrteae (WILSON et al., 2005), representada por aproximadamente 1.000 espécies.

Esta é uma das famílias mais importantes do Brasil (LANDRUM e KAWASAKI,

1997). Os principais gêneros dessa família são Eucalyptus (500 éspécies); Malaleuca (100

espécies); Eugenia (600 espécies), Myrcia (300 espécies), Syzygium (200 espécies) e Psidium

(100 espécies) (CRONQUIST, 1981; BARROSO e PERÓN, 1994; LANDRUM e

KAWASAKI, 1997).

Os espécimes de Myrtaceae são plantas lenhosas, arbustivas ou arbóreas, com folhas

inteiras, de disposição alterna ou oposta e ás vezes oposta cruzada, com estípulas muito

pequenas. Suas flores são em geral brancas ou às vezes vermelhas, efêmeras hermafroditas, de

simetria radial. Encontram-se inseridos nessa família desde pequenos arbustos de não mais

que 2 m de altura, até grandes árvores com mais de 10m (CRONQUIST, 1981; JOLY, 1977).

A família tem grande importância econômica, uma vez que várias espécies são

utilizadas na alimentação, fornecem madeiras, possuem propriedades medicinais e potencial

ornamental. Entre as espécies apreciadas por seus frutos temos a goiaba (Psidium guajava L.),

a uvaia (Eugenia uvalha L. e E. pyriformes L.), a pitanga (E. uniflora L.), a cerejeira (E.

bracteata Vell.), o jambo (Syzygium jambos (L.) Alston), além da jaboticaba (Plinia

cauliflora L.) e do cambuci (Campomanesia phaea (O. Berg) Landrum), também utilizadas

na fabricação de licores (BARROSO 1991; KAWASAKI e LANDRUM, 1997).

Várias espécies de Psidium são utilizadas popularmente para aliviar disenterias, como

anestésicos e por apresentar atividade fungicida (Psidium acutangulum DC.). Algumas

espécies, como o cravo (Syzygium aromaticum L.) Merr.) e a pimenta (Pimenta oficinalis

Lindl.), fornecem condimentos. Entre as grandes produtoras de madeira e também de anti-

sépticos, destacam-se várias espécies de Eucalyptus L´Her. Além disso, espécies ornamentais

merecem destaque como, Myrtus communis L., na confecção de grinaldas e também algumas

espécies de Melaleuca L., na arborização urbana (ALMEIDA et al., 1998; BARROSO, 1991;

JUDD et al., 2002; KAWASAKI e LANDRUM, 1997; MILES et al., 1991; SILVA, 1998).

3.2 Gênero Psidium

O gênero Psidium inclui aproximadamente 150 espécies, que são todas árvores

frutíferas ou arbustos (JAISWAL e JAISWAL, 2005). O termo araçá é usado no Brasil para se

referir a espécies de Psidium silvestres, entre as quais P. cattleyanum Sab., P. incanescens

Martius, P. gradiflorum Martius e P. arboretum Vell. que são espécies nativas da América do

Sul (RASEIRA e RASEIRA, 1996).

As espécies desse gênero podem variar de subarbustos a árvores, com ramos não

dicotômicos e casca cinza e lisa, flores solitárias, axilares ou em partes dos ramos, sem folhas

ou dicásios 3-7 flores. Bractéolas decíduas ou persistentes após a antese. Cálice

completamente fechado no botão, rompendo-se na antese em 3-5 lobos irregulares,

eventualmente decíduos; pétalas presentes; ovário 3-10-locular, com muitos óvulos por

lóculo; hipanto presente. Frutos plurisseminados, coroados por vestígios do cálice ou cicatriz

circular; sementes numerosas, com testa óssea e embrião mirtóide (MCVAUGH, 1969).

3.3 Espécies estudadas

3.3.1 Psidium sobraleanum Proença Landrum

A espécie Psidium sobraleanum Proença Landrum, é uma espécie conhecida

popularmente como araçá de veado e está presente na região da Chapada do Araripe, no

estado do Ceará. Entretanto, há indícios que se trata de uma espécie nova, motivo pelo qual

não há registros de sua existência na literatura.

3.3.2 Psidium myrsinites

DC.

A espécie

Psidium myrsinites

(PINTO, LENZA, e

PINTO

nos estados

de Goiás, Bahia, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Tocantins,

Ceará, Maranhão,

no cerrado brasileiro e em áreas de encosta (

JÚNIOR, 2005).

O nome araçá vem do tupi

significa fruta com olhos ou olhos no céu (

SILVA JÚNIOR, 2005).

Psidium myrsinites

apresenta

terminais glabros, troncos com até 21 cm de diâmetro; ritidoma acinzentado ou castanho liso,

com depressões de placas irregulares que se desprendem do tronco; folhas simples, opostas,

cruzadas, el

ípticas de 6 a 16 cm de comprimento e 3

coriáceas; discolores, mais claras na face inferior, as flores

com cinco pétalas livres, de cor branca

as sementes são esfer

óides,

Os frutos servem de alimentação para a fauna e também são utilizados pelo homem, para

consumo in natura

e na forma de iguarias region

DC.

Psidium myrsinites

DC. A. apresenta sinonímia com

PINTO

, 2009) e

é conhecida popularmente como araçá

de Goiás, Bahia, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Tocantins,

no cerrado brasileiro e em áreas de encosta (

FRAZON

O nome araçá vem do tupi

ara´sa, ou do guarani ara

(céu), e

significa fruta com olhos ou olhos no céu (

DONADIO,

MORO e SERVIDONE

apresenta

se na forma de árvore com copa com ramos e gemas

terminais glabros, troncos com até 21 cm de diâmetro; ritidoma acinzentado ou castanho liso,

com depressões de placas irregulares que se desprendem do tronco; folhas simples, opostas,

ípticas de 6 a 16 cm de comprimento e 3

a 8 cm de largura.

coriáceas; discolores, mais claras na face inferior, as flores

possuem

com cinco pétalas livres, de cor branca

, os frutos tem

até 2 cm de comprimento, piriformes,

óides,

muitas por fruto (SILVA JÚNIOR, 2005).

Os frutos servem de alimentação para a fauna e também são utilizados pelo homem, para

e na forma de iguarias region

ais como doces e gelé

Figura 1: Foto da espécie Psidium sobraleanum

Fonte: Foto da autora

Psidium myrsinoides

é conhecida popularmente como araçá

, está distribuída

de Goiás, Bahia, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Tocantins,

FRAZON

et al., 2009; SILVA

(céu), e

aza (olho), que

MORO e SERVIDONE

, 2002;

se na forma de árvore com copa com ramos e gemas

terminais glabros, troncos com até 21 cm de diâmetro; ritidoma acinzentado ou castanho liso,

com depressões de placas irregulares que se desprendem do tronco; folhas simples, opostas,

a 8 cm de largura.

As folhas são

até 2 cm de diâmetro

até 2 cm de comprimento, piriformes,

Os frutos servem de alimentação para a fauna e também são utilizados pelo homem, para

ais como doces e gelé

ias. A espécie tem

potencial para o paisagismo, principalmente pela linda folhagem, e é útil para a recuperação

de áreas degradadas, por atrair aves dispersoras de sementes (FRAZON et al., 2009; SILVA

JÚNIOR, 2005).

Algumas espécies nativas de araçá também vêm despertando a atenção da indústria

farmacêutica, pois as frutas são ricas em vitaminas e em substâncias antioxidantes, entre

outras, como óleos essenciais que podem ser extraídos das folhas e de outras partes da planta.

Um estudo, com a espécie P. myrsinites, indicou a presença do composto linalol na

composição química de suas folhas, que desperta interesse na indústria de cosmético e

perfumes devido à utilização dessa substância como fixador (FRAZON et al., 2009).

Na medicina popular a espécie P. myrsinites é utilizada para cicatrização, devido a suas

propriedades adstringentes e contra a diarréia (SOUZA et al., 2004; SOUZA e FELFILI,

2006), no entanto, poucos estudos relatam as atividades e a composição química dessa

espécie.

Nesse estudo, P. myrsinites é relatada com três possíveis quimiotipos, ou seja, a mesma

espécie apresentando óleos essenciais com variações qualitativas e quantitativas, indicando

que essas espécies podem apresentar atividades distintas, bem como diferenças morfológicas

(TAVARES et al., 2005).

Outros estudos com o óleos essenciais de quimiotipos diferentes tem sido relatados, como

no caso das espécies de Lippia alba, Ocimum gratissimum, Mentha piperita, Rosmarinus

officinalis (TAVARES et al., 2005; VIANNA, 2009; SOUSA et al., 2004a; MAFFEI,

MUCCIARELLI e SCANNERINI, 1993), indicando que fatores ambientais podem afetar as

características morfológicas e químicas de espécies vegetais.

A espécie P. myrsinites, foi estudada com seus três quimiotipos, conhecidos

popularmente como araçá encarnado, araçá preto e araçá amarelo. Neste trabalho foram

denominadas como: P. myrsinites 1 (araçá encarnado); P. myrsinites 2 (araçá preto) e P.

myrsinites 3 (araçá amarelo).

3.3.3 Psidium guajava L.

Psidium guajava

é considerada nativa do México

longo da

América do Sul, Europa, África e Ásia. A espécie cresce em todas as áreas tropicais

e subtropicais do mundo e adapta

áridos. É uma árvore pequena, que pode atingir 10m de altura e apresenta

pecioladas de

forma oval com lâmina proeminente

comprimento.

As flores são pouco vistosas,

numerosos (STONE

, 1970)

aproximadamente 5 cm

numerosas sementes branc

Esta é denominada comumente de goiabeira em português,

espanhol (LOZOYA

et al.

espontaneamente

em terrenos baldios, pastos e margem de estradas.

cultivada, em razão

de seus

comerciais para a

indústria alimentícia (

Os frutos da goiabeira (

devido às suas boas características organolépticas (sabor e aroma) como também nutricionais,

sendo considerados, portanto, alta fonte de vitamina C, teores de vitamina A e do grupo B,

Figura 2: A -

Foto da espécie

é considerada nativa do México

(RIOS et al

., 1977)

América do Sul, Europa, África e Ásia. A espécie cresce em todas as áreas tropicais

e subtropicais do mundo e adapta

se a condições climáticas diferentes, mas prefere climas

áridos. É uma árvore pequena, que pode atingir 10m de altura e apresenta

forma oval com lâmina proeminente

nervuras pinadas, 5

As flores são pouco vistosas,

pétalas

esbranquiçadas até 2 cm

, 1970)

. Os frutos são globosos, amarelo

s e

diâmetro e possuem um mesocarpo

rosa comestível

pequenas (GUTIÉRREZ, MITCHELL e

SOLIS

Esta é denominada comumente de goiabeira em português,

guava

em inglês e

et al.

, 2002) e é uma das

espécies mais comuns, crescendo

em terrenos baldios, pastos e margem de estradas.

de seus

frutos comestíveis,

em pomares domésticos ou plantações

indústria alimentícia (

LORENZI, 1992).

Os frutos da goiabeira (

P. guajava

L.) se destacam dentre os frutos tropicais não só

devido às suas boas características organolépticas (sabor e aroma) como também nutricionais,

sendo considerados, portanto, alta fonte de vitamina C, teores de vitamina A e do grupo B,

Foto da espécie

Psidium myrsinites 1; B - Foto da espécie

Psidium

Foto da espécie Psidium myrsinites 3

Fonte: Foto da autora

., 1977)

, mas estende-se ao

América do Sul, Europa, África e Ásia. A espécie cresce em todas as áreas tropicais

se a condições climáticas diferentes, mas prefere climas

áridos. É uma árvore pequena, que pode atingir 10m de altura e apresenta

folhas opostas,

nervuras pinadas, 5

-15 cm de

esbranquiçadas até 2 cm

e estames

s e

carnudos, com

rosa comestível

, que contém

SOLIS

, 2008).

em inglês e

guayabo em

espécies mais comuns, crescendo

em terrenos baldios, pastos e margem de estradas.

Ela é freqüentemente

em pomares domésticos ou plantações

L.) se destacam dentre os frutos tropicais não só

devido às suas boas características organolépticas (sabor e aroma) como também nutricionais,

sendo considerados, portanto, alta fonte de vitamina C, teores de vitamina A e do grupo B,

Psidium

myrsinites 2 e C -

como a tiamina e a niacina, fibras e minerais como fósforo, ferro e cálcio (VIEIRA et al.,

2008), possuem ainda alto conteúdo de licopeno, um importante carotenóide que ajuda no

combate a doenças cardiovasculares e possui características funcionais anticancerígenas

(BRAMLEY, 2002; LERICI, NICOLI e ANESE, 2000; SHI et al., 1999; VIEIRA et al.,

2008). Além dessas características benéficas, a goiaba é um fruto com excelente aceitação

para o consumo natural e de grande importância na indústria, em virtude do seu

aproveitamento na forma de vários produtos, como goiabadas, geléias, pastas, fruta em calda,

purê, alimento para criança, base para bebidas, refrescos, sucos e xaropes (VIEIRA, et al.,

2008).

Segundo Soubihe Sobrinho (1956) e Koller (1979), a goiabeira adapta-se aos mais

variados tipos de solo, entretanto devem ser evitados solos “pesados” e com drenagem

deficiente. Os solos mais propícios ao cultivo dessa árvore são aqueles areno-argilosos,

profundos, permeáveis, ricos em matéria orgânica e com pH em torno de 5,5 a 6,0 (MAIA,

GARCIA e LEITE, 1988; MEDINA, 1988). Além disso, fatores como condições climáticas,

práticas de plantio, o cultivar utilizado e o manuseio pós-colheita influenciam a vida útil e a

qualidade das frutas frescas da goiaba (PEREIRA et al., 2005).

Esta espécie é reconhecida popularmente como medicinal, sendo utilizada contra cólicas e

diarréias, tendo também ação diurética, além disso, o chá feito das folhas também é muito

utilizado para câimbras (MORALES et al., 1994, ALMEIDA et al., 1995; CARVALHO et

al., 2002; LUTTERODT, 1989; LOZOYA et al., 2002).

As frutas, folhas e cascas são tradicionalmente usadas como medicamentos herbácios e

incluem muitos usos terapêuticos inclusive amebicida, analgésico, vermífugo, anti-malarial,

antibacteriano, antiespasmódico, adstringente, antiinflamatório, contra algumas doenças

psíquicas e hiperglicemia. Outros usos medicinais documentados são calmante,

anticonvulsivante, estimulante digestivo e menstrual, antiséptico, antioxidante, depressor do

sistema nervoso central, febrífugo e um remédio tropical para infecções de orelha e olhos

(PENG, HSIEH e CHEN, 2008). Na parte do nordeste da Índia, Naga, várias tribos utilizam a

decocção das folhas frescas de P. guajava como um remédio para infecções contra vermes

intestinais (TEMGENMOGLA e ARUN, 2006).

Os extratos de raízes, cascas e folhas são usados para tratar gastroenterites, disenteria,

feridas, úlceras, dor de dente, tosse, dor de garganta, inflamação e várias outras condições

(MORTON, 1987).

Diversos estudos indicam a presença de óleo essencial nas folhas de P. guajava,

entretanto, essa composição química pode variar de acordo com a região onde ocorre a coleta.

Segundo Lima et al. (2009), a caracterização do óleo essencial por CG-EM, revelou a

presença de α-terpineol (0,9%), 1,8-cineol (7,0%), ß-cariofileno (7,2%) e óxido de cariofileno

(13,8%). Outros compostos como α-humuleno, ß-guaieno (CRAVEIRO et al., 1981;

OGUNWANDE et al., 2003; SILVA et al., 2003), ß-bisaboleno, aromadendreno, p-selineno,

α-pineno e trans-cariofileno (PINO et al., 2001; LI, CHEN e LUO, 1999; CHEN et al., 2007;

COLE e SETZER, 2007), têm sido descritos também para o óleo essencial de P. guajava.

Além do óleo essencial, as folhas de P. guajava apresentam compostos como

aminoácidos, triterpenóides (ácido oleânico, ácido ursólico, ácido catecólico, ácido

guayavólico, ácido maslínico, ácido elágico), esteróides, compostos fenólicos, saponinas,

carotenóides, ácidos voláteis [(E)- ácido cinamico e (Z)-3-ácido hexenóico], ácidos graxos,

cumarinas, taninos, flavonóides, β-sitosterol e lectinas (OPUTE, 1978; CUELLAR, LARA e

ZAYAS, 1984; IDSTEIN, BAUER e SCHREIER, 1985; MERCADANTE, STECK e

PFANDER, 1999; GUPTA, 1995; GONÇALVES et al., 2008; TEMGENMOGLA e ARUN,

2006; CHOMNAWANG et al., 2005; CORREA, 1984; ALONSO, 1998).

A atividade antimicrobiana de P. guajava é relatada em diversos estudos (JAIARJ et

al., 1999;

CHOMNAWANG et al., 2005; QADAN et al., 2005;

ROBBERS, SPEEDIE e

TYLER, 1997;

VIEIRA et al., 2001;

CÁRCERES et al., 1993; SANTOS et al., 1998; LIMA

et al., 2010), onde se destacam a atividade dos extratos aquoso, hidroalcóolico e metanólico

sobre as linhagens de Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Sarcina lutea, Serratia

marcescens, Shigella flexneri, Staphylococcus albus, Staphylococcus aureus, Salmonella

enteritidis, e Bacillus cereus e atividade antifúngica contra Candida albicans, Candida krusei,

Candida parapsilosis e Candida stellatoidea e Aspergillus fumigatus, Arthrinium sacchari e

Chaetomium funicola (SANTOS et al., 1998; NASCIMENTO et al., 2000; GNAN e

DEMELLO, 1999; CÁRCERES et al., 1991, SATO et al., 2000).

Outras atividades como hipoglicemiante (JAIARJ et al., 1999); efeito anti-

proliferativo, antioxidante (MANOSROI, DHUMTANOM e MANOSROI, 2006;

SACCHETTI et al., 2005; HSIEH et al., 2007), anticarciogênico (CHEN et al., 2008),

atividade antinociceptiva (SHAHEEN et al., 2000; SANTOS et al., 1998; LUTTERODT,

1989), dentre outras, são relatadas para essa espécie.

3.4

Levantamento do gênero

O gênero Psidium

, conforme citado anteriormente, é constituído por mais de 150

espécies que são utilizadas há muitos anos com diversos fins. O levantamento

estudo relata as

espécies mais estudadas do gênero

preparação,

atividades biológicas e farmacológicas

As informações contidas

nos últimos 10 anos (2000 a 2010),

disponíveis

na base de dados do sistema CAPES, através do acesso a mais de 50 revistas

indexadas. Outros bancos

de dados como o PubMed, Scirus, Scielo e Bireme

utilizados.

Figura 3:

Levantamento do gênero

Psidium

, conforme citado anteriormente, é constituído por mais de 150

espécies que são utilizadas há muitos anos com diversos fins. O levantamento

espécies mais estudadas do gênero

Psidium

, bem como

atividades biológicas e farmacológicas

encontradas.

As informações contidas

nesse levantamento estão baseadas

nos trabalhos publicados

nos últimos 10 anos (2000 a 2010),

foram obtidas através de pesquisa em periódicos

na base de dados do sistema CAPES, através do acesso a mais de 50 revistas

de dados como o PubMed, Scirus, Scielo e Bireme

Figura 3:

Foto da espécie Psidium guajava

Fonte:

http://www.sulfotoclube.net

, conforme citado anteriormente, é constituído por mais de 150

espécies que são utilizadas há muitos anos com diversos fins. O levantamento

realizado neste

, bem como

, as partes, tipo de

nos trabalhos publicados

foram obtidas através de pesquisa em periódicos

na base de dados do sistema CAPES, através do acesso a mais de 50 revistas

de dados como o PubMed, Scirus, Scielo e Bireme

, também foram

Tabela 1. Publicações sobre espécies de Psidium no período entre 2000 - 2010.

Espécie Parte Tipo de material Atividade Composição Referência

P. guajava Folhas Extrato aquoso

Atividade antioxidante - ABREU et al., 2006

Possível efeito vasoconstritor -

OLATUNJI-BELLO et al.,

2007

Potente atividade

anticoagulante

Ácido ferúlico, ácido

gálico e quercetina

HSIEH et al., 2007

Atividade antibacteriana -

PESEWU, CUTLER e

HUMBERA, 2008

Agente anti-LDL - HSIEH et al., 2007

Atividade antioxidante

Flavonóides e

compostos fenólicos

CHEN et al., 2007

Propriedade hepatoprotetora -

SAMBO, GARBA e

TIMOTHY, 2009

Atividade hepatoprotetora

Alcalóides,flavonóides,

glicosídeos, polifenóis,

saponinas e taninos

UBOH, OKON e

EKONG, 2010

Efeito hiperglicêmico quercetina

CHENG, SHEN e BEAWU,

2009

Atividade antidiarréica em

ratos

OJEWOLE, AWE e

CHIWORORO, 2008

Atividade anti-cancêr

quimiopreventiva

Compostos fenólicos PENG et al., 2010

Atividade anticancêr

Compostos fenólicos,

flavonóides e ácido

gálico

CHEN et al., 2007

Atividade hepatoprotetora

Carboidratos, taninos,

flavonóides, saponinas,

esteróides, proteínas

ROY, KAMATH e ASAD,

2006

(Cont.)

P. guajava Folhas

Extrato aquoso

Atividade

antidiarréica

Quercetina BIRDI et al., 2010

Atividade

antitumoral

Ácido gálico,

catequina,

epicatequina, rutina,

quercetina.

CHEN et al., 2009

Efeito espasmolítico

Flavonóides e

terpenóides

CHIWORORO e

OJEWOLE, 2009

Atividade anti -

hiperglicêmica

DEGUCHI e MIYAZAKI,

2010

Atividade anti-

rotavirus de símio

Taninos e

flavonóides

GONÇALVES et al., 2005

Efeito bacteriostático

sobre S. sanguinis, S.

mitis e Actinomyces

sp.

- FATHILAH et al., 2009

Extrato etanólico,

acetato de etila,

butanol e metanol

Atividade

antioxidante

TACHAKITTIRUNGROD

et al., 2007

Extrato de

acetona/éter de

petróleo

Inibição de α-amilase

pancreática

- KARTHIC et al., 2008

Extrato acetona/água

Atividade contra P.

acnes

- QADAN et al., 2005

(Cont.)

P. guajava Folhas

Extrato metanílico,

acetona e N-

dimetilformaldeído

Atividade

antimicrobiana

intensa contra

bactérias Gram-

positivas e fungos e

atividade

antibacteriana

moderada contra

bactérias Gram-

negativas

NAIR e CHANDA,

2007

Extrato hexânico

Atividade

antibacteriana contra

S. aureus e E. coli

GONÇALVES et al.,

2008

Extrato acetato de

etila

Atividade

antibacteriana contra

S. aureus e E. coli

GONÇALVES et al.,

2008

Extrato aquoso,

etanólico

Inibição da liberação

de cálcio intracelular

Taninos, antocianinas,

alcalóides, flavonóides,

esteróides e

triterpenóides

BELEMTOUGRI et

al., 2006

Extrato

Hidrometanólico

Atividade

antibacteriana frente

a B. cereus e S.

enteritidis de isolados

Morina-3-O-α-L-lix-o-

piranosideo Morina-3-

O-α-L-arab-o-

piranosideo;

Guaijavarina e

quercetina

ARIMA e DANNO,

2002

(Cont.)

P. guajava Folhas

Extrato metanólico,

acetato e aquoso

Atividade

antibacteriana frente

a três linhagens de S.

aureus resistente a

multidrogas

- ANAS et al., 2008

Extrato

hidroalcoolico

Atividade antifúngica

sobre cepas de C.

albicans e atividade

antibacteriana sobre

linhagens de

Streptococcus

ALVES et al., 2009

Diminui o

inotropismo do

miocardio

Taninos, fenóis,

triterpenos,

carotenóides, ácido

ascórbico

GARCIA,

NASCIMENTO e

SANTOS, 2003

Atividade antifúngica

sobre o gênero

Candida

- ALVES et al., 2006

Atividade

antimicrobiana

Cumarinas,

flavonóides,

triterpenóides e

elagitaninos

NASCIMENTO et al.,

2000

Atividade

antimicrobiana

- HOLETZ et al., 2002

Atividade

antiproliferativa

Quercetina KAWAKAMI et al., 2009

Extrato aquoso e

etanólico

Atividade contra E.

coli

VORAVUTHIKUNCHAI

et al., 2004

(Cont.)

P. guajava Folhas

Extrato metanol /

diclorometano e

aquoso

Atividade contra

microorganismos

que causam

infecções urogenitais

e sexualmente

transmissíveis

- VUUREN e NAIDOO, 2010

Extrato etanólico

Efeito inibitório

sobre glicoproteína P

- JUNYAPRASERT et al., 2006

Atividade

espamilítica

Ácido-20β-acetoxi-

2α,3β-dihidroxi-urs-

12-en-28-oico

BEGUM et al., 2002

Atividade

bacteriostática

PACHANAWAN,

PHUMKHACHORN e

RATTANACHAIKUNSOPON,

2008

Atividade

antioxidante

Ácido elágico MASUDA et al., 2003

Atividade

antioxidante

Compostos

fenólicos

LING et al., 2010

Atividade

antioxidante

Açúcares redutores;

flavonóides;

terpenóides;

saponinas; taninos e

glicosídeos

cardíacos

AYOOLA et al., 2008

Atividade

antiinflamatória

- CHOI et al., 2008

(Cont.)

P. guajava Folhas

Extrato etanólico

Atividade anti-stress -

LAKSHMI e

SUDHAKAR, 2009

Efeito bacteriostático

sobre S. mutans

Taninos

LIMSONG,

BENJAVONGKULCHAI

KUVATANASUCHATI,

2004

Extrato metanólico

Atividade

antidiabética em

ratos

- OH et al., 2005

Atividade

anticestódea

TEMGENMOGLA e

ARUN, 2006

Atividade contra S.

mutnas

Quercetina-3-O-α-L-

arabin-o-piranosideo

PRABU, GNANAMANI,

e SADULLA, 2006

Atividade

antibacteriana

- BETONI et al., 2006

Atividade

antibacteriana contra

S. aureus e E. coli

GONÇALVES et al.,

2008

Atividade

antibacteriana frente

a isolados

mutiresistentes

Gram-positivos

negativos

- CHAH et al., 2006

Atividade

antibacteriana e

antidiarréica

LIN, PUCKREE e

MVELASE, 2002

(Cont.)

P. guajava Folhas

Óleo essencial

Atividade

antibacteriana contra

S. aureus e S.

anatum

- GONÇALVES et al., 2008

Atividade repelente

contra baratas

- THAVARA et al., 2007

Moderado efeito

repelente contra o

mosquito Anopheles

stephensi Liston

Cariofileno, α-

pineno e eucaliptol

RAJKUMAR e JEBANESAN,

2007

Atividade

antiinflamatória

- KAMATH et al., 2008

Atividade

antimicrobiana

Morina, Morina-3-

O-lix-osideo,

Morina-3-O-arabin-

osideo, Quercetina,

e Quercetina-3-O-

arabinosideo

RATTANACHAIKUNSOPON

e PHUMKHACHORN, 2007

Cápsula

Efeito anti-

espasmódico a nível

clínico

Quercetina LOZOYA et al., 2002

P. guajava Casca

Extrato aquoso e

metanólico

Atividade

antimicrobiana

frente: B. subtilis;S.

aureus;E. coli; P.

aeruginosa; K.

pneumoniae; P.

vulgaris

Alta concentração

de taninos e baixa

concentração de

saponinas

ABDELRAHIM et al., 2002

(Cont.)

P. guajava Casca

Extrato aquoso

Efeito citotóxico -

BRANDELLI et al.,

2009

Atividade anti-

rotavirus de símio

GONÇALVES et al.,

2005

Extrato metanol

Baixa toxicidade

frente Artemia salina

AJAIYEOBA et al.,

2006

P. guajava Fruto

Extrato metanólico

Atividade

antioxidante

Compostos fenólicos,

pectinas

MAHATTANATAWEE

et al., 2006

Extrato metanólico e

diclorometano

Atividade

antioxidante

- THAIPONG et al., 2006

Extrato

hidroalcoolico

Atividade

antioxidante e

antimicrobiana

Taninos e

flavonóides

IHA et al., 2008

Suco

Efeito hiperglicêmico

em coelhos

- AGUILAR et al., 2003

Polpa -

Limoneno,

eucaliptol, geraniol,

α-pineno, α-ocimeno,

linalol, cariofileno, β-

cariofileno, β-

nerodiol, óxido de

cariofileno, dentre

outros.

CARASEK e

PAWLISZYN, 2006

(Cont.)

P. guajava Fruto

Casca e polpa

liofilizados

Atividade

antioxidante

JIMENEZ-ESCRIG

et al., 2001

Inibi a adesão de E.

coli em células

epiteliais

Lectinas

RODRÍGUEZ,

CRUZ e RÍOS, 2001

P. guajava Casca do fruto

Atividade

antioxidante

Compostos fenólicos

MARQUINA et al.,

2008

Extrato aquoso

Efeito hiperglicêmico

em ratos

- RAI et al., 2007

Atividade

hipolipidêmica,

hipoglicemiante e

antidiabética

RAI, MEHTA e

WATAL, 2010

P. guajava Sementes Extrato acetona -

1-O-3,4-dimetoxi-

fenil-etil-4-O-3,4-

dimetoxi, Cinamoil-6-

O-cinamoil-b-D-

glucopiranose

SALIB e MICHAEL,

2004

P. guajava Broto

Extrato aquoso,

metanpolico e

acetona

Atividade

microbicida frente a

E. coli e S. aureus

- VIEIRA et al., 2001

(Cont.)

P. guajava

Folha, raiz e casca do

caule

Extrato aquoso e

hidroalcoolico

Atividade

antibacteriana frente

S. aures e B. subtilis

Flavonóides,

esteróides e

triterpenóides

SANCHES et al.,

2005

P. guajava -

Óleo essencial

Prolonga o efeito

sedativo

- FAUTH et al., 2002

Inibição de

proliferação da

leucemia e de células

de carcinoma humano

BAKKALI et al.,

2008

Extrato metanólico

Atividade antifúngica

contra A. sacchari e

C. funicola

- SATO et al., 2000

Atividade

antibacteriana

Taninos, saponinas,

flavonóides e

glicosídeos

CHERUIYOT,

OLILA e

KATEREGGA, 2009

Extrato

Atividade antifúngica

contra C. albicans

MENEZES et al.,

2009

Extrato

diclorometano/metanol

Atividade anti-

inflamatória e anti-

tumoral

- KAILEH et al., 2007

Extrato aquoso

Efeito antiadesivo

sobre colonizadores

de placa dental

RAZAK, OTHMAN

e RAHIM, 2006

Agente antiglicativo - HSIEH et al., 2007

Extrato

etanólico

Atividade

antimicrobiana

HEMA,

KUMARAVEL e

ELANCHEZHIYAN,

2009

(Cont.)

Psidium cattleianum

Folhas

Extrato aquoso

Atividade

antibacteriana

BRIGHENTI et al.,

2007

Extrato hidroalcoolico

Não apresenta

atividade mutagênica

nem tem efeito

citotóxico

- COSTA et al., 2008

Partes aéreas Extrato metanólico

Atividade

antimicrobiana

- SOUZA et al., 2004

Frutos Óleo essencial

Atividade

antioxidante

β-cariofileno (22,5%),

neo-intermedeol

(14,2%), α-humuleno

(7,5%) e β-selineno

(10,1%)

MARIN et al., 2008

Polpa dos frutos Óleo essencial -

α-pineno, (Z)-3-

hexenol, (E)-β-

cariofileno, ácido

hexadecanóico

PINO et al., 2001

Psidium guineensis

Fruto

Fonte de compostos

bioativos

Quercetina, ácido

elágico

GONÇALVES,

LAJOLO e

GENOVESE 2010

Polpa congelada

Fonte de compostos

bioativos

Flavonóides e ácido

elágico livre

GONÇALVES et al.,

2010

- Óleo essencial

Atividade

anticonvulsivante

ALMEIDA,

NAVARRO e

BARBOSA-FILHO,

2001

- Óleo essencial

Prolonga o efeito

sedativo

- FAUTH et al., 2002

(Cont.)

Psidium pohlianum

Folhas Óleo essencial Atividade analgésica -

ALMEIDA,

NAVARRO e

BARBOSA-FILHO,

2001

- Óleo essencial

Prolonga o efeito

sedativo

- FAUTH et al., 2002

- Óleo essencial

Atividade

anticonvulsivante

ALMEIDA,

NAVARRO e

BARBOSA-FILHO,

2001

Psidium

friedrichsthalianum

Polpa dos frutos Óleo essencial -

(E)-β-cariofileno, α-

terpineol, α-pineno,

α-selineno, β-

selineno, α-copaeno

PINO, MARBOT e

VAÄZQUEZ, 2002

Psidium salutare Frutos Óleo essencial -

Limoneno, mirceno,

α-pineno

PINO, MARBOT e

VAÄZQUEZ, 2002

Psidium

rotundatum

Folhas Óleo essencial

Atividade inseticida

frente as larvas de

Aedes aegypti

1,8-cineol (28,0%); α-

pineno (18,3 %)

AGUILERA et al.,

2003

- Dados não especificados.

MATERIAL E MÉTODOS

4. MATERIAL E MÉTODOS

4.1 Material vegetal

As folhas de Psidium sobraleanum, Psidium myrsinites 1 , Psidium myrsinites 2 e

Psidium myrsinites 3 foram coletadas na fazenda Barreiro Grande, na Chapada do Araripe,

no município de Crato, Ceará. As folhas de Psidium guajava foram coletadas no Horto de

Plantas Medicinais e Aromáticas do Laboratório de Pesquisa de Produtos Naturais – LPPN,

da Universidade Regional do Cariri – URCA. Todas as amostras foram coletadas no horário

de 8 ás 10 horas da manhã.

As identificações botânicas dos espécimes foram realizadas pelo professor Dr. Marcos

Eduardo Guerra Sobral, da Universidade Federal de São João del-Rei – UFSJ, Minas Gerais,

e pela professora Dr

Carolyn Elinore Barnes Proença, da Universidade de Brasília – UNB,

Brasília.

As exsicatas encontram-se depositadas no Herbário Caririense Dárdano de Andrade-

Lima – HCDAL da Universidade Regional do Cariri – URCA, sob registro: Psidium guajava

L. (# 3930), Psidium myrsinites DC. A. (#4837, # 4838 e # 4839), Psidium sobraleanum

Proença Landrum (# 4840).

4.2 Obtenção do óleo essencial

As folhas frescas de Psidium sobraleanum (404 g), Psidium myrsinites 2 (512g),

Psidium myrsinites 3 (229g), Psidium myrsinites 1 (363 g) e Psidium guajava (400g) foram

colocadas, separadamente, em balão de vidro de 5 L, acrescida de 3 L de água destilada e

aquecida á destilação por 2 horas, em equipamento tipo Clevenger (Fig. 4). Em seguida, a

mistura água/óleo obtida foi separada, tratada com sulfato de sódio anidro e filtrada, o óleo

obtido foi mantido em refrigeração até o momento das análises (Fig. 5).

Figura 4.

Extração do óleo pelo método de hidrodestilação, (A) Aparelho tipo Clevenger

(B) Folhas em processo de extração.

(A) Aparelho tipo Clevenger

Extração do óleo pelo método de hidrodestilação, (A) Aparelho tipo Clevenger

(B) Folhas em processo de extração.

(A) Aparelho tipo Clevenger

(B) Folhas em processo de extração

Foto da autora

Extração do óleo pelo método de hidrodestilação, (A) Aparelho tipo Clevenger

(B) Folhas em processo de extração

Foto da autora

Figura 5. Metodologia de extração dos óleos essenciais do gênero Psidium.

Material vegetal

(Folhas frescas)

Hidrolato Óleo / Água

Óleo

Tratado com sulfato de

sódio anidro (Na

) e

filtrado

Óleo essencial

Análise por

CG/EM

Solução aquosa

Desprezada

Extração por hidrodestilação

(aparelho tipo Clevenger)

4.3 Análise por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG/EM)

A análise da composição química dos óleos voláteis foi realizada em equipamento

Shimadzu CG-17A / EM QP5050A (sistema de CG/EM): DB-5HT, nas seguintes condições:

coluna de capilaridade (30 m x 0,251 mm); gás de transporte: hélio 1,7 mL/min; pressão da

coluna 107,8 kPa; velocidade linear = 47,3 cm/seg; fluxo total 24 mL/min; fluxo de

transportador 24 mL/min; temperatura do injetor 270 ºC; temperatura de detector 290 ºC;

temperatura da coluna 60 (2min) - 180 ºC (1min) a 4 ºC/min, então 180 - 260 ºC a 10 ºC/min

(10 min), operando com energia de ionização de 70 eV.

A identificação das substâncias foi realizada pela interpretação dos respectivos

espectros e por comparação com dados obtidos na literatura (ADAMS, 2001; ARIMURA

2004).

4.4 Atividade antimicrobiana

Os óleos essenciais obtidos foram submetidos à avaliação da atividade antimicrobiana

por meio de 3 métodos distintos: difusão em disco (Fig. 2 A), contato gasoso (Fig. 2 B) e

microdiluição (Fig. 2 C). Os ensaios foram realizados com seis linhagens bacterianas e três

cepas de leveduras padrões. As linhagens bacterianas utilizadas foram: Staphylococcus aureus

ATCC 12692; Escherichia coli ATCC 25922; Bacillus cereus ATCC 33018; Pseudomonas

aeruginosa ATCC 15442 e as linhagens multiresistentes isoladas de material clínico:

Staphylococcus aureus 358 e Escherichia coli 27. Os fungos utilizados foram: Candida

albicans ATCC 40006, Candida krusei ATCC 6538 e Candida tropicalis ATCC 40042.

As linhagens bacterianas padrões utilizadas, exceto as multiresistentes, foram cedidas

pelo Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS) da Fundação Oswaldo

Cruz (FIOCRUZ), Ministério da Saúde. Os fungos, bem como as linhagens bacterianas

multiresistentes foram cedidas pelo Laboratório de Micologia Clínica da Universidade

Federal da Paraíba – UFPB.

4.4.1 Difusão em disco

Foi utilizado o método de difusão em disco (BAUER et al., 1966) adaptado por

Romeiro (2001) e Koneman et al. (1993). As linhagens bacterianas foram reavivadas em meio

Brain Heart Infusion (BHI) e incubadas por 24 horas a 35 ± 2 ºC, em seguida, foram

replicadas em placas de petri previamente preparadas com agar Muller-Hinton.

As leveduras foram reavivadas em meio Potato Dextrose Agar (PDA) e incubadas a

temperatura ambiente por um período de 24 horas, em seguida, foram replicadas em placas de

petri, previamente preparadas com PDA.

As placas de petri utilizadas neste ensaio, com 80 mm de diâmetro, foram preenchidas

com uma camada de agar de 3-4 mm de profundidade. O pH do meio foi ajustado entre 7,2 e

7,4 (NCCLS, 2003).

Após essa etapa discos de papel estéreis (6 mm de diâmetro) foram colocados sobre o

meio de cultura, eqüidistantes do centro da placa e entre si. A seguir, estes discos foram

embebidos na solução do material a ser testado, preparado em diferentes concentrações (10; 5;

2.5; 1.25; 0.6; 0.3%). As placas foram incubadas em estufa bacteriológica a 35 ± 2 ºC para

linhagens bacterianas e em temperatura ambiente para os fungos, e os resultados lidos com o

auxílio de uma régua milimetrada, após 24 e 48 horas para determinação da atividade

bacteriostática/fungiostática, bactericida/fungicida. Os resultados foram avaliados utilizando-

se os seguintes parâmetros: inativo (< 9 mm), parcialmente ativo (9 – 12 mm), ativo (12 – 18

mm) e muito ativo (> 18 mm) (RIOS, RECIO e VILLAR, 1998; LIMA, 1993; COLE, 1994;

ALVES et al., 2000).

4.4.2 Microdiluição

4.4.2.1 Concentração Inibitória Mínima (CIM)

A atividade antimicrobiana dos óleos foi avaliada, com base no documento M7-A6

para bactérias e para fungos documento M38-A (NCCLS, 2003). Foram utilizadas seis

linhagens de bactérias padrões, sendo duas Gram-positivas: Staphylococcus aureus ATCC

12692 e Bacillus cereus ATCC 33018 e duas Gram-negativas: Pseudomonas aeruginosa

ATCC 15442 e Escherichia coli ATCC 25922 e duas linhagens multiresistentes: Escherichia

coli (27) obtida de escarro, e Staphylococcus aureus (358), isolada de ferida cirúrgica. Os

fungos utilizado foram as leveduras : Candida albicans ATCC 40006; Candida krusei ATCC

6538 e Candida tropicallis ATCC 40042.

Previamente, as bactérias foram ativadas em meio Brain Hear Infusion Broth (BHI)

durante 24 h a 35 ± 2 ºC. Após este subcultivo procedeu-se a padronização do inóculo, que

consistiu na preparação de uma suspensão em BHI a 3,8%, cuja turvação fosse similar ao tubo

0,5 da Escala McFarland (1 x 10

UFC/mL). Em seguida, essa suspensão foi diluída a 1 x 10

UFC/ mL em caldo BHI a 10%, e volumes de 100 µL foram então homogeneizados nos poços

de uma placa de microdiluição acrescido de diferentes concentrações dos óleos, resultando

num inoculo final de 5 x 10

UFC/mL (HADACEK e GREGER, 2000; NCCLS, 2003 e

VILJOEN et al., 2003).

Os fungos foram reavivados em Caldo Sabouraud Dextrose (CSD) em temperatura

ambiente durante 24 h. Em seguida essas leveduras foram submetidas aos mesmos

procedimentos citados anteriormente.

Os óleos foram solubilizados inicialmente em água destilada e dimetilsufóxido

(DMSO) de forma a obter-se uma solução estoque de 1024 µg/mL, obtendo-se concentrações

finais dos óleos no meio de cultura de 512, 256, 128, 64, 32, 16 e 8 µg/mL. Os testes foram

efetuados em triplicata. As placas foram incubadas a 35 ± 2 ºC, durante 24 h.

As placas contendo bactérias foram reveladas com corante específico, a resazurina, um

indicador calorimétrico de óxido-redução (SALVAT, ANTONNACCI e FORTUNATO,

2001). Uma solução foi preparada com a resazurina sódica e água destilada na concentração

de 0,01% e realizada a leitura, onde 25 µL da solução indicadora foi adicionada em cada

cavidade e as placas foram incubadas por 1 h em temperatura ambiente. O controle negativo

do teste foi realizado com o caldo BHI.

Os resultados obtidos foram classificados segundo Aligianis et al. (2001) como: forte

inibição - CIM até 500 µg/mL; inibição moderada – CIM entre 600 e 1500 µg/mL e fraca

inibição – CIM acima de 1600 µg/mL.

A leitura das placas com as cepas foi realizada através da visualização da turvação,

onde o aumento da turbidez ou opacidade no meio indica o crescimento de microorganismos

(LENNETTE et al, 1985). O CIM é definido como sendo a menor concentração capaz de

produzir proeminente inibição do crescimento da levedura, em relação à cavidade com

controle positivo.

A concentração inibitória mínima (CIM) foi definida como a menor concentração

capaz de inibir completamente o crescimento microbiano, nos poços de microdiluição

conforme detectado a olho nu. A leitura dos resultados para determinação da CIM foi

considerada como positivo para os poços que permaneceram com a coloração azul e negativa

os que obtiveram coloração vermelha.

4.4.2.2 Concentração Fungicida Mínima (CFM)

A concentração fungicida mínima foi realizada a partir de cada inóculo do teste anterior que

não apresentou crescimento e os controles positivos. Uma alçada de cada poço, ou seja, dos

poços onde foram determinadas as CIMs, foi subcultivada em placas de Potate Dextrose Agar

(PDA), devidamente identificadas. Após 24 horas de incubação a 35 ± 2ºC, realizou-se leitura,

com a finalidade de observação do crescimento das colônias. As leituras das CFMs foram

realizadas com base no crescimento dos controles, sendo considerada CFM, a menor

concentração da droga que impediu crescimento visível do subcultivo (SHADOMY, ESPINEL-

INGROFF e CARTWRIGHT, 1985).

4.5 Modulação

4.5.1 Contato Gasoso

Nesse ensaio foram testadas as concentrações: 50, 25, 12 e 6 %, obtidas a partir de

diluições com o tensoativo DMSO. Uma suspensão bacteriana, referente a 10

células/mL, foi

semeada com auxílio de swab estéril em placas de petri contendo meio de cultura PCA (Plate

Count Agar), previamente preparadas (INOUYE, TAKIZAWA e YAMAGUCHI, 2001).

Discos de antibióticos foram colocados sobre as placas de petri contendo os

microorganismos a serem testados. A seguir, um volume de 100µL de cada concentração foi

colocado na parte interna da tampa da placa de petri, de modo que os componentes voláteis

dos óleos pudessem interagir diretamente como o antibiótico, para avaliar se os mesmos,

possuíam efeito sinérgico ou antagônico. Para o controle negativo foi utilizado o DMSO

(Dimetilsulfóxido), usado para diluir as soluções teste, colocado sobre a tampa, e como

controle positivo foram utilizados discos de antibiótico.

Após a realização do ensaio, as placas de petri foram incubadas em estufa

bacteriológica a 35 ± 2 º por 24 horas, e em seguida realizada a leitura com auxílio de régua

milimetrada. Os antibióticos utilizados no ensaio foram os aminoglicosídeos amicacina

(30µg), gentamicina (10 µg) e tobramicina (10 µg).

4.5.2. Atividade moduladora

Para avaliar a atividade moduladora foram utilizados os CIM

dos óleos frente aos

antibióticos aminoglicosídeos (amicacina, canamicina, gentamicina e neomicina) e ao

cetoconazol e fluconazol. As linhagens bacterianas utilizadas foram inoculados em BHI a

10% e armazenados em estufa bacteriológica a 35 ± 2ºC por 24 horas. As cepas fúngicas

foram inoculadas em Caldo Sabourand Dextrose a 10% e mantidas em temperatura ambiente

até o momento do ensaio. O teste foi monitorado com um controle positivo contendo apenas

os antibióticos e os microorganismos (COUTINHO, 2008; SAGDIÇ, 2005).

Figura 6.

Métodos de análise

(A) Difusão em disco

(C)

Microdiluição

Métodos de análise

s microbiológicas. (A) Difusão em disco

; (B)

(B) Contato gasoso

Microdiluição

– inoculação das linhagens

Fontes: Fotos da autora

; (B)

Contato gasoso e

4.5. Análise Estatística

Os valores de média e desvio padrão foram calculados para as amostras através da

utilização do programa Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) for Windows

versão 16.0 (BISQUERRA, 2004).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

5. RESULTADOS E DISCUSSÃO

5.1 Levantamento do gênero Psidium

Os resultados obtidos para o levantamento dos estudos com espécies do gênero

Psidium, nos ultimos dez anos, estão representados através dos Gráficos 1, 2, 3 e 4. Apenas os

dados referentes à espécie P. guajava foram representados desta forma, este fato ocorreu, pois

esta espécie foi a que demonstrou maior número de estudos.

Dessa forma, de acordo com a análise dos gráficos, é possível observar que um total

de 91% dos trabalhos publicados com espécies do gênero Psidium, são referentes a espécie

Psidium guajava. Os estudos com esta espécie, em sua maioria (69%), são refentes a

trabalhos com as folhas, tendo como tipo de preparação mais estudada, os extratos aquosos

(28%), sendo a atividade antimicrobiana desta espécie a atividade biológica mais estudada

(34%), conforme os dados do levantamento realizado.

Gráfico 1.

Espécies do gênero

Gráfico 2.

Partes mais estudadas da espécie

Folhas

Cascas do fruto

Espécies do gênero

Psidium estudadas no período de 2000-

2010

Partes mais estudadas da espécie

Psidium guajava.

69%

11%

Frutos

Cascas do caule

Cascas do fruto

Outras partes

Partes não identificadas

91%

Psidium guajava

Outras espécies

2010

69%

Cascas do caule

Partes não identificadas

Psidium guajava

Outras espécies

Gráfico 3.

Tipo de preparação mais utilizadas com

Gráfico 4. Atividades

biológicas

34%

Extrato aquoso

Extrato hidrometanólico

Não identificados

Antimicrobiana

Antidiarréia

Anticâncer

Repelente

Hepatoprotetora

Sem registro de atividade

Tipo de preparação mais utilizadas com

Psidium guajava.

biológicas

apresentadas pela espécie

Psidium guajava

28%

12%

11%

34%

Extrato metanólico Extrato etanólico

Extrato hidrometanólico

Óleo essencial Outros tipos

34%

13%

24%

Antimicrobiana

Antioxidante

Antiinflamatória

Antidiabética

Antivirótica

Hepatoprotetora

Outras atividades farmacológicas

Sem registro de atividade

Psidium guajava

Outras atividades farmacológicas

5.2 Constituintes químicos dos óleos essenciais

Os óleos essenciais das cinco espécies em estudo, submetidos à hidrodestilação,

obtiveram os seguintes rendimentos: 2,2% - P. sobraleanum; 0,16%- P. myrsinites 2; 1,3% -

P. myrsinites 3; 0,4% - P. myrsinites 1 e 0, 046% - P. guajava.

Na análise da composição química do óleo de P. myrsinites 1 foi possível identificar

96,9% dos constituintes, correspondendo a 21 substâncias (Tabela 2), sendo como composto

majoritário o acetato de nerila (32,7%). No óleo de P. myrsinites 3 (Tabela 2) foram

identificados 14 constituintes, totalizando 79,1% dos compostos identificados para este óleo,

destacando-se o majoritário acetato de nerila (35,7%).

O acetato de nerila apresenta diversas atividades biológicas, dentre elas: bactericida,

fungicida, antiparasitária, repelente de insetos, agente antitumoral, antioxidante, apresenta

atividade antimicrobiana, ação antivirótica, reduz a excitabilidade, ansiedade, e tensão, possui

propriedades antiespasmódicas, carminativas, estomáquicas, diaforéticas, sedativas,

antidepressivas e vermífugas (GOVIN et al., 2000; KÉITA et al., 2001; SUPPAKUL et al.,

2003; SOUSA et al., 2004b; MIMICA-DUKIC et al., 2004; KENNEDY et al., 2003;

HUANG et al., 2008; SCHNITZLER et al., 2008; REIS et al.,2009).

Além disso, o acetato de nerila está presente na constituição de outros óleos como em

espécies do gênero Ocimum, entre elas, Ocimum basilicum, Ocimum gratissimum, e Ocimum

sanctum e também se encontra no óleo de Melissa officinalis, sendo um dos compostos

responsáveis pelas atividades encontradas nestas e em outras espécies (MIMICA-DUKIC et

al., 2004; SUPPAKUL et al., 2003).

Para óleo de P. sobraleanum (Tabela 2), 65,3% dos compostos foram quantificados

perfazendo, um total de 15 substâncias identificadas, aparecendo o composto 1,8-cineol como

majoritário neste óleo.

O majoritário 1,8-cineol, além de se encontrado nestas espécies também está presente

na constituição dos óleos de espécies do gênero Salvia, no óleo de Malaleuca alternifólia e

Eucalyptus globulus. Este composto é responsável por diversas atividades, dentre elas:

potente atividade antibacteriana (ARANGO, SÁNCHEZ e GALVIS, 2004; TAKAHASH,

KOKUBO e SAKAINO, 2004; SONBOLI, BABAKHANI e MEHRABIAN, 2006), atividade

antimicótica contra fungos do gênero Candida e Malassezia, e é usado no tratamento de

infecções de pele (HAMMER, CARSON e RILEY, 2000; HAMMER, CARSON e RILEY,

2002; WORLD HEALTH ORGANIZATION, 2002; NAVARRO et al., 1996; TAKAHASH,

KOKUBO e SAKAINO, 2004; SALARI et al., 2006; CERMELLI et al., 2008), atividade

sobre o carrapato Boophilus microplus (CHAGAS et al., 2002), bem como atividade

inseticida sobre Musca domestica (HALIM e MORSY, 2005), Pediculus humanus capitis

(YANG et al., 2004), além dos coleópteros Acanthoscelides obtectus (PAPACHRISTO e

STAMOPOULOS, 2004), Zabrotes subfasciatus e Callosobruchus maculatus (BRITO,

OLIVEIRA e DE-BORTOLI, 2006).

O óleo de Psidium myrsinites 2 foi analisado e um total de 20 substâncias foi

identificado (90,2%), apresentando a substância δ-cadinol (29,3%) como constituinte

majoritário (Tabela 2).

A substância δ-cadinol, majoritária neste óleo e presente em quantidades relativas em

outros óleos como o de Lippia Alba, Pinus ponderosa, Pinus resinosa, Pinus strobus,

Kadsura longipedunculata, Cryptomeria japonica é reponsável pela atividade antibacteriana e

antifúngica apresentada por eles, além de outras atividades como tripanocida e

antiinflamatória (KRAUZE-BARANOWSKA et al., 2002: NOGUEIRA et al., 2007;

MULYANINGSIH et al., 2010; CHENG, LIN e CHANG, 2005).

No óleo das folhas de P. guajava (Tabela 2), 11 constituintes foram identificados

(100%), no entanto o composto identificado como majoritário foi o limoneno (96,2%). Este

composto, amplamente estudado apresenta diversas atividades como inseticida, nematicida,

anticonvulsivante, e com atividade antimicrobiana (VIEGAS JÚNIOR , 2003; FALCÃO e

MENEZES, 2003; PASSOS et al., 2009; DUARTE et al., 2005; SCHUCK et al., 2001).

As espécies de Psidium apresentadas neste trabalho são ainda pouco estudadas, com

exceção da espécie P. guajava, fato que justifica a ausência de relatos químicos sobre essas

espécies. Contudo, outros estudos com espécies do gênero Psidium como Psidium

friedrichsthalianum, Psidium salutare, Psidium caudatum, Psidium pohlianum, P. guyanensis

e P. aff aerugineum, apresentaram compostos como: δ-cadineno, α–pineno, (E)-β-cariofileno,

α-terpineol, β-pineno, 1,8-cineol, mirceno, limoneno, terpinen-4-ol, β-pineno, ρ-cymene, α-

humuleno, linalol, у-eudesmol e β-eudesmol (SANTOS, RAO e SILVEIRA, 1996; SANTOS

et al., 1997; PINO, MARBOT e VAÄZQUEZ, 2002; PINO e QUERIS, 2008; YÁÑEZ et al.,

2002), que também estão presentes em alguns dos óleos supracitados.

Entretanto, a espécie P. guajava, muito bem estudada, possui diversos estudos que

retratam o perfil químico desta espécie, apresentando na composição química de seu óleo

essencial das folhas constituintes como: α-pineno, β-pineno, limoneno, mentol, álcool

isopropil, longicicleno, cariofileno, β-bisaboleno, cineol, óxido de cariofileno, β-copaneno,

farneseno, humuleno, selineno, cardineno e curcumeno (ZAKARIA e MOHD,1994; LI,

CHEN e LUO, 1999; GUTÍERREZ, MITCHELL e SOLIS, 2008).

Figura 7. Estruturas dos constituintes químicos majoritários presentes nos óleos das espécies

de Psidium.

Acetato de nerila

δ - cadinol

1,8 -cineol

Limoneno

OAc

Tabela 2. Composição química dos óleos essenciais das folhas frescas das espécies do gênero Psidium.

Componente IK

Psidium

myrsinites 1

(%)

Psidium

myrsinites 2

(%)

Psidium

myrsinites 3

(%)

Psidium

sobraleanum

(%)

Psidium guajava

(%)

α-pineno 937 - - - 7,0 0,4

sabineno 972 - - - - 0,1

β-pineno 974 - - - 4,9 0,6

mirceno 989 - - - - 0,9

α-felandreno 1002 1,0 - - - -

δ-3-careno 1009 - 0,5 - - -

p-cimeno 1023 1,5 6,3 - - 0,6

limoneno 1028 - 3,2 - -

96,2

1,8-cineol 1031 22,0 1,1 6,3

16,2

γ-terpineno 1058 0,9 1,8 - - 0,3

terpinoleno 1087 0,5 1,0 - - 0,4

linalol 1098 9,0 - 2,9 - -

1-borneol 1163 0,6 - - - -

mentol 1167 0,9 - - - -

terpineno-4-ol 1176 8,0 6,5 3,4 - -

α-terpineol 1190 3,1 3,2 2,3 1,2 0,3

acetato de mentila 1294 1,2 - - 0,4 -

acetato de nerila 1362

32,7

35,7

- -

α-copaeno 1371 - 3,3 - - -

β-cubebeno 1385 - - - 0,8 -

β-elemeno 1387 - - - - 0,1

β-cariofileno 1410 0,9 1,6 0,8 0,6 -

germacreno D 1473 - - - - 0,2

(Cont.)

Componente IK

Psidium

myrsinites 1

(%)

Psidium

myrsinites 2

(%)

Psidium

myrsinites 3

(%)

Psidium

sobraleanum

(%)

Psidium guajava

(%)

γ -muuroleno 1501 - 4,0 - 0,5 -

δ-cadineno 1517 1,0 4,1 1,2 0,8 -

elemol 1548 - - - 8,4 -

germacreno B 1569 1,5 - 1,6 - -

óxido cariofileno 1572 - 3,7 - - -

espatulenol 1577 - - - 8,8 -

globulol 1582 - 1,6 - - -

viridiflorol 1592 0,6 2,0 1,4 1,3 -

guaiol 1600 0,9 0,9 0,9 1,7 -

1,10-di-epi-cubenol 1615 2,2 2,2 2,3 - -

α-cadinol 1627 5,3 8,8 11,8 8,8 -

δ-cadinol 1634 1,2

29,3

3,2 3,9 -

muurolol 1641 1,9 5,1 5,3 - -

TOTAL

96,9

90,2

79,1 65,3 100

- Ausência do constituinte

5.3 Atividade antibacteriana pelo método de difusão em disco.

Os resultados obtidos pelo método de difusão em discor estão apresentados na

Tabela 4 (p. 65).

Os valores obtidos neste ensaio foram classificados como muito ativo, ativo,

parcialmente ativo e inativo, de acordo com o tamanho dos halos obtidos e por

comparação com os parâmetros (RIOS, RECIO e VILLAR, 1998; LIMA, 1993; COLE,

1994; ALVES et al., 2000) apresentados na Tabela 3, abaixo.

Tabela 3. Descrição dos parâmetros de classificação de atividade dos óleos.

Tamanho do halo em milímetros

(mm)

Classificação

< 9 mm Inativo

Entre 9 a 12 mm Parcialmente Ativo

Entre 12 a 18 mm Ativo

> 18 mm Muito Ativo

O óleo de P. sobraleanum apresentou atividade (halo entre 12 e 18 mm) frente às

linhagens S. aureus ATCC 12692, S.aureus 358, E. coli 27 e P. aeruginosa ATCC

15442. No entanto, na comparação dos halos obtidos pelas soluções e os do controle,

apenas frente a P. aeruginosa ATCC 15442 foi possível observar que o halo obtido por

este óleo (16,5 mm) na maior concentração testada (10%), foi superior ao do controle

tobramicina (15 mm).

As demais linhagens, E. coli ATCC 25922 e B. cereus ATCC 33018, não foram

sensíveis a nenhuma concentração ensaiada, sendo o óleo inativo (halo < 9 mm) frente a

essas espécies bacterianas.

Tabela4. Atividade antibacterina de Psidium sobraleanum, Psidium myrsinites 1, Psidium myrsinites 2, Psidium myrsinites 3 e Psidium guajava

pelo método de difusão em disco.

Óleos Linhagens

Concentração/Diâmetro do halo (mm)

10%

2,5%

1,25%

0,6%

0,3%

AMI. (30µ)

TOB. (10µ)

Psidium sobraleanum

S. a (ATCC 12692) 12,5±2,1 11,5±4,9 9,5±0,7 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 26

S. a (MR 358) 12,0±5,6 11,0±1,41 11,0±2,8 6,5±7,7 0,0±0 0,0±0 22 24

E. c (ATCC 25922) 6,5±8,4 6,0±7,0 6,0±6,3 0,0±0 0,0±0 0,0±0 15 20

E. c (MR 27) 14,0±0 7,0±1,4 7,0±0,7 6,0±4,2 0,0±0 0,0±0 24 25

P. a (ATCC 15442) 16,5±6,3 10,0±2,8 5,5±7,7 0,0±0 0,0±0 0,0±0 25 15

B. c (ATCC 33018) 6,5±8,4 6,5±7,0 6,0±7,0 6,0±5,6 0,0±0 0,0±0 24 20

Psidium myrsinites 1

S. a (ATCC 12692) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 26

S. a (MR 358) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 22 24

E. c (ATCC 25922) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 15 20

E. c (MR 27) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 25

P. a (ATCC 15442) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 25 15

B. c (ATCC 33018) 6,5±6,3 6,5±5,6 6,5±7,7 6,0±7,0 0,0±0 0,0±0 24 20

Psidium myrsinites 2

S. a (ATCC 12692) 9,5±0,7 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 26

S. a (MR 358) 9,5±3,5 7,0±1,4 6,5±7,7 0,0±0 0,0±0 0,0±0 22 24

E. c (ATCC 25922) 8,5±4,9 7,5±4,9 7,0±0 6,0±5,6 0,0±0 0,0±0 15 20

E. c (MR 27) 6,5±4,9 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 25

P. a (ATCC 15442) 6,0±7,0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 25 15

B. c (ATCC 33018) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 20

Psidium myrsinites 3

S. a (ATCC 12692) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 26

S. a (MR 358) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 22 24

E. c (ATCC 25922) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 15 20

E. c (MR 27) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 25

P. a (ATCC 15442) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 25 15

B. c (ATCC 33018) 7,5±6,3 6,5±4,9 6,0±4,9 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 20

Psidium guajava

S. a (ATCC 12692) 15,0±5,6 9,5±6,3 9,0±0,7 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 26

S. a (MR 358) 9,0±1,41 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 22 24

E. c (ATCC 25922) 7,5±6,3 7,0±5,6 6,5±6,3 0,0±0 0,0±0 0,0±0 15 20

E. c (MR 27) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 25

P. a (ATCC 15442) 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 25 15

B. c (ATCC 33018) 6,5±6,3 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 0,0±0 24 20

AMI. – Amicacina (30µg/disco); TOB. – Tobramicina (10 µg/disco).

S.a – Staphylococcus aureus; E.c. – Escherichia coli; P.a – Pseudomonas aeruginosa; B.c – Bacillus cereus

Diversos estudos retratam a atividade antibacteriana do gênero Psidium sobre

linhagens patogênicas como P. aeruginosa e S. aureus (PESEWU, CUTLER e

HUMBER, 2008; NAIR e CHANDA, 2007; ANAS et al., 2008; NASCIMENTO et al.,

2000; HOLETZ et al., 2002), como a demonstrada nesse estudo.

A resistência ao óleo de P. sobraleanum, apresentada por E. coli, neste trabalho,

também foi demonstrada em outros estudo, onde essa linhagem mostra-se resistente a

várias drogas assim como a vários extratos vegetais (NASCIMENTO et al., 2000).

Os óleos de P. myrsinites 1 e P. myrsinites 3 foram classificados como inativos

(halo < 9 mm) frente às linhagens B. cereus ATCC 33018, E. coli ATCC 25922, E. coli

MR 27 e P. aeruginosa ATCC 15442 e não foram capazes de inibir o crescimento das

demais espécies bacterianas testadas.

Todos os halos apresentados pelo o óleo de P. myrsinites 1 frente aos

microorganismos S. aureus ATCC 12692, S. aureus MR 358, E. coli ATCC 25922, E.

coli MR 27, P. aeruginosa ATCC 15442 e B. cereus ATCC 33018 nas concentrações de

10%, 5%, 2,5%, 1,25%, 0,62% e 0,30% não proporcionaram qualquer atividade,

manifestando atividade classificada como inativa, ou seja, apresentaram em todos os

casos halos inferiores a 9mm.

Apenas as linhagens Gram-positivas S. aureus ATCC 12692 e S. aureus MR 358,

foram sensíveis ao óleo de P. myrsinites 2, ambas apresentando halos de inibição de 9,5

mm, sendo a atividade do óleo considerada parcialmente ativa (halo entre 9 e 12 mm)

nessas linhagens. A atividade do óleo frente às demais linhagens, E. coli ATCC 25922,

E. coli MR 27, P. aeruginosa ATCC 15442 e B. cereus ATCC 33018, foi classificada

como inativa (halo < 9 mm).

As linhagens S. aureus ATCC 12692, S. aureus MR 358 foram sensíveis as

soluções do óleo de P. guajava, sendo sua ação sobre as bactérias, classificada como

ativa (halo entre 12 e 18 mm) e parcialmente ativa (halo entre 9 e 12 mm),

respectivamente. O óleo de P. guajava não foi capaz de inibir o crescimento das

linhagens E. coli ATCC 25922, E. coli MR 27, P. aeruginosa ATCC 15442 e B.

cereus 33018, de maneira significativa (inibição ≥ 9 mm).

Os óleos essenciais de P. myrsinites 2 e P. guajava indicaram a capacidade de

inibir o crescimento de linhagens Gram-positivas, com destaque, atividade contra

espécies de S. aureus. Vários estudos comprovam atividade bacteriana de produtos

naturais das espécies do gênero Psidium sobre bactérias Gram-positivas, indicando

atividade não só atividade antibacteriana contra S. aures, mas também sobre diversas

linhagens do gênero Streptococcus, dentre elas Streptococcus mutans, Streptococcus

sanguinis, Streptococcus mitis e Streptococcus sobrinus (BRIGHENTI et al., 2008;

PRABU, GNANAMANI e SADULLA, 2006; LIMSONG, BENJAVONGKULCHAI e

KUVATANASUCHATI, 2004; ALVES et al., 2009; FATHILAH et al., 2009).

Os melhores resultados neste ensaio foram obtidos pelos óleos de P.

sobraleanum e P. guajava. As diferenças encontradas pelos dados obtidos neste estudo

e os de outros trabalhos podem estar estar relacionados com diversos fatores: condições

de cultivo, meio de cultura, concentrações de substâncias testadas, dispersão e

emulsificação dos agentes utilizados (RÍOS e RECIO, 2005; NASCIMENTO et al.,

2007).

Através das atividades apresentadas nestes ensaios foi possível concluir que as

espécies estudadas têm a capacidade de inibir o crescimento de várias linhagens

patogênicas, destacando-se sua atividade sobre linhagens Gram-positivas, evidenciando

o grande espectro de ação bacteriana encontrado no gênero Psidium.

Todavia, vale salientar que os dados obtidos pelo método de difusão em disco,

apenas fornece dados preliminares, de caráter qualitativo. Uma vez que, à natureza

hidrófoba da maioria dos óleos essenciais de plantas, impede a difusão uniforme destas

substâncias através do meio de cultura (LAMBERT et al., 2001).

5.4 Atividade antibacteriana pelo método de contato gasoso

Os resultados obtidos por esse método estão apresentados nas Tabelas 5 a 9.

Tabela 5. Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium myrsinites 2.

Linhagens

Tratamento

Concentração/Diâmetro(mm)

50%

25%

12%

DMSO

AMI.

TOB.

GEN.

aeruginosa

ATCC

15442

AMI.+OEAP 24 23 22 22 -

20 21 20

TOB.+OEAP

23 20 20 19 -

GEN.+OEAP

20 19 19 18

S. aureus

ATCC

12692

AMI.+OEAP 35 33 30 29 -

29 21 25

TOB.+OEAP

30 30 28 25 -

GEN.+OEAP

30 28 28 27 -

OEAP – Óleo essencial de araçá preto; AMI. – Amicacina 30 µg; TOB. – Tobramicina 10µg; GEN. –

Gentamicina 10µg; DMSO – Dimetilsulfóxido; - Não houve inibição.

Os antibióticos testados em associação com o óleo essencial de P. myrsinites 2

apresentaram diferentes resultados. Para a linhagem P. aeruginosa ATCC 15442, o óleo

em associação com o aminoglicosídeo amicacina, demonstrou um efeito sinérgico,

aumentando a atividade do antibiótico em 20% na maior concentração testada. Contudo,

para o antibiótico tobramicina a porcentagem de incremento foi um pouco menor, 9,5%,

e para a gentamicina, o óleo não demonstrou nenhuma interferência na atividade deste,

já que o halo obtido se manteve o mesmo do controle positivo.

Os resultados obtidos frente à linhagem S. aureus ATCC 12692 demonstraram

que o óleo apresentou um efeito sinérgico frente a todos os antibióticos testados. Para a

amicacina, o óleo demonstrou um incremento de 20,6% na sua atividade, e de 42,85% e

20% para os antibióticos tobramicina e gentamicina, respectivamente.

Estes resultados indicam que a linhagem S. aureus foi mais sensível a interação

do óleo com os aminoglicosídeos ensaiados. Outros estudos evidenciam a ação

antibacteriana de óleos essenciais frente a S. aures e outras linhagens Gram-positivas,

apresentando em comum, com o óleo de P. myrsinites 2, o composto sequisterno, δ-

cadinol, majoritário neste óleo e presente em quantidades relativas em outros óleos

como o de Lippia Alba, Pinus ponderosa, Pinus resinosa, Pinus strobus, sendo um dos

responsáveis pela atividade antibacteriana e antifúngica apresentada por eles

(KRAUZE-BARANOWSKA et al., 2002: NOGUEIRA et al., 2007).

Tabela 6. Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium myrsinites 3.

Linhagens

testadas

Tratamento

Concentração/Diâmetro (mm)

50%

25%

12%

DMSO

AMI.

TOB.

GEN.

aeruginosa

ATCC

15442

AMI..+OEAA

24 24 24 22 -

20 21 20

TOB.+OEAA 20 20 19 19 -

GEN.+OEAA 20 20 19 19 -

S. aureus

ATCC

12692

AMI.+OEAA 28 27 26 26 -

29 21 25 TOB.+OEAA 26 26 25 25 -

GEN.+OEAA 26 23 23 23 -

OEAA – Óleo essencial de araçá amarelo; AMI. – Amicacina 30 µg; TOB. – Tobramicina 10µg; GEN. –

Gentamicina 10µg; DMSO – Dimetilsulfóxido; - Não houve inibição.

A análise realizada frente a P. aeruginosa ATCC 15442 indicou que o óleo de P.

myrsinites 3 mostrou um aumento da atividade da amicacina de 20%, entretanto

associado à gentamicina e tobramicina não apresentou nenhum efeito.

Já os resultados obtidos para S. aureus ATCC 12692 apontaram um incremento

de 23,8% para a associação com a tobramicina e 4% para a gentamicina, a associação

com a amicacina não apresentou efeito antagônico, reduzindo a atividade do antibiótico.

Tabela 7. Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium myrsinites 1.

Linhagens

testadas

Tratamento

Concentração/Diâmetro (mm)

50%

25%

12%

DMSO

AMI.

TOB.

GEN.

aeruginosa

ATCC

15442

AMI.+OEAE 25 24 22 22 -

20 21 20

TOB.+OEAE

21 21 20 20 -

GEN.+OEAE

20 20 19 19 -

S. aureus

ATCC

12692

AMI.+OEAE 28 27 26 25 -

29 21 25 TOB.+OEAE

28 27 26 23 -

GEN.+OEAE

27 23 22 21 -

OEAE – Óleo essencial de araçá encarnado; AMI. – Amicacina 30 µg; TOB. – Tobramicina 10µg; GEN.

– Gentamicina 10µg; DMSO – Dimetilsulfóxido; - Não houve inibição.

O óleo essencial de P. myrsinites 1 apresentou frente a P. aeruginosa ATCC

15442 um aumento da atividade do antibiótico de 25%, apenas em associação com a

amicacina, não indicando nenhuma interação frente aos demais antibióticos,

gentamicina e tobramicina.

Os antibióticos, tobramicina e gentamicina, associados ao óleo apresentaram

aumento da atividade frente à linhagem S. aureus ATCC 12692, tendo a tobramicina

obtido um incremento de 33,3%, e a gentamicina de 8%. O óleo de P. myrsinites 1, em

associação com o aminoglicosídeo amicacina promoveu uma diminuição da ação deste

antibiótico.

Os resultados obtidos pelos óleos de P. myrsinites 3 e P. myrsinites 1 podem

estar relacionados com a constituição química desses óleos, que apresentam como

composto majoritário o acetato de nerila, presente no óleo de P. myrsinites 1 na

proporção de 32,7% e no óleo de P. myrsinites 3 em 35,7%.

O acetato de nerila, composto majoritário destes óleos, é um éster terpênico,

presente em diversos óleos essenciais de várias espécies do gênero Ocimum, entre elas,

Ocimum basilicum, Ocimum gratissimum, e Ocimum sanctum. Esse gênero destaca-se

por apresentar diversas atividades farmacológicas, tais como: bactericida, fungicida,

antiparasitária e, até mesmo, como repelente de insetos, além de apresentar atividade

comprovada com agente antibacteriano e antifúngico (GOVIN et al., 2000; KÉITA et

al., 2001; SUPPAKUL et al., 2003).

Outra espécie muito empregada na medicina popular, Melissa officinalis,

também apresenta na constituição química de seu óleo o acetato de nerila. Essa espécie

também possui diversas atividades biológicas como: agente antitumoral, antioxidante,

apresenta atividade antimicrobiana, ação antivirótica, reduz a excitabilidade, ansiedade,

e tensão, possui propriedades antiespasmódicas, carminativas, estomáquicas,

diaforéticas, sedativas, antidepressivas e vermífugas (SOUSA et al., 2004; MIMICA-

DUKIC et al., 2004; KENNEDY et al., 2003; HUANG et al., 2008; SCHNITZLER et

al., 2008).

Tabela 8. Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium sobraleanum.

Linhagens

testadas

Tratamento

Concentração/Diâmetro (mm)

50%

25%

12%

DMSO

AMI.

TOB.

GEN.

aeruginosa

ATCC

15442

AMI.+OEAV 23 22 22 - -

20 21 20

TOB.+OEAV

20 20 19 - -

GEN.+OEAV

19 18 16 - -

S. aureus

ATCC

12692

AMI.+OEAV 27 25 24 - -

29 21 25 TOB.+OEAV

27 25 24 - -

GEN.+OEAV

25 21 21 - -

OEAV – Óleo essencial de araçá de veado; AMI. – Amicacina 30 µg; TOB. – Tobramicina 10µg; GEN. –

Gentamicina 10µg; DMSO – Dimetilsulfóxido; - Não houve inibição.

A linhagem P. aeruginosa ATCC 15442 se mostrou sensível apenas a

associação amicacina/óleo essencial de P. sobraleanum, apresentando um aumento da

atividade do antibiótico de 15%. Entretanto, para a linhagem S.aureus ATCC 12692 a

interação que promoveu o aumento do espectro de ação do antibiótico só ocorreu na

associação com a tobramicina, ocasionando um aumento de 28,57%.

Alguns estudos com óleos essenciais de Malaleuca alternifolia e Eucaliptus

globulus, espécies com alto ter do monoterpeno 1,8-cineol, apresentam potente

atividade antibacteriana (ARANGO, SÁNCHEZ e GALVIS, 2004; TAKAHASHI,

KOKUBO e SAKAINO, 2004; SONBOLI, BABAKHANI e MEHRABIAN, 2006).

Além disso, o óleo de Malaleuca alternifolia possui atividade antimicótica contra

fungos do gênero Candida e Malassezia, e é usado no tratamento de infecções de pele

(HAMMER, CARSON e RILEY, 2000; HAMMER, CARSON e RILEY, 2002;

WORLD HEALTH ORGANIZATION, 2002). O óleo de Eucaliptus globulus, também

apresenta atividade antimicótica, é muito utilizado em irritações dérmicas, além de

apresentar atividade sobre bactérias e fungos (NAVARRO et al., 1996; TAKAHASHI,

KOKUBO e SAKAINO, 2004; SALARI et al., 2006; CERMELLI et al., 2008). Esse

composto, 1,8-cineol, também está presente no óleo essencial de P. sobraleanum,

composto majoritário deste (16,2%), sendo o possível responsável pela atividade

demonstrada anteriormente.

Tabela 9. Atividade antibacteriana do óleo essencial de Psidium guajava.

Linhagens

testadas

Tratamento

Concentração/Diâmetro (mm)

50%

25%

12%

DMSO

AMI.

TOB.

GEN.

aeruginosa

ATCC

15442

AMI.+OEG 23 23 23 23 -

20 21 20

TOB.+OEG 25 19 17 17 -

GEN.+OEG 18 17 17 17 -

S. aureus

ATCC

12692

AMI.+OEG 32 29 28 27 -

29 21 25 TOB.+OEG 31 25 24 18 -

GEN.+OEG 26 24 23 22 -

OEG – Óleo essencial da goiaba; AMI. – Amicacina 30 µg; TOB. – Tobramicina 10µg; GEN. –

Gentamicina 10µg; DMSO – Dimetilsulfóxido; - Não houve inibição.

A linhagem P. aeruginosa ATCC 15442 se mostrou sensível a associação

amicacina/óleo de P. guajava promovendo um aumento de 15% no efeito do antibiótico

e na associação com a tobramicina, promovendo um incremento de 19%. Todos os

antibióticos testados frente a S. aureus ATCC 12692 demonstraram efeito sinérgico

com o óleo. A associação do óleo com a amicacina promoveu um aumento de 10,3%,

enquanto que a tobramicina e a gentamicina obtiveram um incremento de 47,6% e 4%,

respectivamente.

A atividade antibacteriana observada pela associação dos antibióticos com o

óleo essencial de P. guajava pode estar relacionada com a sua composição química. Os

terpenos, presentes em óleos essenciais, são substâncias que apresentam várias

propriedades farmacológicas sendo utilizados como antimicrobianos, antiinflamatórios

e analgésicos (CASTRO et al., 2004). A substância limoneno, majoritário presentes no

óleo de P. guajava, encontrado na maioria das espécies aromáticas, apresenta ampla

atividade biológica como inseticida, nematicida, anticonvulsivante, e com atividade

antimicrobiana (VIEGAS JÚNIOR, 2003; FALCÃO e MENEZES, 2003; PASSOS et

al., 2009; DUARTE et al., 2005; SCHUCK et al., 2001). Além disso, muitos derivados

monoterpênicos, como o composto majoritário deste óleo, têm demonstrado atividades

sobre o SNC, incluindo sedativa, antinociceptiva e antidepressiva (SOUSA et al., 2007).

A linhagem Gram-positiva S. aureus ATCC 12692, foi sensível a todos os óleos

testados, em associação com os antibióticos amicacina, gentamicina e tobramicina,

dando um indicativo que as espécies do gênero Psidium apresentam a efeito sinérgico

com os aminoglicosídeos frente a linhagens Gram-positivas.

A atividade apresentada pelos óleos essenciais dessas espécies frente a

linhagens Gram-positivas, especialmente do gênero Staphylococcus é muito relevante,

visto que o aumento crescente da freqüência de S.aureus resistentes nos últimos anos

tem sido um problema (FREITAS, 2003; CATÃO et al., 2006). Alguns trabalhos

relatam o uso de produtos naturais como fonte de combate a resistência desses

microorganismos (NASCIMENTO et al., 2000; CATÃO et al., 2006; SILVEIRA et al.,

2006). Também foi possível observar que a linhagem Gram-negativa P. aeruginosa

ATCC 15442 foi sensível as interações entre os óleos e os antibióticos, apesar de

apresentar melhores resultados frente e associação com a amicacina.

Os melhores resultados obtidos frente a S. aureus, podem estar relacionados com

a sua maior susceptibilidade aos óleos essenciais, diferentemente do que ocorre com as

linhagens Gram-negativas, que possuem uma membrana externa com cadeias de

polissacarídeos hidrofílicos, que funcionam como uma barreira hidrofóbica para estes

óleos (MANN, COX e MARKHAM, 2000; TASSOU e NYCHAS, 1995). Contudo,

apesar dessa barreira, a linhagem Gram-negativa P. aeruginosa, foi sensível as

associações, assim como demonstrado em outros trabalhos com espécies do gênero

Psidium (ABDELRAHIM et al., 2002; CHERUIYOT, OLILA e KATEREGGA, 2009;

CHAH et al., 2006).

O aumento do efeito do antibiótico, causado pela interação com os óleos,

apresentado neste trabalho, pode ser explicado pela interação dos compostos presentes

no óleo e a membrana bacteriana. Os mecanismos de ação antibacteriana dos óleos

essenciais mais freqüentes envolvem componentes fenólicos de óleos, os quais

sensibilizam a bicamada lipídica da membrana celular e alteram a atividade dos canais

de cálcio, causando aumento da permeabilidade e liberação dos constituintes

intracelulares vitais (OUATTARA et al., 1997; KIM, MARSHALL e WEI, 1995;

BUCHBAUER e JIROVETZ, 1994; ISMAIEL e PIERSON, 1990).

Também podem ocorrer danos ao sistema enzimático do microrganismo

envolvido na produção de energia e na síntese de componentes estruturais, bem como a

destruição ou inativação de material genético (KIM, MARSHALL e WEI, 1995). Os

grupos hidroxilas fenólicos são bastante reativos e formam pontes de hidrogênio com

sítios ativos de enzimas-alvo, inativando-as (PORTE e GODOY, 2001).

5.5 Atividade antibacteriana por microdiluição

5.5.1 Concentração inibitória mínima (CIM)

As concentrações inibitórias mínimas obtidas pelos óleos de P. sobraleanum, P.

myrsinites 2, P. myrsinites 3, P. myrsinites 1 e P. guajava, estão representados na

Tabela 10.

O óleo essencial do P. myrsinites 2 apresentou uma CIM para S. aureus ATCC

12692 de 256 µg/mL; para S. aureus (MR 358) de 512 µg/mL; para E. coli (MR 27) a

CIM obtida foi de 64 µg/mL e para a linhagem B. cereus ATCC 33018, 256 µg/mL. As

demais linhagens, E. coli ATCC 25922 e P. aeruginosa ATCC 15442, a CIM obtida foi

considerada ≥ 1024 µg/mL.

De acordo com a classificação de Aligianis et al. (2001), os resultados obtidos

demonstram que as linhagens S. aureus ATCC 12692, S. aureus MR 358, E. coli MR 27

e B. cereus ATCC 33018, foram inibidas fortemente (CIM até 500 µg/mL) pelo óleo de

P. myrsinites 2 e apresentou inibição moderada (CIM entre 600 e 1500 µg/mL) frente a

E. coli ATCC 25922 e P. aeruginosa ATCC 15442.

O óleo de P. myrsinites 3 apresentou CIM de 512 µg/mL para duas linhagens

testadas, E. coli ATCC 25922 e P. aeruginosa ATCC 15442. Para as outras linhagens

testadas, S. aureus ATCC 12692, S. aureus (MR 358), E. coli (MR 27) e B. cereus

ATCC 33018 a CIM obtida foi ≥ 1024 µg/mL. A inibição do óleo frente às bactérias

Gram-negativas E. coli 25922 e P. aeruginosa 15442 foi considerada forte (MIC até

500 µg/mL), no entanto nas demais linhagens, S. aureus ATCC 12692, S. aureus (MR

358), E. coli (MR 27) e B. cereus ATCC 33018, obteve inibição moderada (MIC entre

600 e 1500 µg/mL).

As linhagens E. coli MR 27 e P. aeruginosa ATCC 15442 apresentaram para o

óleo essencial de P. myrsinites 1 uma CIM de 512 µg/mL, possuindo forte inibição

(MIC até 500 µg/mL) frente a essas linhagens. As demais linhagens testadas, S. aureus

ATCC 12692, S. aureus MR 358, E. coli ATCC 25922 e B. cereus ATCC 33018

apresentaram CIM ≥ 1024 µg/mL, apresentando, o óleo, uma inibição moderada (MIC

acima de 1600 µg/mL).

A CIM obtida para o óleo de P. sobraleanum frente à S. aureus ATCC 12692 e

S. aureus MR 358 foi de 64 µg/mL. As linhagens E. coli MR 27 e B. cereus ATCC

33018 obtiveram CIM igual a 32 e 16 µg/mL, respectivamente, E. coli ATCC 25922 e

P. aeruginosa

ATCC 15442 apresentaram CIM ≥ 1024 µg/mL.

Este óleo apresentou frente às linhagens Gram-positivas, S. aureus ATCC

12692, S. aureus MR 358 e B. cereus ATCC 33018, e frente à Gram-negativa E. coli

MR 27, uma forte inibição (CIM até 500 µg/mL), enquanto que para as linhagens,

Gram-negativas, E. coli ATCC 25922 e P. aeruginosa

ATCC 15442, demonstrou

inibição moderada (CIM entre 600 e 1500 µg/mL).

O óleo de P. guajava apresentou CIM ≥ 1024 µg/mL frente a S. aureus ATCC

12692, E. coli ATCC 25922 e P. aeruginosa ATCC 15442, apresentando inibição

moderada (CIM entre 600 e 1500 µg/mL). Para as duas linhagens Gram-positivas S.

aureus ATCC 6538 e B. cereus ATCC 33018 o CIM obtido foi de 64 e 32 µg/mL,

respectivamente, sendo a atividade do óleo classificada como forte (CIM até 500

µg/mL).

Os melhores resultados obtidos para análise através do CIM, foram apresentados

pelos óleos de P. sobraleanum e P. guajava, que possivelmente devem estar

relacionados com os constituintes majoritários, 1,8-cineol e limoneno, respectivamente,

presentes nesses óleos, vistos que estes apresentam relatos de atividade antimicrobiana

(ARANGO, SÁNCHEZ e GALVIS, 2004; TAKAHASHI, KOKUBO e SAKAINO,

2004; SONBOLI, BABAKHANI e MEHRABIAN, 2006; HAMMER, CARSON e

RILEY, 2000; NAVARRO et al., 1996; CASTRO et al., 2004; VIEGAS JÚNIOR,

2003; SCHUCK et al., 2001).

Vários trabalhos indicam a atividade do gênero Psidium contra diversas espécies

de bactérias patogênicas como S. mutans, B. subtillis, S. epidermidis, P. lundensis e B.

cereus (VIEIRA et al., 2001 ; SOUZA et al., 2004; BRIGHENTI et al., 2008; HEMA,

KUMARAVEL e ELANCHEZHIYAN, 2009). Os resultados obtidos neste estudo

foram superiores aos obtidos por Cheruiyot, Olila e Kateregga (2009), onde o extrato

metanólico de P. guajava apresentou CIM de 500 e 250 mg/mL frente as linhagens

como E.coli e P. aueruginosa.

Os estudos de Sanches et al. (2005) e Abdelrahim et al. (2002),com extratos de

espécies desse gênero,confirmam os resultados apresentados aqui para as linhagens S.

aures, E. coli e P. aeruginosa, onde os valores do CIM não superam 1500 µg/mL.

Todos os óleos testados apresentaram frente às linhagens Gram-negativas E. coli

ATCC 25922 e P. aeruginosa

ATCC 15442 uma CIM igual ou superior a 512 µg/mL,

indicando que esses óleos possivelmente só apresentam ação frente as essas linhagens

em altas concentrações. Esta inibição moderada frente a linhagens desse grupo pode ser

explicada por causa das características específicas atribuídas a ele, pois a membrana

externa das bactérias Gram-negativas apresenta uma barreira à penetração de inúmeras

moléculas, e o espaço periplasmático contém enzimas, que são capazes de quebrar

moléculas estranhas a partir do exterior (SANCHES et al., 2005).

Tabela 10. Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos óleos essenciais de Psidium

sobraleanum, Psidium myrsinites 1, Psidium myrsinites 3, Psidium myrsinites 2 e

Psidium guajava.

Amostras testadas / Concentrações obtidas (µg/mL)

Bactérias

testadas

Psidium

myrsinites

Psidium

myrsinites

Psidium

myrsinites 1

Psidium

sobraleanum

P. guajava

S. aureus

ATCC

12692

256 ≥1024 ≥1024 64 ≥1024

S. aureus

MR 358

512 ≥1024 ≥1024 64 Z

E. coli

ATCC

25922

≥1024 512 ≥1024 ≥1024 ≥1024

E. coli

MR 27

64 ≥1024 512 32 Z

B. cereus

ATCC

33018

256 ≥1024 ≥ 1024 16 64

aeruginosa

ATCC

15442

≥1024 512 512 ≥1024 ≥1024

S. aureus

ATCC 6538

Z Z Z Z 32

Z – não apresentou atividade

5. 5.2 Atividade moduladora

A atividade moduladora foi realizada apenas para os óleos que apresentaram

CIM inferior a 512 µg/mL. Sendo assim, apenas os óleos de P. sobraleanum, P.

myrsinites 2 e P. guajava foram submetidos a esse ensaio. Os resultados obtidos estão

apresentados nas tabelas 11 a 13.

Tabela 11. Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium sobraleanum.

OEAV

Linhagens/CIM

Antibiótico

(1024

µg/mL)

[8µg/mL]

S.aureus

ATCC

12692

C+

[8µg/mL]

S.aureus

MR 358

C+

[4µg/mL]

E.coli

MR 27

C+

[2µg/mL]

B.cereus

ATCC

33018

C+

Canamicina 128 32 32 64 16 64 16 8

Amicacina 64 32 32 8 16 16 8 16

Gentamicina

16 8 4 8 2 8 8 2

Neomicina 64 32 32 8 8 32 64 16

OEAV – Óleo de araçá de veado

O óleo de P. sobraleanum testado frente a S. aureus ATCC 12692 não mostrou

efeito sinérgico em associação com nenhum dos antibióticos testados. Quando

comparado com os controles observou-se que o efeito apresentado é antagônico, já que

ele apresenta uma diminuição da atividade do antibiótico.

A linhagem S. aureus (MR 358) também foi utilizada frente ao óleo de P.

sobraleanum e a associação com os antibióticos demonstrou um efeito antagônico em

associação com a canamicina, amicacina e neomicina, e sinérgico frente à gentamicina.

O óleo indicou atividade frente a E. coli (MR 27) apresentando, em associação

com os antibióticos canamicina, gentamicina e neomicina, um aumento da atividade

desses aminoglicosídeos. Contudo, em associação com a amicacina, o óleo não

apresentou nenhuma interferência sobre a ação do mesmo frente à linhagem testada.

A linhagem B. cereus ATCC 33018 se mostrou sensível as associações do óleo

com os antibióticos. A associação com a amicacina e gentamicina promoveu um

aumento do espectro de ação e com a canamicina e neomicina demonstrou uma

diminuição da ação dos mesmos.

Tabela 12. Atividade moduladora do óleo essencial Psidium myrsinites 2.

OEAP

Linhagens/CIM

Antibiótico

(1024 µg/mL)

[32 µg/mL]

S.aureus

ATCC 12692

C+

[8µg/mL]

E.coli

MR27

C+

[32 µg/mL]

B.cereus

ATCC 33018

C+

Canamicina 32 32 8 64 8 8

Amicacina 128 32 8 16 ≥1024 16

Gentamicina 4 8 2 8 8 2

Neomicina 8 32 16 32 16 16

OEAV – Óleo de araçá de veado

O óleo essencial de P. myrsinites 2, testado frente a S. aureus 12692 demonstrou

atividade em associação com todos os antibióticos usados, com a gentamicina e

neomicina o óleo promoveu um aumento da atividade do antibiótico, porém com a

amicacina o efeito obtido foi o inverso, houve uma diminuição da ação. A associação

com a canamicina não apresentou nenhum tipo de interação.

O ensaio também foi realizado frente à linhagem E. coli (MR 27), obtendo-se

para todas as associações óleo/antibiótico um efeito sinérgico que promoveu um

aumento da atividade dos aminoglicosídeos. Entretanto, frente à linhagem B. cereus

ATCC 33018 essa associação só apresentou interação com o antibiótico gentamicina,

promovendo um efeito antagônico, para os demais antibióticos o óleo não modificou

seus espectros de ação.

Tabela 13. Atividade moduladora do óleo essencial de Psidum guajava.

OEG

Linhagens/CIM

Antibiótico

1024 µg/mL

[4 µg/mL]

S.aureus

ATCC 6538

C+

[8 µg/mL]

B.cereus

ATCC 33018

C+

Canamicina 16 128 32 8

Amicacina 32 64 64 16

Gentamicina 4 128 16 2

Neomicina 8 128 32 16

OEG – Óleo da goiaba

A linhagem S. aureus ATCC 6538 foi sensível a todas as associações óleo de P.

guajava /antibiótico, indicando em todos os casos um aumento da atividade dos

aminoglicosídeos. No entanto, observou-se para a linhagem B. cereus ATCC 33018, um

efeito antagônico, caracterizado pela diminuição do espectro do antibiótico.

Os resultados do ensaio da atividade moduladora indicaram que o óleo de P.

sobraleanum, apenas frente à linhagem S.aureus ATCC 12692, apresentou efeito

antagônico nas associações com todos os antibióticos usados. Além disso, o óleo de P.

myrsinites 2, testado frente a E. coli (MR 27), assim como o óleo de P. guajava frente a

S. aureus ATCC 6538, indicaram ação sinérgica nas associações com todos os

aminoglicosídeos .

Estes resultados indicam que todos os óleos usados neste ensaio apresentaram

sinergismo com um ou mais antibióticos, frente à pelo menos uma linhagem testada,

demonstrando que essa associação pode promover benefícios, diminuindo a resistência

dos patógenos a

os antibióticos, tornando-se alternativas interessantes no combate a esses

microorganismos (LU et al., 2007; MBWAMBO et al., 2007).

O sinergismo apresentado por esses óleos confirmam os dados encontrados em

outros estudos, que demonstram que produtos naturais e vários compostos, têm

atividade direta contra muitas espécies de bactérias, reforçando a atividade de um

antibiótico específico, revertendo à resistência natural de bactérias específicas aos

antibióticos administrados, promovendo a eliminação de plasmídeos de bactérias como

Escherichia coli, e inibindo as funções de transporte da membrana plasmática em

relação aos que receberam antibióticos (JANA e DEB, 2006; SMITH et al., 2007).

A relação de interação entre óleo e antibiótico acontece de diversas maneiras,

mas comumente ocorre pela na membrana, onde o óleo essencial pode interagir e afetar

a membrana plasmática dos microorganismos, interferindo com a atividade da cadeia

respiratória e da produção de energia (RODRIGUES, COSTA e COUTINHO, 2010),

tornando-a mais permeável à absorção dos antibióticos, e promovendo à fuga de

constituintes vitais da célula bacteriana (BURT , 2004; JUVEN et al, 1994).

Diante dos resultados obtidos pelos óleos em todos os métodos avaliados, é

possível obter conclusões e realizar comparações.

As possíveis diferenças obtidas pelos métodos de contato gasoso, de atividade

moduladora e concentração inibitória mínima (CIM) estão relacionadas com a interação

ocorrida entre os microorganismos, os antibióticos e os óleos.

No método de contato gasoso a interação ocorre de maneira indireta, pois as

substâncias voláteis do óleo reagem com o antibiótico sem o contato direto de suas

substâncias. O mecanismo pelo qual ocorre esse tipo de interação pode ser pelo

enfraquecimento do sistema de enzimas bacteriano, que é um potente mecanismo de

ação, e pode acontecer devido a absorção de vapor direta pelos microorganismos e pela

absorção do vapor no meio (WENDAKOON e SAKAGUCHI, 1995; RODRIGUES,

COSTA e COUTINHO, 2010), promovendo dessa forma a morte do microorganismo.

Todavia, nos métodos de atividade moduladora e CIM, os antibióticos, os óleos

e os microorganismos interagem diretamente durante o período de crescimento das

linhagens, possibilitando uma maior reação das substâncias contidas nos óleos com os

antibióticos.

5.6 Atividade antifúngica pelo método de difusão em disco

Os resultados das atividades antibacteriana dos óleos pelo método de difusão em

agar estão representados na Tabela 14, abaixo.

Tabela 14. Atividade antifúngica pelo método de difusão em disco dos óleos de Psidium sobraleanum, Psidium myrsinites 2, Psidium myrsinites

1, Psidium myrsinites 3 e Psidium guajava.

Óleos Cepas

Concentração/Diâmetro do halo (mm)

10% 5% 2,5% 1,25% 0,6% 0,3%

CET.

(10%)

Psidium

sobraleanum

C. a (ATCC

40006)

14,5±0,70 9,5±0,70 7,5±0,70 10,5±0,70 8,0±1,41 0,0±0,0

C. k (ATCC

6538)

12,5±0,70 8,5±0,70 8,0±1,41 6,5±0,70 0,0±0,0 0,0±0,0

C.t (ATCC

40042)

11,5±0,70 10,5±0,70 10,0±0,0 9,5±0,70 9,0±0,0 6,5±0,70

Psidium

myrsinites 1

C. a (ATCC

40006)

10,0±0,0 9,5±0,70 8,5±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

C. k (ATCC

6538)

13,0±1,41 10,5±0,70 0,0±0,0 0,±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

C.t (ATCC

40042)

9,0±0,0 8,5±0,70 7,0±1,41 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

Psidium

myrsinites 2

C. a (ATCC

40006)

11,0±1,41 10,0±0,0 8,5±0,70 7,5±0,70 7,0±0,0 0,0±0,0

C. k (ATCC

6538)

14,0±0,0 11,5±0,70 9,0±0,0 8,5±0,70 0,0±0,0 0,0±0,0

C.t (ATCC

40042)

10,0±0,70 8,5±0,70 8,0±0,70 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

Psidium

myrsinites 3

C. a (ATCC

40006)

9,0±0,0 7,5±0,70 7,0±0,0 7,0±1,41 0,0±0,0 0,0±0,0

C. k (ATCC

6538)

7,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

C.t (ATCC

40042)

0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

Psidium guajava

C. a (ATCC

40006)

12,0±0,0 8,5±0,70 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

C. k (ATCC

6538)

9,0±0,0 8,5±0,70 7,0±0,0 6,5±0,70 0,0±0,0 0,0±0,0

C.t (ATCC

40042)

0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0

C.a – Candida albicans; C. k – Candida kusei; C.t – Candida tropicallis

CET. – Cetoconazol (10%)

O óleo essencial de P. sobraleanum apresentou atividade frente a todas as cepas

testadas. A cepa C. albicans ATCC 40006 apresentou inibição de 14,5 mm, enquanto

que para C. krusei ATCC 6538 e C. tropicalis ATCC 40042 a inibição foi de 12,5 e

11,5 mm, respectivamente, sendo todas as cepas classificadas como possuindo

sensibilidade intermediária. Entretanto, quando os resultados foram comparados com o

controle cetoconazol foi possível observar que o óleo não apresentou halo superior ao

do controle utilizado.

A atividade demonstrada neste estudo pelo óleo de P. sobraleanum pode estar

relacionada com a presença do composto 1,8-cineol presente como um dos majoritários

(16,2%) neste óleo. Esse constituinte apresenta diversas atividades, dentre elas

vasorelaxante, atividade antimicrobiana, antiinflamatória, larvicida, antioxidante e está

presente também nos óleos de Malaleuca alternifólia e em espécies do gênero Salvia

apresentando atividade antimicótica e antimicrobiana (SONBOLI, BABAKHANI e

MEHRABIAN, 2006; HAMMER, CARSON e RILEY, 2000; HAMMER, CARSON e

RILEY, 2002)

Os óleos de P. myrsinites 1 e P. myrsinites 2 também foram capazes de inibir o

crescimento de todas as cepas usadas. Em ambos, o melhor resultado foi obtido frente a

C. krusei ATCC 6538, onde para o óleo de P. myrsinites 1, o halo obtido foi de 13 mm e

para o P. myrsinites 2, 14 mm, sendo as cepas classificadas como apresentando

sensibilidade intermediária, bem como nos demais fungos que apresentaram os

seguintes halos de inibição: C. albicans ATCC 40006 – 10 mm para o óleo de P.

myrsinites 1 e 11 mm para o P. myrsinites 2 e C. tropicallis ATCC 40042 – 9 e 10 mm

para os óleos de P. myrsinites 1 e P. myrsinites 2, respectivamente.

As atividades apresentadas pelos óleos supracitados complementam as

atividades encontradas com outras espécies do gênero Psidium, sobre essas e outras

cepas de fungos (NAIR, KALARIYA e CHANDA, 2007; ALVES et al., 2006).

As cepas C. albicans ATCC 40006 e C. krusei ATCC 6538 foram sensíveis aos

óleos de P. myrsinites 3 e P. guajava, apresentando halos de inibição de 9 e 7 mm para

o primeiro e 12 e 9 mm para P. guajava, sendo as cepas em ambos os óleos,

classificadas como possuindo sensibilidade intermediária a estes. Apesar da

sensibilidade das outras cepas de Candida, a levedura C. tropicalis 40042 foi insensível

aos dois óleos ensaiados.

O melhor resultado obtido dentre todos os óleos testados foi o de P.

sobraleanum, que foi capaz de inibir o crescimento de todas as leveduras até a

concentração de 1,25%. No entanto, nenhum deles apresentou atividade superior ao

cetoconazol, usado como controle no ensaio.

Os resultados obtidos, pelo método difusão em disco, estão de acordo com

outros trabalhos que apresentaram atividade antifúngica frente a várias cepas fúngicas

(NAIR e CHANDA, 2007; ALVES et al., 2006; ALVES et al., 2009).

5.7 Atividade antifúngica por microdiluição

5.7.1 Concentração Inibitória Mínima (CIM)

Os resultados da concentração inibitória mínima (CIM) para os óleos essenciais

em estudo encontram-se na Tabela 15. Os dados obtidos foram classificados de acordo

com o trabalho de Menezes et al. (2009) que indica os seguintes critérios de aceitação

do CIM para antifúngicos: CIM abaixo de 100 mg/mL– boa atividade antifúngica; CIM

entre 101 e 500 mg/mL – Moderada atividade antifungica; CIM entre 501 e 1000

mg/mL– Fraca atividade antifúngica e CIM acima de 1001 mg/mL – Inativo.

Os óleos de P. myrsinites 2 e P. myrsinites 3 apresentaram uma CIM de 512

µg/mL para os três fungos testados, C. albicans ATCC 40006, C. krusei ATCC 6538 e

C. tropicalis ATCC 40042. De acordo com a classificação usada, os dois óleos

apresentaram boa atividade antifúngica (CIM abaixo de 100 mg/mL), frente às três

cepas testadas.

O óleo essencial de P. myrsinites 1 apresentou para as cepas C. albicans ATCC

40006 e C. krusei ATCC 6538 uma CIM de 512 µg/mL, enquanto que para C. tropicalis

ATCC 40042, obteve CIM de 128 µg/mL. Este óleo apresentou boa atividade (CIM

abaixo de 100 mg/mL) frente a todas as cepas ensaiadas.

Todas as cepas testadas frente ao óleo de P. sobraleanum demonstraram

sensibilidade indicando uma CIM de: 256 µg/mL para C. albicans ATCC 40006 e C.

tropicalis ATCC 40042, e 128 µg/mL para C. krusei ATCC 6538. Nesse caso, o óleo de

P. sobraleanum apresentou boa atividade antifúngica (CIM abaixo de 100 mg/mL).

A concentração inibitória mínima (CIM) do óleo essencial de P. guajava foi de

512 µg/mL para todos os fungos testados, C. albicans ATCC 40006, C. krusei ATCC

6538 e C. tropicalis ATCC 40042, demonstrando a boa atividade (CIM abaixo de 100

mg/mL) deste óleo frente às cepas ensaiadas.

Todos os óleos testados apresentaram boa atividade frente aos três fungos

utilizados, no entanto, os melhores resultados foram encontrados pelo óleo de P.

myrsinites 1, que apresentou CIM de 256 µg/mL frente a C. albicans ATCC 40006 e

C.tropicalis ATCC 40042 e CIM de 128 µg/mL frente a C. krusei ATCC 6538.

Esta atividade pode estar relacionada com a presença do constituinte 1,8-cineol,

majoritário neste óleo (16,2%), que apresenta comprovada atividade antifúngica

(SONBOLI, BABAKHANI e MEHRABIAN, 2006; ARANGO, SÁNCHEZ e

GALVIS, 2004; TAKAHASHI, KOKUBO e SAKAINO, 2004; SALARI et al., 2006;

CERMELLI et al., 2008).

Esses resultados apresentam grande relevância e indicam novos agentes

terapêuticos que podem ser utilizados no combate a infecções fungicas, que são de

difícil tratamento, fato relacionado à elevada resistência da Candida frente à ação de

alguns antifúngicos convencionais (ARAÚJO et al., 2004). Além disso, esses novos

agentes terapêuticos podem auxiliar na prevenção e no tratamento das infecções

fúngicas com eficácia, custos baixos e menores efeitos colaterais (MENEZES et al.,

2009).

A partir dos resultados obtidos da CIM foi realiza a atividade moduladora do

antibiótico para todos os óleos em estudo, já que eles apresentaram CIM ≥ 512 µg/mL.

Em paralelo a esse ensaio também foi realizada a concentração fungicida mínima

(CFM), utilizada para confirmar a atividade do óleo.

Tabela 15. Concentração Inibitória Mínima dos óleos essenciais de Psidium myrsinites

2, Psidium myrsinites 3, Psidium myrsinites 1, Psidium sobraleanum e Psidium

guajava.

C.a. – Candida albicans ; C.k.- Candida krusei; C.t. – Candida tropicalis

5.7.2 Concentração Fungicida Mínima (CFM)

Esse ensaio foi considerado um teste confirmatório para a visualização do

crescimento ou não das cepas, evidenciando as atividades do óleo como fungiostático,

quando apenas interrompe o crescimento do fungo ou fungicida, quando inibi o

crescimento deste.

Os resultados obtidos indicam que todos os óleos utilizados, apenas foram

capazes de interromper o crescimento fúngico (Tabela 16), levando-se em consideração

apenas a CIM obtida por cada um deles no ensaio anterior.

Amostras testadas /Concentrações obtidas (µg/mL)

Fungos testados

Psidium

myrsinites

Psidium

myrsinites

Psidium

myrsinites 1

Psidium

sobraleanum

Psidium

guajava

C. a. ATCC 40006 512 512 512 256 512

C. k. ATCC 6538 512 512 512 128 512

C. t. ATCC 40042 512 512 128 256 512

Tabela 16. Concentração Fungicida Mínima (CFM) dos óleos essenciais das espécies

de Psidium.

Óleo Linhagens CFM (µg/mL)

Psidium myrsinites 2

C. albicans

ATCC 40006

≥ 512

C. krusei

ATCC 6538

≥ 512

C.tropicalis

ATCC 40042

≥ 512

Psidium myrsinites 1

C. albicans

ATCC 40006

≥ 512

C. krusei

ATCC 6538

≥ 512

C.tropicalis

ATCC 40042

≥ 256

Psidium myrsinites 3

C. albicans

ATCC 40006

≥ 512

C. krusei

ATCC 6538

≥ 512

C.tropicalis

ATCC 40042

≥ 512

Psidium sobraleanum

C. albicans

ATCC 40006

≥256

C. krusei

ATCC 6538

≥ 128

C.tropicalis

ATCC 40042

≥128

Psidium guajava

C. albicans

ATCC 40006

≥ 512

C. krusei

ATCC 6538

≥ 512

C.tropicalis

ATCC 40042

≥ 512

CFM – Concentração Fungicida Mínima; C.a. – Candida albicans ; C.k.- Candida krusei; C.t. –

Candida tropicalis

5.7.3 Atividade moduladora

A atividade moduladora foi realizada apenas para os óleos que apresentaram

CIM ≥ 512 µg/mL, enquadrando os óleos essenciais das cinco espécies em estudo. Os

resultados podem ser observados nas Tabelas 17 a 21, abaixo.

Tabela 17. Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium myrsinites 2.

OEAP

Linhagens/MIC

Antibiótico

[32 µg/mL]

C.albicans

ATCC 40006

C+

[16 µg/mL]

C. krusei

ATCC 6538

C+

[32 µg/mL]

C. tropicalis

ATCC 40042

C+

Fluconazol 256 512

256 128

128 64

Cetoconazol

256 512

16 64 128 256

OEAP – Óleo essencial de araçá preto

O óleo de P. myrsinites 2 apresentou efeito sinérgico em associação com os dois

antifúngicos testados, cetoconazol e fluconazol, frente a C. albicans ATCC 40006. Nas

demais cepas, C. krusei e C. tropicalis, o óleo apresentou efeito antagônico na

associação com os antifúngicos.

Tabela 18. Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium sobraleanum.

OEAV

Linhagens/MIC

Antibiótico

[32 µg/mL]

C.albicans

ATCC 40006

C+

[16 µg/mL]

C. krusei

ATCC 6538

C+

[32 µg/mL]

C. tropicalis

ATCC 40042

C+

Fluconazol 256 512

256 32 128 128

Cetoconazol

256 512

8 8 64 64

OEAV – Óleo essencial de araçá de veado

Para o óleo de P. sobraleanum, a cepa C. albicans ATCC 40006, apresentou

sensibilidade a associação óleo/fluconazol e óleo/cetoconazol, sendo demonstrado um

efeito sinérgico. A associação do óleo com o fluconazol, frente à cepa C. krusei ATCC

6538 apresentou efeito antagônico, promovendo a diminuição do espectro de ação do

antifúngico. No entanto, em associação com o cetoconazol, frente à mesma cepa, o óleo

não promoveu nenhuma diferença na atividade apresentada por ele.

A associação do óleo com os antifúngicos, frente a cepa C. tropicalis ATCC

40042, não demonstrou nenhum efeito na ação destes antifúngicos.

Tabela 19. Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium myrsinites 1.

OEAE

Linhagens/MIC

Antibiótico

[32 µg/mL]

C.albicans

ATCC 40006

C+

[16 µg/mL]

C. krusei

ATCC 6538

C+

[32 µg/mL]

C. tropicalis

ATCC 40042

C+

Fluconazol 0,5 256

256 128

64 64

Cetoconazol

0,5 256

64 16 64 64

OEAE – Óleo essencial de araçá encarnado

O óleo essencial de P. myrsinites 1 apresentou efeito sinérgico em associação

com dois antifúngicos frente a C. albicans ATCC 40006. Na associação

óleo/antifúngico, esta promoveu efeito antagônico, com o cetoconazol e com o

fluconazol, frente a C. krusei ATCC 6538, entretanto frente a C. tropicalis ATCC

40042 a interação não apresentou nenhuma diferença nos resultados obtidos.

Tabela 20. Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium myrsinites 3.

OEAA

Linhagens/MIC

Antibiótico

[16 µg/mL]

C. krusei

ATCC 6538

C+

[32 µg/mL]

C. tropicalis

ATCC 40042

C+

Fluconazol 256 256

512 256

Cetoconazol

32 0,5 512 512

OEAA – Óleo essencial de araçá amarelo

A cepa C. albicans ATCC 40006, foi sensível a associação do cetoconazol e

fluconazol com óleo de P. myrsinites 3, esta interação promoveu um aumento da

atividade dos antifúngicos sobre essa cepa.

A interação entre o óleo e o cetoconozal sobre a cepa C. krusei ATCC 6538,

promoveu uma diminuição na atividade deste antifúngico, indicando uma relação de

antagonismo, porém a associação com o fluconazol não demonstrou nenhum efeito

sobre este fungo.

O óleo de P. myrsinites 3 em associação com o fluconazol promoveu um efeito

antagônico sobre a cepa C. tropicalis 40042, diminuindo a ação do antifúngico sobre

esta levedura. A associação com o cetoconazol frente a esta mesma cepa, no entanto,

não promoveu nenhuma diferença no espectro de ação deste antifúngico.

Tabela 21. Atividade moduladora do óleo essencial de Psidium guajava.

OEG

Linhagens/MIC

Antibiótico

[32 µg/mL]

C.albicans

ATCC 40006

C+

[16 µg/mL]

C. krusei

ATCC 6538

C+

[32 µg/mL]

C. tropicalis

ATCC 40042

C+

Fluconazol 16 128

256 128

512 256

Cetoconazol

64 128

32 8 512 256

OEG – Óleo essencial da goiaba

O óleo essencial de P. guajava não apresentou modulação da atividade em

nenhum dos antifúngicos testados sobre nenhuma das cepas usadas, C. albicans ATCC

40006, C. krusei ATCC 6538 e C. tropicalis ATCC 40042.

Estes resultados indicam que a maioria dos óleos testados não foram capazes de

modular a atividade dos antifúngicos usados ou apresentaram efeito antagônico em

associação com eles.

Apesar disso, os óleos de P. myrsinites 2, P. sobraleanum, P. myrsinites 1 e P.

myrsinites 3, promoveram, em associação com os antifúngicos cetoconazol e

fluconazol, efeito sinérgico frente à cepa de C. albicans ATCC 40006.

O uso de produtos naturais em associação com os recursos comercial disponíveis

tem sido freqüentemente documentado, demonstrando o uso combinado de produtos

naturais e medicamentos industrializados em tratamento de doenças respiratórias,

digestivas e acidente vascular cerebral (SHIN et al., 2007; CALVET-MIR, REYES-

GARCÍA e TANNER, 2008; VANDEBROEK et al., 2008).

CONCLUSÃO

6. CONCLUSÃO

Os resultados obtidos no presente trabalho permitem concluir que:

• O levantamento bibliográfico indicou que a espécie P. guajava foi a mais estudada

dentre todas as outras espécies do gênero Psidium no período de 2000 a 2010.

Destacando-se os estudos com o extrato aquoso das folhas e a atividade

antimicrobiana desta espécie.

• Os óleos essenciais das espécies do gênero Psidium apresentam constituição química

semelhantes.

• Um total de 36 constituintes foram identificados nos cinco óleos estudados,

apresentando como majoritários os seguintes composto: acetato de nerila, para as

espécies Psidium myrsinites 1 (32,7%) e Psidium myrsinites 3 (35,7%); 1,8 – cineol

(16,2%) para o óleo de Psidium sobraleanum; δ-cadinol (29,3%), para o óleo de

Psidium myrsinites 2 e limoneno (96,2%), para o óleo de Psidium guajava.

• Todos os óleos apresentaram atividade antimicrobiana, mesmo que discreta, no

screening bacteriano e antifúngico, frente um dos microorganismos testados e em pelo

menos uma concentração.

• Os óleos essenciais apresentaram atividade antimicrobiana proeminente, do ponto de

vista clínico. Todas as linhagens bacterianas foram sensíveis, com menor atividade

frente às linhagens Gram-negativas E. coli ATCC 25922 e P. aeruginosa

ATCC

15442.

• Os fungos também apresentaram sensibilidade a todos os óleos ensaiados,

apresentando melhores resultados com o óleo de Psidium myrsinites 1, onde o CIM

obtido foi de 0,5 µg/mL.

• Interferência dos óleos na atividade antimicrobiana foram observadas para todos os

aminoglicosídeos e antifúngicos analisados por microdiluição e contato gasoso, sendo

observada uma interação interessante de sinergismo na maioria das associações com

os óleos.

• Os resultados obtidos indicam que os óleos essenciais das espécies do gênero Psidium

podem vir a ser potenciais agentes terapêuticos para o tratamento de patologias

causadas por agentes microbianos, atuando como antimicrobiano e modulador das

atividades de antibióticos.

• Estes resultados fornecem uma contribuição para o conhecimento das características

químicas e das atividades biológicas das espécies do gênero Psidium.

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