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GABRIEL DE SOUZA LIMA OLIVEIRA
Estudos de fontes de erros nos processos de
flebotomia com ênfase na estase venosa em
parâmetros bioquímicos.
Tese apresentada ao Curso de Pós-Graduação
em Ciências Farmacêuticas do Setor de
Ciências da Saúde da Universidade Federal do
Paraná, como requisito parcial para a obtenção
do título de Mestre em Ciências Farmacêuticas
– Análises Clínicas.
Orientadores:
Profª. Drª. Marileia Scartezini
Prof. Dr. Nairo Massakazu Sumita
Curitiba
2007
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ii
Dedicado à
Maria Tereza
Geraldo
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iii
“Preferi a sabedoria aos cetros e tronos e, em
comparação com ela, julguei sem valor a riqueza; a
ela não igualei nenhuma pedra preciosa, pois, a seu
lado, todo o ouro do mundo é um punhado de areia
e, diante dela a prata será como lama.”
Sb 7, 8-9
iv
SUMÁRIO
pág.
LISTA DE FIGURAS
vi
LISTA DE TABELAS
viii
LISTA DE ABREVIATURAS
x
RESUMO
xii
ABSTRACT
xiii
1
Introdução
1
2
Objetivos
3
2.1 Objetivo geral 3
2.2 Objetivos específicos 3
3
Revisão da Literatura
4
3.1 A fase pré-analítica
3.2 Fatores associados à coleta da amostra que afetam os ensaios laboratoriais
3.2.1 Efeito do uso do torniquete sobre ensaios laboratoriais
3.2.2 O sistema de iluminação transdérmica
3.2.3 Efeito dos tubos de coleta a vácuo na variação pré-analítica
3.2.4 Gestão da qualidade
4
7
8
14
15
17
4
Materiais e Métodos
19
4.1 Aprovação do comitê de ética em pesquisa 19
4.2 Estudos da fase pré-analítica: seleção dos laboratórios 19
4.2.1 Critérios de inclusão 21
4.2.2 Critérios de exclusão 21
4.3 Identificação e quantificação das fontes de erro associadas à coleta de
sangue com ênfase na flebotomia
21
4.4 Avaliação de desempenho do sistema de iluminação transdérmica
(Venoscópio IV®) na coleta de sangue
25
4.5 Avaliação do efeito da estase venosa em ensaios laboratoriais de rotina 25
4.5.1 Seleção dos pacientes voluntários e formação dos grupos 26
4.5.2 Padronização do procedimento de coleta das amostras de sangue venoso 26
4.5.3 Processamento e armazenamento das amostras 27
4.5.4 Otimização do procedimento analítico 27
4.5.5 Determinação analítica dos ensaios laboratoriais de rotina em bioquímica
clínica avaliados
28
4.6 Análises estatísticas 28
5
Resultados
30
5.1 Seleção dos laboratórios 30
5.2 Desempenho dos flebotomistas 31
5.3 Fontes de erro associado à coleta de sangue nos laboratórios em estudo 34
5.4 Avaliação de desempenho do sistema de iluminação transdérmica na coleta
de sangue
35
5.4.1 Incidência de nova coleta do espécime diagnóstico coletado com o
sistema de iluminação transdérmica
36
5.5 Estudo do efeito da estase venosa em ensaios laboratoriais 36
v
6
Discussão
49
6.1 Seleção dos laboratórios 49
6.2 Desempenho dos flebotomistas 50
6.3 Fontes de erros associados à coleta de sangue nos laboratórios em estudo 52
6.4 Avaliação de desempenho do sistema de iluminação transdérmica na coleta
de sangue
52
6.5 Estudo do efeito da estase venosa em ensaios laboratoriais 53
6.5.1 Glicose 54
6.5.2 Proteínas totais e albumina 54
6.5.3 Cálcio total 55
6.5.4 Colesterol total e triglicérides 56
6.5.5 Fósforo sérico 57
6.5.6 Fosfatase alcalina 57
6.5.7 Potássio sérico 58
6.5.8 Sódio e magnésio 59
7
Conclusões
60
Referências Bibliográficas
61
vi
LISTA DE FIGURAS
pág.
Figura 1
Principais fontes de variação nos ensaios laboratoriais 04
Figura 2
Variação na concentração dos analitos após a mudança postural
de deitado para de pé
08
Figura 3
Exemplos de torniquetes 09
Figura 4
Representação esquemática do efeito da estase venosa induzida
pela aplicação do torniquete em constituintes do sangue
11
Figura 5
Variação na concentração de analitos após estase venosa
prolongada por 6 minutos
12
Figura 6
Efeito do torniquete e contração do músculo do antebraço
(clench) na potassemia
13
Figura 7
Princípio esquemático da iluminação transdérmica na
identificação de vasos sangüíneos
15
Figura 8
Seqüencia recomedada para tubos de coleta de sangue em
sistemas a vácuo
16
Figura 9
Homogeneização de tubos a vácuo por inversão 17
Figura 10
Comparação do desempenho dos flebotomistas quanto ao tempo
de aplicação do torniquete em laboratórios públicos e privados
33
Figura 11
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
glicose
37
Figura 12
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
proteínas totais
38
Figura 13
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
albumina
39
Figura 14
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
cálcio total
40
Figura 15
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
colesterol total
41
Figura 16
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
triglicérides
42
Figura 17
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
fósforo
43
Figura 18
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na atividade sérica de
fosfatase alcalina
44
Figura 19
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
potássio
45
vii
Figura 20
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
sódio
46
Figura 21
Porcentagem da diferença entre torniquete (T) e Venoscópio
(V) com o tempo de estase venosa na concentração sérica de
magnésio
47
viii
LISTA DE TABELAS
pág.
Tabela 1
Freqüência de erros na fase pré-analítica em laboratórios de
emergência
06
Tabela 2
Alterações na composição do soro quando a oclusão venosa é
prolongada de 1 minuto para 3 minutos
12
Tabela 3
Lista de verificação empregada na seleção dos laboratórios 20
Tabela 4
Lista de verificação utilizada para avaliar o desempenho dos
flebotomistas
22
Tabela 5
Ordem seqüencial e homogeneização correta para os tubos de
coleta em sistema a vácuo
24
Tabela 6
Analitos e metodologias empregadas no estudo 28
Tabela 7
Freqüência dos critérios de exclusão no processo de seleção dos
laboratórios
30
Tabela 8
Desempenho de 15 flebotomistas de laboratórios com
administração pública quanto ao tempo de aplicação do torniquete
31
Tabela 9
Desempenho de 15 flebotomista de laboratórios com
administração privada quanto ao tempo de aplicação do torniquete
32
Tabela 10
Freqüência dos erros observados durante a avaliação de
desempenho dos 30 flebotomistas durante a coleta de sangue
venoso periférico
34
Tabela 11
Dificuldades enfrentadas pelo flebotomista na utilização do
sistema de iluminação transdérmica (Venoscópio IV) antes e após
período de treinamento (1 semana) com o equipamento
35
Tabela 12
Freqüência de não conformidades que geravam nova coleta com a
utilização do sistema de iluminação transdérmica (Venoscópio IV)
36
Tabela 13
Efeito do tempo de estase venosa na concentração da glicose
sérica
37
Tabela 14
Efeito do tempo da estase venosa na determinação de proteínas
totais sérica
38
Tabela 15
Efeito do tempo da estase venosa na determinação de albumina
sérica
39
Tabela 16
Efeito do tempo da estase venosa na determinação de cálcio total
sérico
40
Tabela 17
Efeito do tempo da estase venosa na determinação de colesterol
total sérico
41
Tabela 18
Efeito do tempo da estase venosa na determinação triglicérides
sérico
42
Tabela 19
Efeito do tempo da estase venosa na determinação de fósforo
sérico
43
Tabela 20
Efeito do tempo da estase venosa na determinação de fosfatase
alcalina sérica
44
Tabela 21
Efeito do tempo da estase venosa na determinação do potássio
sérico
45
Tabela 22
Efeito do tempo da estase venosa na determinação do sódio sérico 46
ix
Tabela 23
Efeito do tempo da estase venosa na determinação de magnésio
sérico
47
Tabela 24
Sumário do efeito do tempo de aplicação do torniquete nos
parâmetros bioquímicos estudados
48
x
LISTA DE ABREVIATURAS
ALKP
Fosfatase alcalina
ANVISA
Agência Nacional de Vigilância Sanitária
AST
Aspartato aminotransferase
AV
Amplitude de variação
BD
Becton Dickinson
BNP
Peptídeo natriurético do tipo B
°C
Grau Celsius
CAP
College of American Pathologists
CEP-IDPC/FAJ
Comitê de Ética e Pesquisa - Instituto Dante Pazzanese de cardiologia /
Fundação Adib Jatene
CK
Creatino quinase
CLSI
Clinical and Laboratory Standards Institute
cm
Centímetros
CVa
Coeficientes de variação analítica
CVS
Centro de Vigilância Sanitária
dL
Decilitro
DP
Desvio padrão
EDTA
Ácido diamino tetracético
g
Grama
G
Grupo
L
Litro
LD
Lactato desidrogenase
Ltda
Limitada
xi
mg
Miligrama
mmHg
Milímetros de mercúrio
mmol
milimoles
n, N
Número total, tamanho amostral
NaF
Fluoreto de sódio
NBR
Norma brasileira
NCCLS
National Committee for Clinical Laboratory Science
p
Probabilidade
p
página
PALC
Programa de Acreditação de Laboratórios Clínicos
PNCQ
Programa Nacional de Controle de Qualidade
POP
Procedimento operacional Padrão
RDC
Resolução da Diretoria Colegiada
s
Segundos
SBAC
Sociedade Brasileira de Análises Clínicas
SBPC
Sociedade Brasileira de Patologia Clínica
T4
Tiroxina
U/L
Unidades por litro
xii
RESUMO
A fase pré-analítica compreende todos os procedimentos associados com o preparo do
paciente, coleta e transporte da amostra. Neste estudo, foram estudadas fontes de erros pré-
analíticos associados à flebotomia e o efeito do tempo de aplicação do torniquete nas
concentrações de vários ensaios presentes na rotina laboratorial. Este projeto tem a aprovação
do Comitê de Ética em Pesquisa. Foram selecionados para o estudo 10 laboratórios da cidade
de São Paulo, Brasil, sendo 5 de administração pública e os demais de gerenciamento privado.
Todos os laboratórios selecionados apresentaram sistemas analíticos automatizados,
programas de treinamento dos profissionais, manual da qualidade e bom desempenho em
programas de controle externo da qualidade. O desempenho de 30 flebotomistas, escolhidos
aleatoriamente, sendo 3 de cada laboratório, foi estudado quanto ao tempo de aplicação do
torniquete durante a coleta de sangue de 5 pacientes diferentes. Somente 2 flebotomistas
(6,6%) entre os avaliados atingiram o tempo médio de aplicação do torniquete dentro do
tempo máximo recomendado (<60segundos) em todas as coletas. Os flebotomistas oriundos
de laboratórios de administração pública apresentaram um tempo médio no tempo de
aplicação do torniquete significativamente maior quando comparado àqueles do setor privado
(98,9±10,6s vs. 69,9±10,6s; p<0,001). Este resultado sugere que os laboratórios privados
participantes deste estudo foram mais efetivos no treinamento de seus profissionais neste
tópico, quando comparados aos laboratórios públicos. Todos os laboratórios estudados
apresentaram elevada freqüência (67 a 100%) de procedimentos incorretos relacionados a (1)
recomendação para constrição do músculo do antebraço, (2) fricção do antebraço durante a
anti-sepsia, (3) seqüência de tubos de coleta à vácuo, e (4) homogeneização dos tubos de
sangue. O efeito de diferentes tempos de aplicação do torniquete (30, 60, 90, 120 e 180
segundos) sobre vários analitos presentes na rotina laboratorial, foram comparados com a
coleta de sangue utilizando um sistema de iluminação transdérmica (Venoscópio IV, Duan do
Brasil), que permite a venipunção sem o uso do torniquete. Cinqüenta voluntários para cada
tempo de aplicação do torniquete foram submetidos à coleta com o torniquete (braço direito) e
com o sistema de iluminação transdérmica (braço esquerdo) simultaneamente. Os analitos
estudados, proteínas totais, albumina, cálcio total, colesterol total, triglicerídeos, fosfatase
alcalina, fósforo, glicose, magnésio, sódio e potássio foram quantificados com o sistema
analítico de química seca Vitros 5.1 FS (Ortho-Clinical Diagnostics, Johnson & Johnson). O
efeito do tempo de aplicação do torniquete comparado à coleta com o sistema de iluminação
transdérmica mostrou (1) até 30 segundos de torniquete nenhuma determinação foi afetada,
(2) analitos de massa molecular elevada, como proteínas, e moléculas associadas com estas,
como o cálcio, apresentaram diferenças clinicas significativas (> 5%) após 90 segundos de
aplicação do torniquete, (3) analitos de peso molecular pequeno e difusíveis como glicose,
sódio, magnésio e fósforo foram pouco afetados (< 3%) pelo tempo de aplicação do
torniquete mesmo após 180 segundos, e (4) o potássio apresentou um padrão bifásico de
resposta, com rápida e significativa elevação (>5%) após somente 60 segundos de aplicação
do torniquete seguido de um perfil estável de elevação de cerca de 2-3% entre 90 e 180
segundos. Em síntese, nossos estudos mostraram que o laboratório precisa introduzir
procedimentos novos e específicos para monitorar os erros na fase pré-analítica com ênfase na
flebotomia. As listas de verificação e procedimentos desenvolvidos neste estudo podem ser
utilizadas como ferramentas efetivas para detectar erros e melhorar a qualidade na fase pré-
analítica.
Palavras-Chaves: variabilidade pré-analítica, flebotomia, coleta de amostra de sangue,
controle de qualidade, torniquete, transiluminador, Venoscópio.
xiii
ABSTRACT
The preanalytical phase comprehends all procedures associated with the patient preparation,
sample collection and transport for the laboratory. In this phase about 70% of clinical
laboratory errors occur. We studied sources of preanalytical errors associated with
phlebotomy and the effect of tourniquet time in serum levels of several routine assays. This
study was approved by the Committee for Ethics in Research. We selected 10 clinical
laboratories from Sao Paulo city, Brazil, being 5 of then manage by public healthcare others
from private administration. All the selected laboratories had automated equipments, training
professionals, quality control manual and high scores in external quality control programs.
The performance of 30 phlebotomists, randomly choose, 3 for each selected laboratory, was
observed for the tourniquet time application during the blood collect. The blood collection
procedures for five different patients were analyzed for each phlebotomist. Only two (6.6%)
studied phlebotomists achieved the mean tourniquet time recommended (<60seconds) in all
procedures. The phlebotomists from laboratory of public administration showed a
significative higher mean time of tourniquet application when compared to the private ones
(98.9±17.3s vs. 69.9±10.6s; p<0.001). This finding suggested that the studied private
laboratories were more effective in training their professionals than private ones in this
particular topic. All studied laboratories showed a high frequency (67 to 100%) of incorrect
procedures related to (1) recommended forearm clench, (2) friction the forearm during skin
disinfection, (3) sequences of vacuum blood tubes, and (4) blood collection tubes
homogenization. The effects of different tourniquet time application (30, 60, 90, 120, and
180seconds) in several routine analytes were compared to a blood collection with the
assistance of a transilluminator device (Venoscopio IV, Duan do Brasil) that allowed the
venipuncture without the use of the tourniquet. Fifty volunteers for each tourniquet time were
submitted to a blood collection with tourniquet (right arm) and simultaneously with the
transilluminator device (left arm). The studied analytes, total protein, albumin, total calcium,
total cholesterol, triglycerides, alkaline phosphatase, glucose, phosphorous, magnesium,
potassium and sodium were measured with Vitros 5.1 FS dry chemistry automated analyzed
(Ortho-Clinical Diagnostics, Johnson & Johnson). Comparison of the effects on the studied
analytes between tourniquet time and transilluminator device showed: (1) up to 30 seconds of
tourniquet do not affect any assay, (2) high molecular weight analytes, such as proteins, and
others associated with then, such as calcium, showed clinical significative differences (>5%)
after 90 seconds of tourniquet time, (3) low molecular weight and high diffusible analytes
such as glucose, sodium, magnesium and phosphorous were little affected (< 3.0%) for
tourniquet even after 180 seconds of tourniquet time, and (4) potassium showed a biphasic
pattern increasing rapidly for more than 5% after only 60 seconds of tourniquet followed by a
stable increase of about 2 – 3% after 90 to 180 seconds. In summary, our studied showed that
laboratory must introduce new and specific procedures to monitoring the preanalytical phase
errors with focus in the phlebotomy. The questionnaires and procedures developed in this
study could be used as an effective toll to detected errors and improved quality for the
preanalytical phase.
Key-words: preanalytic variability, phlebotomy, blood specimen collection, quality control,
tourniquet, transilluminator, venoscopio.
1 INTRODUÇÃO
A participação de um laboratório no diagnóstico é um processo dinâmico que se
inicia com coleta do espécime diagnóstico e termina com a emissão de um laudo. O
laboratório tem interfaces importantes com o paciente e com o clínico. Estas interações
demandam constantes atualizações de todos os profissionais envolvidos nas atividades
laboratoriais. Entre estas atividades, a identificação de fontes de erros e soluções
inovadoras para evitá-los se destaca na busca da excelência dos resultados e na
garantia da qualidade.
O processamento de uma amostra biológica em um laboratório pode ser
didaticamente caracterizado em três fases: pré-analítica, analítica e pós-analítica.
A fase pré-analítica consiste na preparação do paciente, coleta, manipulação e
armazenamento da amostra antes da determinação analítica, ou seja, engloba todas as
atividades que precedem a análise.
A fase analítica é caracterizada pela realização do ensaio propriamente dito e
tem entre elementos a validação do sistema metodológico a ser empregado, utilizando
como ferramenta a avaliação crítica do controle da qualidade interno e externo em
todas as ações que envolvem a obtenção do resultado.
A fase pós-analítica inicia-se com a geração do resultado e envolve todos os
procedimentos para que este seja eficaz, incluindo a participação do laboratório na
interpretação dos ensaios e caracterização do diagnóstico.
Vários estudos demonstram que a fase pré-analítica concentra cerca de 70% dos
erros e fontes de variação associados aos processos laboratoriais. Esta constatação de
PLEBANI e CARRARO (1997) recomenda que a gestão da qualidade para ser bem
sucedida deve priorizar a fase pré-analítica. No entanto, a realidade mostra outro
quadro. A fase pré-analítica é freqüentemente subestimada e poucos elementos da
gestão da qualidade são direcionados especificamente para esta etapa essencial na
obtenção de resultados confiáveis.
2
A integração da fase pré-analítica nos programas de qualidade é certamente
uma tarefa complexa devido às múltiplas variáveis envolvidas, em especial aquelas
que envolvem a atividade humana.
Neste trabalho, estudei várias fontes de erro na fase pré-analítica nos
laboratórios avaliados, procurando quantificar o efeito da estase venosa e outros
processos associados à flebotomia, bem como proponho novos elementos à gestão da
qualidade no monitoramento dos processos estudados.
3
2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo Geral
• Avaliar fontes de erro no processo de flebotomia com ênfase no efeito da
estase venosa.
2.2 Objetivos Específicos
• Identificar e quantificar as fontes de erro associadas à coleta de sangue;
• Comparar as fontes de erro pré-analíticas entre os laboratórios sob
administração pública e privada;
• Avaliar o desempenho do sistema de iluminação transdérmico
(Venoscópio IV
®
), como substituto do torniquete para facilitar a
identificação do sítio da punção venosa, e
• Quantificar o efeito da estase venosa em parâmetros bioquímicos pela
coleta de amostras em condições padronizadas em diferentes tempos de
aplicação do torniquete.
4
3. REVISÃO DA LITERATURA
Os componentes biológicos presentes nos fluídos orgânicos apresentam
flutuações constantes nos seus níveis de concentração decorrentes dos processos
fisiológicos normais. Estas variações afetam a interpretação dos analitos de uso
diagnóstico (WALMSLY e WHITE, 1994; GIRELLI et al., 2004).
A variação dos componentes biológicos é influenciada por diversos fatores,
sendo que entre eles podemos citar: o jejum, a postura e a resposta metabólica do
indivíduo aos fluxos hormonais, entre outros (WALLIN et al., 2008).
3.1 A fase pré-analítica
BROOKS (1998) classificou os principais fatores que influenciam na
magnitude da variação dos parâmetros biológicos em três grupos: as variáveis pré-
analíticas, analíticas e biológicas, as quais podem ser observadas na Figura 1.
FIGURA 1 – PRINCIPAIS FONTES DE VARIAÇÃO NOS ENSAIOS
LABORATORIAIS
Fontes de Variação
Pré-Analítica AnalíticaBiológica
Jejum
Postura
Aplicação do Torniquete
Anticoagulante
Homogeneização
Tempo de transporte
Centrifugação
Metrologia
Instrumento
Reagente
Interferentes
Calibração e
Manutenção dos
Equipamentos
Resposta
metabólica do
indivíduo aos
fluxos hormonais
Fontes de Variação
Pré-Analítica AnalíticaBiológica
Jejum
Postura
Aplicação do Torniquete
Anticoagulante
Homogeneização
Tempo de transporte
Centrifugação
Metrologia
Instrumento
Reagente
Interferentes
Calibração e
Manutenção dos
Equipamentos
Resposta
metabólica do
indivíduo aos
fluxos hormonais
Adaptado de BROOKS (1998) e FRASER (2001).
5
A fase pré-analítica é responsável por aproximadamente 70% do total de erros
cometidos pelos laboratórios que dispõem de sistema de qualidade bem estabelecido,
(PLEBANI e CARRARO, 1997; ERNST, 2005; SBPC/ML, 2005). LIPPI et al. (2006),
sugerem que 93% dos erros laboratoriais encontrados resultam da falta de
padronização na fase pré-analítica como a inobservância da adequada preparação do
paciente, coleta, manipulação e armazenamento da amostra. Padronizar a fase pré-
analítica reduz significativamente a variação nos resultados para a maioria dos analitos
(FRASER, 1988).
PLEBANI e CARRARO (1997) analisaram as principais não-conformidades
em um laboratório de emergência de grande porte com sistema da qualidade bem
estabelecido e observaram que os erros relacionados à fase pré-analítica foram
responsáveis por cerca de 70% do total dos problemas. Novo estudo, realizado cerca
de 10 anos depois, mostrou que as não-conformidades anteriormente observadas
persistiram embora com freqüências diferentes do estudo anterior, (CARRARO e
PLEBANI, 2007). Os resultados destes estudos estão sumarizados na Tabela 1.
6
TABELA 1. FREQÜÊNCIA DE ERROS NA FASE PRÉ-ANALÍTICA EM
LABORATÓRIOS DE EMERGÊNCIA
Freqüências
(%)
Não conformidades avaliadas
Pré-analíticas
1997 2007
Coleta da amostra inadequada 2,1 0,6
Perda da solicitação do médico 18,1 1,9
Interpretação incorreta da solicitação médica 3,2 3,8
Erro na identificação do paciente 2,6 8,8
Coleta em recipiente inadequado 2,6 8,1
Amostra com coleta em rota de infusão endovenosa 20,6 1,9
Erro na especificação da unidade hospitalar 19,0 ---
Tubo vazio --- 6,9
Ausência de entrada da solicitação médica no sistema de
informação laboratorial
--- 2,5
Incorreta proporção entre sangue e aditivos --- 13,1
Amostras sem refrigeração --- 1,9
Perda do tubo --- 3,1
Freqüência no monitoramento da digoxina inadequada --- 0,6
Solicitação de procedimento errado --- 7,5
Pedido mal interpretado --- 1,3
Total
68,2 62
Adaptado de PLEBANI e CARRARO (1997) e CARRARO e PLEBANI (2007).
É possível concluir destes trabalhos que a fase pré-analítica é a principal fonte
de erros nos ensaios laboratoriais e as não conformidades estudadas podem ser melhor
controladas com programas adequados de treinamento. No entanto, as fontes de erros
relacionadas diretamente à atuação de profissionais são difíceis de ser eliminadas.
Recentemente a automação da fase pré-analítica vem incorporando sistemas
robóticos agrupados em módulos específicos para realização da centrifugação,
aliquotagem, elaboração de soroteca e resgate de amostras (BOYD, 2002).
DEMERS et al. (2002) encontraram no sistema de automação “GENESIS
FE500
®
” uma forma para reduzir a fadiga dos operadores associada ao processamento
das amostras. Os autores sugerem que este sistema automatizado reduz a ocorrência de
erros laboratoriais relacionados à separação, identificação e preparo de alíquotas das
amostras.
7
A expectativa da minimização dos erros pré-analíticos associados a este tipo de
automação deverá ser uma realidade apenas para poucos laboratórios devido ao
elevado custo dos sistemas ora disponíveis (ALLER e FELDER, 2007; ALLER e
FERDER, 2008).
A influência das variáveis pré-analíticas pode ser minimizada, ao se estabelecer
uma orientação adequada aos pacientes em relação à necessidade de jejum prévio a
coleta da amostra, a supressão de exercícios físicos extenuantes no período que
antecede a coleta, e outras informações relativas ao hábito de fumar e ao período do
ciclo menstrual (YOUNG, 1997). Também é relevante obter informações sobre a
utilização de medicamentos e drogas terapêuticas (YOUNG, 2000).
3.2 Fatores associados à coleta da amostra que afetam os ensaios
laboratoriais
O treinamento adequado dos profissionais da área da saúde que realizam a
coleta de materiais biológicos de forma invasiva (sangue arterial, venoso e/ou capilar)
no que se refere a fatores que afetam os resultados laboratoriais como a postura do
paciente na hora da coleta, o tempo de aplicação do torniquete, o efeito da constrição
do músculo do antebraço antes da venipunção, a ordem correta dos tubos nas coletas
em sistema a vácuo e a adequada homogeneização destes, é crítica para a obtenção de
amostras de boa qualidade para a fase analítica (GUDER et al., 1996; FRASER, 2001).
A mudança do corpo em decubito, freqüentemente encontrada em pacientes
acamados no âmbito hospitalar, para a posição vertical promove uma alteração na
distribuição da água corporal. Esta água se move do compartimento intravascular para
o intersticial o que reduz o volume do plasma em cerca de 12%. Elementos celulares,
proteínas e outras macromoléculas, bem como vários elementos associados a estas que
não se difundem facilmente devido ao seu tamanho, sofrem uma aparente
concentração na diferença postural em tela (WALMSLEY e WHITE, 1994). A Figura
2 ilustra as variações observadas para diversos analitos pela mudança postural do
paciente de deitado para de pé, durante a coleta.
8
FIGURA 2 - VARIAÇÃO NA CONCENTRAÇÃO DOS ANALITOS APÓS A
MUDANÇA POSTURAL DE DEITADO PARA DE PÉ
As macromoléculas têm suas concentrações aumentadas entre 5 e
15% nas concentrações séricas pela mudança postural da posição
horizontal (deitado) para a vertical (em pé). Adaptado de GUDER
et al 1996.
3.2.1 Efeito do uso do torniquete sobre ensaios laboratoriais
O torniquete pode ser definido como um instrumento de compressão, usado
para obstruir temporariamente a circulação sanguínea de um membro, geralmente o
superior, por um determinado tempo através da aplicação de uma pressão local. Esta
pressão ao ser aplicada sobre a pele é transferida à parede dos vasos causando uma
oclusão transitória (LIPPI et al., 2006b). No caso do laboratório clínico, a oclusão
venosa pelo torniquete induz um aumento da pressão de filtração através das paredes
dos capilares. Líquidos e compostos de baixo peso molecular passam pelas paredes
dos capilares abaixo do local do torniquete, produzindo hemoconcentração. O aumento
na turgidez dos vasos sanguíneos pelo acúmulo de sangue facilita sua identificação e
punção subseqüente.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Colesterol
Proteínas
T4
Albumina
IgG
ALKP
AST
Cálcio
Porcentagem de aumento (%)
9
O torniquete, também designado de garrote, pode ser classificado em
pneumático e não pneumático (Figura 3). Os torniquetes ditos pneumáticos são
constituídos de um manguito conectado a um ducto, o qual permite inflá-lo com gás ou
ar comprimido já os não pneumáticos, são também conhecidos como não infláveis
(PECLER e HSU, 2001).
FIGURA 3 – EXEMPLOS DE TORNIQUETES
O torniquete pneumático requer ser inflado por uma bomba de pressão que pode ser
manual ou elétrica e permite aplicar uma pressão padronizada no local. O torniquete
não pneumático, o mais utilizado, é caracterizado por ser um material elástico,
podendo ser descartável e que adequadamente utilizado produz uma oclusão vascular.
No Brasil o torniquete mais utilizado na coleta do espécime diagnóstico é tipo
não pneumático, constituído de látex. Porém uma normativa internacional, a NCCLS
H3-A5, (2003), preconiza a utilização dos torniquetes pneumáticos pela facilidade de
padronização na pressão a ser aplicada e preferencialmente livre de látex na sua
composição.
Segundo LIPPI et al. (2006b) e a normativa NCCLS H3-A5 (2003) do CLSI, o
torniquete deve ser aplicado com uma distância de aproximadamente 7,5 cm acima do
sítio de punção e deveria ser apertado o suficiente para obstruir o fluxo venoso sem
afetar o fluxo arterial (aproximadamente 20-30 mmHg inferior a pressão sistólica).
Em condições fisiológicas as concentrações dos elementos que compõe o
sangue são homogêneas em toda a extensão do vaso. A obstrução do fluxo sangüíneo,
torniquete pneumático torniquete não pneumáticotorniquete pneumático torniquete não pneumático
10
gerada pela aplicação do torniquete, produz hemoconcentração pela estase venosa na
região do vaso afetada pela aplicação do torniquete. A estase venosa, também, gera um
aumento na pressão intravascular e a água e os compostos de baixo peso molecular se
movem do espaço intravascular para o intersticial. Constituintes do sangue de massa
molecular alta como proteínas e substâncias ligadas às proteínas aumentam suas
concentrações devido à impossibilidade de difusão para o interstício (GUDER et al
1996; LIPPI et al 2006b). A Figura 4 mostra uma representação esquemática dos
principais eventos associados à hemoconcentração associada ao uso do torniquete.
O uso prolongado do torniquete durante a coleta de exames laboratoriais para
quantificação das enzimas de origem muscular pode induzir ao diagnóstico equivocado
de polimiosite juvenil cuja terapia é a administração de corticóides em altas doses
(MÜHLEN et al. 2004).
Para que a aplicação do torniquete não interfira nas determinações quantitativas
de analitos, este deve ser retirado no momento em que à agulha é introduzida no
acesso venoso (ERNST e ERNST, 2002)
11
FIGURA 4 – REPRESENTAÇÃO ESQUEMÁTICA DO EFEITO DA ESTASE
VENOSA INDUZIDA PELA APLICAÇÃO DO TORNIQUETE EM
CONSTITUINTES DO SANGUE
Elementos celulares como leucócitos e eritrócitos, macromoléculas como
lipoproteínas, proteínas, compostos associados às proteínas, moléculas de baixo
peso molecular como glicose e eletrólitos, têm difusão do ambiente intracelular
para o interstício em homeostasia (Figura 4-A). A aplicação do torniquete obstrui o
fluxo sanguíneo criando um ambiente de estase venosa (Figura 4-B) que promove
hemoconcentração devido ao efluxo de água do vaso para o interstício. Elementos
de baixa massa molecular difundem-se com a água e reduzem suas concentrações
no vaso e compostos de alta massa molecular por não se difundirem apresentam-se
com maior concentração relativa.
Vários órgãos que promovem padronizações para o laboratório, como o CLSI
tem em sua normativa (NCCLS H3-A5, 2003), que o tempo de aplicação do torniquete
não deve ultrapassar o limite de 1 minuto, porque a hemoconcentração após este tempo
produz alterações significativas nos ensaios laboratoriais.
A Tabela 2 e a Figura 5 exemplificam o efeito do tempo prolongado do uso do
torniquete em ensaios laboratoriais.
A BA B
12
TABELA 2 - ALTERAÇÕES NA COMPOSIÇÃO DO SORO QUANDO A
OCLUSÃO VENOSA É PROLONGADA DE 1 MINUTO PARA 3
MINUTOS
Efeito Analitos % de variação
Aumento
Proteínas Totais 4,9
Colesterol total 5,1
Ferro 6,7
Bilirrubina 8,4
Aspartato aminotransferase 9,3
Redução
Potássio 6,2
Adaptado de STATLAND et al, 1979.
Este estudo realizado com número pequeno de participantes (11 indivíduos)
caracteriza o efeito do tempo de aplicação do torniquete num intervalo de tempo cerca
de 3 vezes superior ao recomendado, e evidencia o significativo efeito nos resultados
laboratoriais deste fator pré-analítico (STATLAND, 1979).
FIGURA 5 - VARIAÇÃO NA CONCENTRAÇÃO DE ANALITOS APÓS
ESTASE VENOSA PROLONGADA POR 6 MINUTOS
Analitos com elevada massa molecular como proteínas e enzimas,
moléculas associadas às proteínas como colesterol, triglicérides,
bilirrubinas e cálcio, apresentam alterações clinicamente
significativas (>5%) nas concentrações séricas quando o torniquete
é utilizado por um período prolongado de 6 minutos. Adaptado de
MILLER et al. (1992) e YOUNG (1993).
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Bilirrubina
CK
LD
Albumina
Proteínas
ALKP
Triglicérides
Cálcio
Porcentagem de aumento (%)
13
Um dos ensaios laboratoriais que pode ser expressivamente afetado por fatores
pré-analíticos é o potássio sérico. O tempo de aplicação do torniquete pode segundo
alguns estudos, reduzir a concentração de potássio (Tabela 2) ou aumentar sua
concentração sérica (NARAYANAN, 1996). Entre os elementos da fase pré-analítica
que afetam este ensaio estão: hemólise, liberação do potássio de plaquetas, demora na
separação do soro dos eritrócitos e exercícios no braço onde se realiza a punção após a
aplicação do torniquete. Este último fator é uma não-conformidade comum na sala de
coleta, quando o paciente é incorretamente orientado a “abrir e fechar a mão”, para
facilitar a localização do vaso a ser puncionado (TIETZ, 1995). A Figura 6 mostra o
efeito do torniquete sobre a determinação do potassemia, na presença da contração do
músculo de antebraço, procedimento de abrir e fechar a mão, (clench do músculo).
FIGURA 6 – EFEITO DO TORNIQUETE E CONTRAÇÃO DO MÚSCULO DO
ANTEBRAÇO (clench) NA POTASSEMIA
A aplicação do torniquete durante a coleta (quadrados abertos) aumenta a
concentração de potássio sérico quando comparado com a coleta sem
torniquete (círculos abertos). A contração do músculo do antebraço
(clench), associada ao torniquete, potencializa a elevação do potássio
sérico, evidenciando e efeito destes elementos da fase pré-analítica no
resultado da potassemia. Adaptado de KAPLAN e PESCE (1996).
Tempo em minutos
Potássio (mmol/L)
3,6
3,8
4,0
4,2
4,4
4,6
4,8
5,0
-1,5 -1,0 -0,5 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5
Clench
com
torniquete
sem
torniquete
torniquete
14
SMITH et al. (2004) alertam sobre os possíveis erros causados pela coleta,
processamento, manuseio e transporte de amostras para a determinação de potássio.
Este cátion exerce função crítica na hemostasia, e resultados incorretos podem afetar
significativamente a conduta clínica sobre o paciente.
É primordial instituir um programa de treinamento adequado aos profissionais
da área da saúde, mesmo, quando estes não pertencem à equipe de flebotomistas do
laboratório, mas que também realizam a coleta de sangue arterial, venoso e/ou capilar
para fins diagnóstico (BONINI et al., 2002). É necessário também que o treinamento
seja perene para os profissionais envolvidos na coleta de amostras para evitar erros e
fontes de variação na fase pré-analítica (YOUNG, 2003).
3.2.2 O sistema de iluminação transdérmica
Uma ferramenta para facilitar a coleta e eliminar os efeitos da aplicação do
torniquete é o sistema de iluminação transdérmica.
Neste equipamento, dois fachos luminosos de intensidade controlada,
atravessam a pele atingindo a camada mais profunda do tecido subcutâneo. Um vaso
sanguíneo que se encontra entre os fachos luminosos aparecerá como uma sombra
escura, delimitada pela intersecção do facho luminoso convergente. A imagem do
vaso, observada com a iluminação transdérmica permite identificar sua localização,
avaliar seu calibre e observar a presença de bifurcações. Este sistema também permite
identificar o extravasamento de líquido do vaso no sítio de terapia endovenosa
(KATSOGRIDAKIS et al, 2008).
A iluminação transdérmica foi proposta inicialmente para facilitar a venipunção
em crianças por KUHNS et al (1975).
A Figura 7 mostra esquematicamente o princípio do sistema de iluminação
transdérmica.
15
FIGURA 7 - PRINCÍPIO ESQUEMÁTICO DA ILUMINAÇÃO
TRANSDÉRMICA NA IDENTIFICAÇÃO DE VASOS
SANGÜÍNEOS
O iluminador transdérmico (Venoscópio IV, Duan do Brasil) emite dois feixes intensos de luz,
vermelho e branco, sendo a intensidade de emissão controlada por um tensiômetro. A luz
penetra no tecido subcutâneo e um vaso sangüíneo que se interponha entre os feixes de luz pode
ser identificado pelo contraste com o tecido que o contorna.
3.2.3 Efeito dos tubos de coleta a vácuo na variação pré-analítica
Os tubos de coleta a vácuo, de uso extensivo no laboratório, são considerados
um elemento importante na padronização e minimização de variação na fase pré-
analítica (BOWN et al, 2005).
A seqüência de utilização dos diferentes tipos de tubos de coleta em sistema a
vácuo é uma potencial fonte de erro, pois aditivos anticoagulantes e/ou pró-
coagulantes no interior do tubo podem contaminar a porção distal da agulha (agulha
interna do adaptador recoberta pela manga de borracha), podendo interferir nas
análises dos tubos subseqüentes (NCCLS H3-A5, 2003). Visando minimizar e/ou
16
eliminar esta interferência foi publicada uma normativa estabelecendo uma seqüência
recomendada para os tubos na coleta em sistema a vácuo, mostrado na Figura 8.
FIGURA 8 – SEQÜÊNCIA RECOMENDADA PARA TUBOS DE COLETA DE
SANGUE EM SISTEMAS A VÁCUO
A seqüência de tubos deve ser respeitada para evitar a possível contaminação
entre os diversos aditivos utilizados. A seqüência apresentada e a coloração
das tampas dos tubos são padronizadas pelos fabricantes destes produtos.
Adaptado das Recomendações da Sociedade Brasileira de Patologia
Clínica/Medicina Laboratorial para Coleta de Sangue Venoso, 2005, p 63.
Baseado no documento do NCCLS H3-A5, Vol. 23, nº 32, 8.1 (fotografia
reproduzida com autorização do autor).
A forma de homogeneização dos tubos também afeta a qualidade da amostra
(LIPPI et al, 2006c). A homogeneização deve ser por inversão (Figura 8) e suave para
evitar hemólise. Também o número de inversões deve ser adequado para garantir a
adequada mistura com os aditivos (Figura 9 e Tabela 6).
17
FIGURA 9 – HOMOGENEIZAÇÃO DE TUBOS A VÁCUO POR INVERSÃO
Padronização do processo de homogeneização por
inversão de amostras de sangue coletadas em
sistemas a vácuo. A figura representa a seqüência
que caracteriza uma inversão. Adaptado das
Recomendações da Sociedade Brasileira de
Patologia Clínica/Medicina Laboratorial para Coleta
de Sangue Venoso, 2005, p 30.
3.2.4 Gestão da qualidade
Os processos de auditoria no laboratório para detecção de erros e melhoria do
desempenho, bem como, a monitoração dos eventos adversos são algumas das
ferramentas que os laboratórios poderiam implementar para minimizar os riscos de
erro e estabelecer procedimentos de prevenção (GRAY, 2000). Estes procedimentos
devem ser usados também como ferramentas na detecção de erros causados por
problemas organizacionais fora do laboratório (BONINI et al., 2002).
A fase analítica historicamente recebeu atenção especial dos profissionais do
laboratório. Avanços significativos ocorreram especialmente nas últimas duas décadas,
com a popularização do uso de sistemas automatizados, a evolução tecnológica dos
reagentes, possibilitando uma expressiva redução nos coeficientes de variação
analíticos e aumentando a confiabilidade nos resultados (YOUNG, 2005).
Por outro lado, a fase pré-analítica, mesmo com o advento recente e pouco
difundido da automação, depende em grande parte da atuação de profissionais
= 1 inversão= 1 inversão
18
treinados e motivados para interagir diretamente com o paciente e com os demais
profissionais do laboratório. Julgo que o desafio em curso é conhecer melhor os erros
que afetam a fase pré-analítica, propor novos procedimentos para sua monitoração e
mecanismos perenes de correção. Este certamente é um o grande desafio do presente.
19
4. MATERIAIS E MÉTODOS
4.1 Aprovação do comitê de ética em pesquisa
O projeto inicialmente intitulado “Avaliação do Venoscópio IV® na coleta de
exames laboratoriais”, foi submetido à aprovação do comitê de ética em pesquisa do
Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia / Fundação Adib Jatene (CEP-IDPC/FAJ),
em 22 de junho de 2005, e obteve a aprovação sob o protocolo de número 3359, em 8
de julho de 2005.
Posteriormente, com a adição da ementa n° 01, que altera o título do projeto
para “O efeito da estase venosa em ensaios laboratoriais” e readequação dos objetivos,
este foi submetido ao CEP-IDPC/FAJ (Comitê de Ética e Pesquisa - Instituto Dante
Pazzanese de cardiologia / Fundação Adib Jatene), sendo aprovado em 4 de dezembro de
2006, com o protocolo de número 3359.
4.2 Estudos da fase pré-analítica: seleção dos laboratórios
Os laboratórios da cidade de São Paulo que participaram deste estudo foram
pré-selecionados através da lista de verificação mostrada na Tabela 3. Apenas
laboratórios de médio (cerca de 50.000 exames por mês) e grande porte (> 50.000
exames mês) foram avaliados.
Os elementos que compõe a lista de verificação (Tabela 3) e respectivos
critérios associados à qualidade foram obtidos nas normativas abaixo relacionadas:
• Portaria n° 13 do Centro de Vigilância Sanitária (CVS) do estado de São
Paulo, de 4 de novembro de 2005;
• Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) da Agência Nacional de
Vigilância Sanitária (ANVISA) n° 302 de 13 de outubro de 2005;
• NBR ISO 9001:2000;
20
• Normas do Programa de Acreditação para Laboratórios Clínicos (PALC)
versão 2004 da Sociedade Brasileira de Patologia Clínica (SBPC), e
• Normas do programa de acreditação do College of American
Pahtologists (CAP).
TABELA 3 – LISTA DE VERIFICAÇÃO EMPREGADA NA SELEÇÃO DOS
LABORATÓRIOS
Questões Respostas
1. O laboratório possui automação
analítica?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
2. O operador técnico da automação
analítica possui treinamento certificado
pelo fabricante e/ou distribuidor do
equipamento?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
3. O laboratório possui manual da
qualidade?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
4. O laboratório realiza controle interno
na amplitude normal e patológico
diariamente?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
5. O laboratório realiza controle externo
periodicamente?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
6. Com qual freqüência o controle
externo é realizado?
______ meses
7. O paciente fica sentado por mais de 5
minutos na sala de coleta antes da
coleta de sangue venoso periférico?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
8. Quanto tempo depois da coleta o
material é centrifugado?
_____ min.
depende do nº
de amostras ( )
21
4.2.1 Critérios de inclusão
Foi considerado critérios de inclusão dos laboratórios neste projeto de pesquisa,
aqueles que responderam afirmativamente as questões de 1 a 6 presentes na Tabela 3.
Os itens selecionados no critério de inclusão contemplam elementos essenciais do
sistema da qualidade, aceitos universalmente.
4.2.2 Critérios de exclusão
Foi definido como critério de exclusão dos laboratórios, instituições que depois
de selecionadas não permitissem o uso dos dados obtidos no projeto para futuras
publicações.
No total, trinta e sete laboratórios foram avaliados e a seleção foi encerrada
quando 10 laboratórios, sendo 5 de administração pública e 5 de administração
privada, cumpriram os critérios de inclusão.
4.3 Identificação e quantificação das fontes de erro associadas à coleta
de sangue com ênfase na flebotomia
Para identificar e quantificar as fontes de erro associadas à coleta de sangue
com ênfase na flebotomia foi utilizado os critérios recomendados e publicados nas
normativas do CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), abaixo
relacionadas:
• NCCLS H3-A5. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood
Specimens by Venipuncture. 5ed., 2003;
• NCCLS H18-A3. Procedures for the Handling and Processing of Blood
Specimens. 3ed., 2004;
• NCCLS H21-A4. Collection, Transport, and Processing of Blood
Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays. 4ed., 2003;
22
• NCCLS H1-A5. Tubes and Additives for Venous Blood Specimen
Collection. 5ed., 2003.
O desempenho de 3 flebotomistas, selecionados aleatoriamente, foi avaliado em
cada um dos 10 laboratórios previamente selecionados, perfazendo um total de 30
flebotomistas avaliados. A lista de verificação utilizada neste estudo esta na tabela 4.
TABELA 4 – LISTA DE VERIFICAÇÃO UTILIZADA PARA AVALIAR O
DESEMPENHO DOS FLEBOTOMISTAS
Flebotomista Avaliação
Paciente I ____segundos
Paciente II ____segundos
Paciente III ____segundos
Paciente IV ____segundos
1. Tempo aplicação do torniquete
Paciente V ____segundos
2. O flebotomista solicitou ao
paciente a constrição do músculo do
antebraço?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
3. O flebotomista friccionou o
antebraço do paciente, para
provocar a estase venosa?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
4. O flebotomista realizou a coleta
com a seqüência correta dos tubos?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
5. Qual a seqüência de tubos
utilizada pelo flebotomista?
( ) citrato de sódio
( ) fluoreto de sódio
( ) EDTA
( ) aditivo pró
coagulante e gel
separador
( ) o flebotomista
não tem uma
seqüência pré
estabelecida, os tubos
são inseridos no
sistema de coleta a
vácuo aleatoriamente.
6. O flebotomista realizou a
homogeneização dos tubos de
forma correta?
1 Sim ( ) 2 Não ( )
O usual para os laboratórios da cidade de São Paulo é apresentar no máximo, 5
flebotomistas por posto de coleta. Ao propor avaliar 3 flebotomistas dos 5 atuantes,
estudei cerca de 60% dos profissionais no serviço avaliado.
23
Para este estudo, cada flebotomista foi monitorado na coleta de 5 pacientes.
Objetivando a padronização e evitando “desvios” na análise, foram selecionados
somente, pacientes com as características abaixo descritas:
• Adultos (mais de 18 anos e menos de 65 anos) de ambos os sexos;
• Excluídos: gestantes, obesos, e pacientes submetidos à quimioterapia,
mastectomia, cateterismo ou provenientes de internação prolongada;
fatores que podem propiciar maior dificuldade na localização do sítio de
punção, e
• A requisição para exames contemplava a necessidade do uso de 3 tubos
de coleta, para avaliar este item no estudo.
Nos laboratórios que participaram deste estudo, as cinco coletas estudadas,
representam cerca de 10% das venipunções realizadas por cada flebotomista,
elementos que caracterizam nosso universo amostral.
Para a contagem do tempo de aplicação do torniquete foi utilizado um mesmo
cronômetro (calibrado e aferido por um instituto metrológico vinculado a Rede
Brasileira de Calibração) em todas as medidas, sendo considerado o tempo em
segundos, aquele decorrido entre a aplicação e remoção do torniquete (Tabela 4
item 1).
Durante a avaliação de conduta do flebotomista na orientação do cliente quanto
à constrição inadequada do músculo do antebraço (Tabela 4 item 2), foi monitorada a
solicitação de movimentos caracterizados pelo “abre-e-fecha da mão” utilizados para
facilitar a localização do vaso a ser puncionado. Também foram considerados como
“solicitantes”, os flebotomistas que não orientaram os pacientes que este procedimento
é inadequado, visto que alguns pacientes que adentravam a sala de coleta já vinham
realizando este movimento por vontade própria devido a orientações incorretas
anteriores.
Foi monitorado se o flebotomista friccionava o músculo do antebraço no
momento da anti-sepsia (Tabela 4, item 3), procedimento que facilita a localização do
vaso, mas não é recomendado por alterar as análises.
24
A coleta em sistema a vácuo, que requer diferentes tipos de tubos, deve ser
realizada com os tubos de coleta em ordem pré-determinada para evitar possíveis
contaminações dos diferentes aditivos nas análises. A Tabela 5 mostra a ordem correta
de utilização dos tubos com diferentes aditivos e as recomendações para o uso
(procedimento de homogeneização) conforme os fabricantes de tubos para coleta de
sangue em sistema a vácuo, que foram analisados neste estudo.
TABELA 5 – ORDEM SEQUENCIAL E HOMOGENEIZAÇÃO CORRETAS
PARA OS TUBOS DE COLETA COM SISTEMA A VÁCUO
Fabricantes/ homogeneização
Ordem
seqüencial
Descrição do
aditivo
Becton
Dickinson®
Greiner
Bio-One®
Sarstedt
S-Monovette®
1º
Sem aditivo não é
necessária
5 a 8 vezes 10 vezes
2º
Citrato de sódio 5 a 8 vezes 5 a 8 vezes 10 vezes
3º
Pró-coagulante e/ou
gel separador
5 a 8 vezes 5 a 8 vezes 10 vezes
4º
Heparina 8 a 10 vezes 5 a 8 vezes 10 vezes
5º
EDTA 8 a 10 vezes 5 a 8 vezes 10 vezes
6º
Inibidor glicolítico,
NaF
8 a 10 vezes 5 a 8 vezes 10 vezes
Ver também Figura 9, Introdução.
25
Foi monitorado se o flebotomista obedeceu a seqüência pré estabelecida dos
tubos de coleta no sistema a vácuo. A seqüência observada foi comparada com a
preconizada pelas recomendações da Sociedade Brasileira de Patologia Clínica
/Medicina Laboratorial para coleta de sangue venoso (2005), e com a norma do
NCCLS H3-A5 (2003).
4.4 Avaliação de desempenho do sistema de iluminação transdérmica
(Venoscópio IV®) na coleta de sangue
O sistema de iluminação transdérmica (Venoscópio IV
,
Duan Internacional do
Brasil), foi o equipamento utilizado neste projeto, sendo seguidas as recomendações
do fabricante para seu uso.
A empresa Duan Internacional do Brasil realizou o treinamento do flebotomista
que participou de todos os estudos envolvendo este equipamento.
Na avaliação de desempenho do sistema de iluminação transdérmica
(Venoscópio IV®) na coleta de sangue foram observados os seguintes aspectos:
• habilidade do flebotomista em manipular o equipamento após
treinamento;
• dificuldades encontradas pelo flebotomista;
• incidência de nova coleta do espécime diagnóstico coletado com o
sistema de iluminação trans-dérmica, e
• incidência de acesso arterial acidental utilizando o sistema de iluminação
trans-dérmica.
4.5 Avaliação do efeito da estase venosa em ensaios laboratoriais de
rotina
O efeito do tempo de estase venosa sobre resultados laboratoriais foi avaliado
através da coleta de sangue com uso do sistema de iluminação transdérmica
26
Venoscópio IV®, considerado sem estase, e após aplicação do torniquete durante
intervalos de tempo pré-estabelecidos variando entre 30 a 180 segundos em diferentes
grupos de pacientes.
4.5.1 Seleção dos pacientes voluntários e formação dos grupos
A seleção dos pacientes voluntários foi aleatória, na fila do ambulatório da
secção médica de laboratório clínico do Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia,
onde foi explicado o propósito da pesquisa e assinado o termo de consentimento livre e
esclarecido (Anexo I).
Os pacientes voluntários foram divididos aleatoriamente em 5 grupos (G30,
G60, G90, G120 e G180), constituídos por 50 pacientes cada. Os tempos de aplicação
do torniquete foram: 30, 60, 90, 120 e 180 segundos, respectivamente.
4.5.2 Padronização do procedimento de coleta das amostras de sangue venoso
Inicialmente os pacientes foram acomodados sentados, em poltrona de coleta
por 15 minutos. Após este tempo, foi realizada a assepsia do sítio de punção, com
álcool 70%. Cerca de 15 mL de sangue venoso foi coletado em sistema de coleta a
vácuo (BD Vacutainer
TM
, Becton Dickinson, Reino Unido), utilizando-se o sistema de
iluminação transdérmica no braço esquerdo do paciente, sem a presença do torniquete
e em seguida, o torniquete foi aplicado no braço direito do mesmo paciente. O tempo
de aplicação do torniquete foi de 30, 60, 90, 120 e 180 segundos e mensurado de modo
padronizado por uso de cronômetro, seguido da punção venosa, com a coleta de 15 mL
de sangue no mesmo sistema de coleta a vácuo.
Foi utilizado o tubo com aditivo pró-coagulante e gel separador (SST
TM
II,
Becton Dickinson, Reino Unido) e todos os tubos a vácuo e agulhas utilizados neste
trabalho pertenciam ao mesmo lote, ampliando a padronização do procedimento.
Após a coleta do sangue venoso, um curativo oclusivo foi colocado no sítio de
punção (Blood Stop
®
, AMP Soluções Terapêuticas Ltda, Brasil). O paciente foi
27
orientado acerca das eventuais intercorrências devidas à coleta de sangue,
procedimento padrão para esta atividade, sendo oferecidos desjejum e água aos que
desejassem.
4.5.3 Processamento e armazenamento das amostras.
Após a coleta os tubos foram deixados em repouso por um período entre 30 e
60 minutos e centrifugados a 2.000g por 15 minutos. O soro obtido foi aliquotado em
tubos de congelamento, cryotube, (Corning® 2mL com rosca interna e anel de
vedação), e congelado a -80°C. As amostras foram descongeladas uma única vez,
imediatamente antes das análises.
4.5.4 Otimização do procedimento analítico.
Os equipamentos automatizados utilizados nas análises foram validados através
do uso de controles de qualidade interno com concentrações dos analitos na amplitude
normal e patológica.
Os coeficientes de variação analítica (CVa) para os parâmetros estudados,
foram obtidos a partir de resultados de soros controles utilizados no controle da
qualidade interno, analisados em gráficos do tipo Levey-Jennings e respeitando as
regras propostas por Westgard (WESTGARD sítio na internet).
O sistema automatizado escolhido, VITROS 5.1 FS Chemistry System (Ortho-
Clinical Diagnostics – Johnson & Johnson Company, New Jersey, Estados Unidos)
apresentou coeficiente de variação analítico menor ou igual a 2,5%. Todas as
quantificações foram realizadas em duplicatas. Para os estudos sobre a estase venosa,
as amostras obtidas na presença de iluminação transdérmica e após a aplicação do
torniquete foram analisadas simultaneamente na mesma corrida para minimizar o
efeito da imprecisão analítica.
28
4.5.5 Determinação analítica dos ensaios laboratoriais de rotina em bioquímica
clínica avaliados
As quantificações dos analitos em estudo foram realizadas no sistema
automatizado VITROS 5.1 FS Chemistry System (Ortho-Clinical Diagnostics –
Johnson & Johnson Company, New Jersey, Estados Unidos), no laboratório clínico do
Hospital Israelita Albert Einstein na cidade de São Paulo, utilizando reagentes,
calibradores e protocolos preconizados pelo fabricante do equipamento..
As metodologias utilizadas para cada parâmetro laboratorial estão listadas na
Tabela 6.
TABELA 6: ANALITOS E METODOLOGIAS EMPREGADAS NO ESTUDO
Analitos Métodos
Albumina Verde de Bromocresol
Cálcio total Arsenazo III
Colesterol total Colesterol oxidase/peroxidase
Fosfatase alcalina p-nitrofenilfosfato cinético
Fósforo p-metilaminofenol
Glicose Glicose oxidase/peroxidase
Magnésio Formazana
Potássio Potenciometria direta
Proteínas totais biureto
Sódio Potenciometria direta
Triglicérides Lipase/GPO/Peroxidase
4.6 Análises estatísticas
Foram utilizadas estatísticas descritivas (média, desvio padrão, mediana,
amplitude de variação), análises de freqüência e o teste “t” pareado nas análises. Para
analitos que não apresentaram distribuição normal (triglicérides) foi utilizado o teste
de Mann-Whitney.
As comparações entre variáveis descontínuas foram realizadas com o teste
exato de Fisher bidirecional utilizando o programa RxC (Miller, 1994).
29
Estaticistas do laboratório de estatística e epidemiologia (LEE) do Instituto
Dante Pazzanese de Cardiologia colaboraram nas análises estatísticas. Foram
utilizados os programas computacionais estatísticos: Statistica for Windows versão 5.5
(StatSoft Inc., Tulsa, Estados Unidos) e Statistical Packed for Social Science (SPSS)
versão 13.0 (SPSS Inc., Chicago, Estados Unidos)
Para todas as análises, foi considerada uma probabilidade significativa um valor
menor que 5% (p < 0,05).
As diferenças no estudo do efeito da aplicação do torniquete comparado ao uso
do sistema de iluminação transdérmica foram calculadas com a equação abaixo:
% da diferença = {[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio (V)] – 100}
Os valores para avaliação da coleta com torniquete (T) e com o Venoscópio (V)
foram obtidos por análise quantitativa em duplicata dos analitos em estudo, visando
minimizar o impacto do coeficiente de variação analítica.
30
5. RESULTADOS
5.1 Seleção dos laboratórios
Para o processo de seleção dos 10 laboratórios estudados neste trabalho, foram
avaliados 37, sendo que 27 (72,97%) foram excluídos por não preencherem algum dos
quesitos entre os critérios de inclusão.
A tabela 7 descreve a freqüência dos elementos dos critérios de inclusão que
não foram atendidos pelos laboratórios excluídos da pesquisa.
TABELA 7. FREQÜÊNCIA DOS CRITÉRIOS DE EXCLUSÃO NO PROCESSO
DE SELEÇÃO DOS LABORATÓRIOS
Critérios de exclusão N Freqüência (%)
Não apresentar sistemas automatizados no
laboratório.
2 5,4
Não realizar controle interno na amplitude normal
e patológica pelo menos uma vez ao dia
11
29,7
O operador técnico (nível médio ou superior) não
possuía treinamento operacional certificado pelo
fabricante ou distribuidor do equipamento
20
54,1
Não possuir manual da qualidade. 27 72,9
Não participar de programas de controle de
qualidade externo ou ensaios de proficiência.
27
72,9
31
5.2 Desempenho dos flebotomistas
Os tempos de aplicação do torniquete de 30 flebotomistas foram medidos em
cinco coletas independentes. Os resultados estão apresentados nas Tabelas 8 e 9,
respectivamente, para laboratórios de administração pública e privada. A Figura 10
compara a média e o desvio padrão (DP) de todos os flebotomistas avaliados.
TABELA 8. DESEMPENHO DE 15 FLEBOTOMITAS DE LABORATÓRIOS
COM ADMINISTRAÇÃO PÚBLICA QUANTO AO TEMPO DE
APLICAÇÃO DO TORNIQUETE
Tempo de aplicação do torniquete em segundos
Lab.
Fleb.
1º
medida
2º
medida
3º
medida
4º
medida
5º
medida
Média ±
±±
±
DP
AV
1 160 70 80 95 60
93±39,6
60-160
2 100 80 85 55 45
73±22,5
45-100
1
3 90 75 95 105 60
85±17,7
60-105
4 110 115 105 120 90
108±11,5
90-115
5 105 110 125 95 65
110±22,4
65-125
2
6 90 115 130 125 95
111±17,8
90-130
7 125 130 115 125 105
120±10,0
105-130
8 95 105 125 115 110
110±11,2
95-125
3
9 130 85 95 80 70
92±23,1
70-130
10 135 130 115 120 110
122±10,4
110-135
11 125 110 120 105 115
115±7,9
105-125
4
12 110 105 115 110 120
112±5,7
105-120
13 75 55 85 95 90
80±15,8
55-90
14 85 70 75 65 95
78±12,0 65-95
5
15 85 70 105 55 60
75±20,3
55-105
Total
98,9±
±±
±17,3
45-160
32
TABELA 9. DESEMPELHO DE 15 FLEBOTOMITAS DE LABORATÓRIOS COM
ADMINISTRAÇÃO PRIVADA QUANTO AO TEMPO DE
APLICAÇÃO DO TORNIQUETE
Tempo de aplicação do torniquete em segundos
Lab.
Fleb.
1º
medida
2º
medida
3º
medida
4º
medida
5º
medida
Média
±
±±
±DP
AV
16 85 75 90 85 95
86±7,4
75-95
17 95 85 75 60 85
80±13,2
60-95
1
18 80 85 55 65 75
72±12,0
55-85
19 75 65 55 65 80
68±9,7
55-80
20 75 70 60 55 70
66±8,2
55-75
2
21 60 65 60 85 75
69±10,8
60-85
22 55 45 40 45 50
47±
±±
±5,7
40-55
23 65 60 70 55 60
62±5,7
55-70
3
24 75 65 70 80 85
75±7,9
65-85
25 55 45 60 45 50
51±
±±
±6,5
45-60
26 65 75 70 65 60
67±5,7
60-75
4
27 75 75 70 80 65
73±5,7
65-80
28 75 55 85 95 90
80±15,8
55-95
29 85 70 75 65 95
78±12,0
65-95
5
30 85 70 105 55 60
75±20,3
55-105
Total
69,9±
±±
±10,9
40-105
Em destaque (negrito sublinhado) os dois flebotomistas que realizaram todas as coletas dentro do
tempo recomendado máximo de 60 segundos.
33
FIGURA 10. COMPARAÇÃO DO DESEMPENHO DOS FLEBOTOMISTAS
QUANTO AO TEMPO DE APLICAÇÃO DO TORNIQUETE EM
LABORATÓRIOS PÚBLICOS E PRIVADOS.
A figura mostra o desempenho (média ± desvio padrão) dos 30
flebotomistas avaliados, com dados obtidos das Tabelas 9 e 10. Os símbolos
fechados caracterizam laboratórios de administração pública, enquanto os
abertos aqueles de administração privada. Símbolos iguais representam o
mesmo laboratório. A linha pontilhada em 60 segundos mostra o tempo
máximo permitido para a aplicação do torniquete.
O tempo médio de aplicação do torniquete foi diferente quando comparados os
serviços público e privado em estudo (Tabelas 8 e 9). Flebotomistas de instituições
privadas apresentaram tempo médio (69,9±10,6) significativamente menor (p<0,001)
que flebotomistas do serviço publico (98,9±17,3). Apenas dois flebotomistas,
pertencentes a duas instituições privadas distintas apresentaram em todas as coletas
analisadas (n=5) tempos de aplicação do torniquete dentro do esperado (< 60s).
60
Flebotomistas
Tempo de torniquete (s)
[Média +/-DP]
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
0
30
90
120
150
60
Laboratórios Públicos Laboratórios Privados
Tempo máximo permitido (60s)
60
Flebotomistas
Tempo de torniquete (s)
[Média +/-DP]
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
0
30
90
120
150
60
Laboratórios Públicos Laboratórios Privados
Tempo máximo permitido (60s)
34
5.3 Fontes de erro associadas à coleta de sangue nos laboratórios em estudo
A Tabela 10 descreve a freqüência dos erros observados durante a avaliação de
desempenho dos 30 flebotomistas por ocasião da coleta de sangue venoso periférico.
TABELA 10. FREQÜÊNCIA DOS ERROS OBSERVADOS DURANTE A
AVALIAÇÃO DE DESEMPENHO DOS 30 FLEBOTOMISTAS
DURANTE A COLETA DE SANGUE VENOSO PERIFÉRICO.
Flebotomistas
N = 30
Laboratório
Público
Laboratório
Privado
Descrição do erro N % N %
*
P
Incorreta homogeneização dos
tubos
15 100 10 66,7
0,042
Incorreta solicitação da
constrição do músculo do
antebraço
15 100 12 80 0,224
Erro na seqüência dos tubos de
coleta com diferentes aditivos
15 100 12 80
0,224
Erro ao friccionar o antebraço
durante a anti-sepsia
14 93,3 15 100 0,999
*
teste exato de Fisher
35
5.4 Avaliação de desempenho do sistema de iluminação transdérmica na coleta de
sangue
Os flebotomistas levaram aproximadamente uma semana para adaptarem-se ao
à manipulação adequada do sistema de iluminação transdérmica (Venoscópio IV) nas
coletas de sangue e este período foi considerado suficiente como tempo de treinamento
para este equipamento.
As principais dificuldades observadas na implantação do sistema de iluminação
transdérmica em relação aos flebotomista, durante o período de treinamento, foram
comparadas após uma semana de uso supervisionado do sistema (Tabela 11).
TABELA 11. DIFICULDADES ENFRENTADAS PELO FLEBOTOMISTA NA
UTILIZAÇÃO DO SISTEMA DE ILUMINAÇÃO
TRANSDÉRMICA (VENOSCÓPIO IV) ANTES E APÓS PERÍODO
DE TREINAMENTO (1 SEMANA) COM O EQUIPAMENTO.
Freqüência (%)
Dificuldades dos flebotomista
Pré-
Treinamento
Pós
Treinamento
Assepsia do sítio de punção com o iluminador
transdérmico fixado
90 0,5
Insucesso na punção em veias de maior
mobilidade (veias fugidias ou “bailarinas”)
80 60
Falta de habilidade para fixar o iluminador
transdérmico e manipular o sistema de coleta à
vácuo simultaneamente
80
2
Não identificar a imagem do vaso a ser
puncionado
*
58 3
Redução e/ou interrupção do fluxo de sangue
durante a coleta com sistema a vácuo.
25 25
Transfixação do vaso 20 5
*
ver Figura 7.
36
5.4.1 Incidência de nova coleta do espécime diagnóstico coletado com o sistema de
iluminação transdérmica
A Tabela 12 descreve a freqüência de não conformidades que condicionaram a
necessidade de nova coleta de sangue (recoleta) em 40 pacientes voluntários
submetidos à coleta com uso do sistema de iluminação transdérmica (Venoscópio IV).
TABELA 12. FREQÜÊNCIA DE NÃO CONFORMIDADES QUE GERARAM
NOVA COLETA COM A UTILIZAÇÃO DO SISTEMA DE
ILUMINAÇÃO TRANSDÉRMICA (VENOSCÓPIO IV)
Incidência de nova coleta Número total de coletas = 250*
Problemas observados
N (%)
Redução e/ou interrupção do fluxo de sangue em
sistema de coleta à vácuo.
25 10,0
Erro de punção em veias fugidias
6 2,4
Luminosidade inadequada para observar o vaso a
ser puncionado
4 1,6
Falta de habilidade para fixar o iluminador
transdérmico e manipular o sistema de coleta à
vácuo simultaneamente
3 1,2
Transfixação do acesso venoso periférico 2 0,8
*
Foram encontrados 10 pacientes (4% do total) com veias fugidias sendo que em 6
houve necessidade de nova coleta.
5.5 Estudo do efeito da estase venosa em ensaios laboratoriais
Os efeitos da estase venosa podem ser observados nas Tabelas 13 a 23 e nas
figuras 11 a 21.
37
TABELA 13– EFEITO DO TEMPO DE ESTASE VENOSA NA CONCENTRAÇÃO
DA GLICOSE SÉRICA
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mg/dL)
Diferença
média
p
Torniquete 104,32 ± 62,21
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio 104,26 ± 62,22
0,06
0,074
Torniquete 98,61 ± 22,49
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio 97,24 ± 21,99
1,37
0,011
Torniquete 87,37 ± 18,35
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio 86,11 ± 18,28
1,26
<0,001
Torniquete 104,72 ± 49,73
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio 102,77 ± 50,77
1,95 0,100
Torniquete ----
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio -----
---- ----
FIGURA 11. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T)
E VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE GLICOSE
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
0,0%
1,4%
1.5%
1,9%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100}, para cada grupo em estudo.
38
TABELA 14 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA
DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS SÉRICA
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(g/dL)
Diferença
média
p
Torniquete
8,49 ± 0,75
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
8,49 ± 0,75
0,00 0,15
Torniquete
7,24 ± 0,57
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio
7,03 ± 0,43
0,21
<0,001
Torniquete
7,94 ± 0,60
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio
7,60 ± 0,56
0,35
<0,001
Torniquete
7,74 ± 0,61
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
7,27 ± 0,49
0,46
<0,001
Torniquete
8,49 ± 0,75
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
7,71 ± 0,58
0,78
<0,001
FIGURA 12. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE PROTEÍNAS TOTAIS
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0
2
4
6
8
10
12
0,0%
3,0%
4,5%
6,5%
10,1%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100}, para cada grupo em estudo.
39
TABELA 15 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DE ALBUMINA SÉRICA
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(g/dL)
Diferença
média
p
Torniquete
5,16 ± 0,58
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
5,15 ± 0,58
0,00
0,149
Torniquete
4,16 ± 0,33
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio
4,07 ± 0,31
0,09
<0,001
Torniquete
4,78 ± 0,50
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio
4,55 ± 0,43
0,23
<0,001
Torniquete
4,48 ± 0,51
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
4,21 ± 0,42
0,27
<0,001
Torniquete
5,16 ± 0,58
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
4,65 ± 0,49
0,50
<0,001
FIGURA 13. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE ALBUMINA
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0
2
4
6
8
10
12
0,0%
2,2%
5,1%
6,4%
10,9%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
40
TABELA 16 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DE CÁLCIO TOTAL SÉRICO
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mg/dL)
Diferença
média
p
Torniquete
10,21 ± 0,57
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
10,21 ± 0,57
0,00 0,149
Torniquete
9,02 ± 0,35
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio
8,86 ± 0,34
0,16
<0,001
Torniquete
9,56 ± 0,50
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio
9,44 ± 0,51
0,12
<0,001
Torniquete
9,51 ± 0,77
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
9,26 ± 0,75
0,25
<0,001
Torniquete
10,21 ± 0,57
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
9,87 ± 0,46
0,35
<0,001
FIGURA 14 PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE CÁLCIO TOTAL
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0
1
2
3
4
0,0%
1,8%
1,3%
2,7%
3,4%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
41
TABELA 17 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DE COLESTEROL TOTAL SÉRICO
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mg/dL)
Diferença
média
p
Torniquete
214,38 ± 67,23
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
214,34 ± 67,26
0,04 0,149
Torniquete
----
G60
60 s
Venoscópio
----
--- ----
Torniquete
193,33 ± 34,33
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio
183,67 ± 32,45
9,67
<0,001
Torniquete
192,06 ± 48,88
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
178,19 ± 44,77
13,88
<0,001
Torniquete
214,38 ± 67,23
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
191,08 ± 60,99
23,30
<0,001
FIGURA 15. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE COLESTEROL TOTAL
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0
2
4
6
8
10
12
0,0%
5,3%
7,8%
12,2%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
42
TABELA 18 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DO TRIGLICÉRIDES SÉRICO
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mg/dL)
Diferença
média
p
Torniquete 146,70
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio 146,70
0,00 0,149
Torniquete
----
G60
60 s
Venoscópio
----
--- ----
Torniquete
149,14 ± 122,16
G90
(n=36)
90 s
Venoscópio
143,58 ± 121,32
5,56
<0,001
Torniquete
143,31 ± 83,51
G120
(n=32)
120 s
Venoscópio
136,88 ± 73,51
6,44 0,07
Torniquete
146,70 ± 94,44
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
135,22 ± 94,24
11,48
<0,001
FIGURA 16. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE TRIGLICÉRIDES
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0
2
4
6
8
10
0,0%
3,9%
4,7%
8,5%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
43
TABELA 19 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DE FÓSFORO SÉRICO
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mg/dL)
Diferença
média
p
Torniquete
3,83 ± 0,54
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
3,83 ± 0,53
0,00 0,149
Torniquete
----
G60
60 s
Venoscópio
----
--- ----
Torniquete
3,65 ± 0,55
G90
(n=36)
90 s
Venoscópio
3,64 ± 0,51
0,01 0,723
Torniquete
3,37 ± 0,65
G120
(n=32)
120 s
Venoscópio
3,40 ± 0,64
−0,03
0,169
Torniquete
3,83 ± 0,54
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
3,79 ± 0,51
0,04
0,007
FIGURA 17. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE FÓSFORO
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
-1.5
-1.0
-0.5
0.0
0.5
1.0
1.5
0,0%
0,3%
-0,9%
1,1%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
44
TABELA 20 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DE FOSFATASE ALCALINA SÉRICA
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(U/L)
Diferença
média
p
Torniquete
108,46 ± 32,75
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
108,42 ± 32,80
0,04 0,149
Torniquete
99,16 ± 110,54
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio
97,20 ± 107,53
1,96
<0,001
Torniquete
92,20 ± 22,75
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio
89,55 ± 22,45
2,65
<0,001
Torniquete
88,76 ± 32,79
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
84,32 ± 31,16
4,44
<0,001
Torniquete
108,46 ± 32,75
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
100,08 ± 30,97
8,38
<0,001
FIGURA 18. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
ATIVIDADE SÉRICA DE FOSFATASE ALCALINA
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0
2
4
6
8
10
0,0%
3,0%
5,3%
8,4%
2,0%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
45
TABELA 21 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DO POTÁSSIO SÉRICO
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mmol/L)
Diferença
média
p
Torniquete
4,25 ± 0,49
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
4,25 ± 0,49
0,00 0,149
Torniquete
4,57 ± 0,42
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio
4,33 ± 0,42
0,24
<0,001
Torniquete
4,28 ± 0,43
G90
(n=49)
90 s
Venoscópio
4,18 ± 0,41
0,09
<0,001
Torniquete
4,33 ± 0,45
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
4,19 ± 0,37
0,15
<0,001
Torniquete
4,25 ± 0,49
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
4,16 ± 0,45
0,09
<0,001
FIGURA 19. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE POTÁSSIO
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0
1
2
3
4
5
6
0,0%
2,4%
3,3%
2,2%
5,5%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
46
TABELA 22 – EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DO SÓDIO SÉRICO
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mmol/L)
Diferença
média
p
Torniquete
143,98 ± 3,01
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
143,94 ± 3,03
0,04 0,149
Torniquete
140,97 ± 4,03
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio
140,85 ± 3,81
0,12 0,593
Torniquete
142,68 ± 3,22
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio
142,22 ± 3,21
0,46
<0,001
Torniquete
141,15 ± 3,37
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
140,52 ± 3,11
0,63
<0,001
Torniquete
143,98 ± 3,01
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
142,98 ± 2,73
1,00
<0,001
FIGURA 20. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE SÓDIO
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
0,0%
0,3%
0,5%
0,7%
0,1%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
47
TABELA 23. EFEITO DO TEMPO DA ESTASE VENOSA NA DETERMINAÇÃO
DE MAGNÉSIO SÉRICO
Grupo
(n)
Tempo de
torniquete
(segundos)
Tratamentos
Média ± DP
(mg/dL)
Diferença
média
p
Torniquete
1,93 ± 0,21
G30
(n=50)
30 s
Venoscópio
1,93 ± 0,21
0,00 >0,05
Torniquete
1,91 ± 0,15
G60
(n=50)
60 s
Venoscópio
1,90 ± 0,16
0,02
0,011
Torniquete
2,01 ± 0,17
G90
(n=50)
90 s
Venoscópio
1,97 ± 0,18
0,04
<0,001
Torniquete
2,04 ± 0,16
G120
(n=50)
120 s
Venoscópio
2,01 ± 0,15
0,03
<0,002
Torniquete
1,98 ± 0,22
G180
(n=50)
180 s
Venoscópio
1,93 ± 0,21
0,05
<0,001
FIGURA 21. PORCENTAGEM DA DIFERENÇA ENTRE TORNIQUETE (T) E
VENOSCÓPIO (V) COM O TEMPO DE ESTASE VENOSA NA
CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE MAGNÉSIO
Tempo de garrote (segundos)
% da Diferença (T-V)
G30 G60 G90 G120 G180
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
0,0%
2,0%
1,5%
2,6%
0,5%
A Porcentagem da diferença foi calculada com a equação:
{[média com torniquete (T) X 100/média com venoscópio
(V)] – 100},para cada grupo em estudo.
48
A Tabela 24 sumariza os dados do efeito do tempo de torniquete em ensaios
laboratoriais.
TABELA 24 - SUMÁRIO DO EFEITO DO TEMPO DE APLICAÇÃO DO TORNIQUETE
NOS PARÂMETROS BIOQUÍMICOS ESTUDADOS
% Variação Torniquete – Venoscópio
Tabelas
Analitos
G30 G60 G90 G120 G180
14 Glicose 0,0 1,4 1,5 1,9 ---
15 Proteínas Totais 0,0 3,0 4,5 6,5 10,1
16 Albumina 0,0 2,2 5,1 6,4 10,9
18 Colesterol total 0,0 --- 5,3 7,8 12,2
18 Cálcio total 0,0 1,8 1,3 2,7 3,4
19 Triglicérides 0,0 --- 3,9 4,7 8,5
20 Fósforo 0,0 --- 0,3 -0,9 1,1
21 Fosfatase Alcalina 0,0 2,0 3,0 5,3 8,4
22 Potássio 0,0 5,5 2,4 3,3 2,2
23 Sódio 0,0 0,1 0,3 0,5 0,7
24 Magnésio 0,0 0,5 2,0 1,5 2,6
As linhas em destaque caracterizam analitos com massa molecular elevada (proteínas,
fosfatase alcalina), moléculas associadas a partículas de massa molecular elevada
(colesterol e triglicérides) e molécula pequena associada à proteína (cálcio total)
49
6. DISCUSSÃO
A fase pré-analítica compreende os procedimentos associados ao preparo do
paciente, coleta da amostra e seu transporte para a fase analítica do processo (LIPPI et
al, 2006c).
Múltiplos estudos apontam a fase pré-analítica como o sítio responsável por
cerca de 70% dos erros associados aos ensaios laboratoriais (LIPPI et al, 2006d).
Portanto, é esperado que todos os esforços na padronização e controle da fase pré-
analítica promovam uma significante melhoria no sistema da qualidade e por
conseqüência na confiabilidade dos resultados laboratoriais.
Neste estudo, avaliei o processo de flebotomia e o seu impacto como fonte de
variação sobre os resultados laboratoriais.
6.1 Seleção dos laboratórios
O desenho experimental deste projeto contemplou um total de dez laboratórios
(n=10), sendo cinco sob administração pública e o mesmo número sob administração
privada.
No processo de seleção dos laboratórios, foram avaliados ao todo 37 serviços,
todos com estrutura física semelhante e processamento de mais de 50.000 exames por
mês.
A Tabela 3 mostra os critérios utilizados no processo de seleção dos
laboratórios para este estudo. Embora o tamanho amostral restrito, destaca-se entre os
motivos de não inclusão, com mais de 70% de freqüência o fato dos laboratórios não
possuírem “manual da qualidade” ou “não participarem de programas de controle da
qualidade externo”. A falta do manual da qualidade, em freqüência tão expressiva de
laboratórios, foi uma observação surpreendente, face ao número de exames realizados
por estes laboratórios e sugere que muitas instituições não têm a prática de formalizar
seus procedimentos em manuais e ou comparar seus resultados com outros
50
laboratórios, procedimentos sabidamente essenciais para a gestão da qualidade
laboratorial.
Por outro lado, o elevado número de laboratórios que não participam de
programas de controle de qualidade externo é reconhecido pelas duas principais
sociedades provedoras destes programas no Brasil (Sociedade Brasileira de Análises
Clínicas com o Programa Nacional de Controle de Qualidade e a Sociedade Brasileira
de Patologia Clínica /Medicina Laboratorial com o programa Proficiência em Ensaios
Laboratoriais fornecido pela ControlLab). Embora sem uma análise mais aprofundada,
é estimado que os programas de controle da qualidade externo são realizados por
apenas um terço dos laboratórios nacionais, (PNCQ e ControlLab, 2007). Esta
constatação é confirmada pelos dados deste estudo e certamente recomendam uma
ação mais enérgica dos órgãos gestores de saúde pública a fim de orientar e cobrar que
estes elementos primordiais da qualidade estejam em todos os laboratórios. Não se
pode conceber um laboratório com premissas de qualidade sem um manual da
qualidade ou sem participar de um programa de controle externo da qualidade.
6.2 Desempenho dos flebotomistas
O tempo de aplicação do torniquete, também conhecido como garrote, pode
afetar significativamente o resultado de múltiplos analitos, (WALLIN et al, 2008). A
estase venosa gerada no processo de aplicação do torniquete conduz a
hemoconcentração (LIMA-OLIVEIRA et al, 2007a; LIMA-OLIVEIRA et al, 2007b).
O tempo máximo de 60 segundos para aplicação do torniquete, procedimento
que facilita a localização do vaso a ser puncionada, está bem estabelecido na literatura
(NCCLS H3-A5, 2003). Embora esta informação seja de conhecimento dos
profissionais atuantes nos laboratórios avaliados e fazer parte do processo de
treinamento dos flebotomistas, não foram evidenciados nos laboratórios avaliados
neste trabalho, procedimentos para monitorar o tempo de aplicação do torniquete.
As avaliações dos tempos de aplicação do torniquete deste estudo encontram-se
nas Tabelas 8 e 9 e os resultados globais estão sumarizados na Figura 10.
51
O tempo médio de aplicação do torniquete entre os flebotomistas dos
laboratórios sob administração privada (69,9±10,6 s) e pública (98,9±17,3s) foi
significativamente diferente (p<0,001).
Outra comparação relevante é observar que os flebotomistas avaliados no
sistema público, a exceção de um laboratório (Tabela 8, Lab 5: flebotomistas 13,14 e
15), todos ultrapassaram em alguma coleta o tempo de 120 segundos, o dobro do
tempo máximo permitido. Este fato não foi observado nos laboratórios de
gerenciamento privado (Tabela 9).
Apenas dois flebotomistas, pertencentes a laboratórios privados distintos, foram
capazes de consistentemente manter o tempo de torniquete dentro do esperado (<60s)
em todas as coletas (Figura 10, flebotomistas 22 e 25).
É possível sugerir que a não conformidade associada ao tempo de aplicação do
garrote é um elemento comum aos laboratórios analisados. Também é pertinente supor
que este problema possa ter uma amplitude maior na prática diária dos laboratórios
estudados do que a dimensionada neste estudo, face a terem sido excluídos do estudo
pacientes com características de veias de difícil punção, como obesos, crianças e
idosos.
Uma investigação específica sobre o tempo de aplicação do torniquete e demais
elementos associados à coleta em pacientes que apresentem potenciais dificuldades na
venipunção fica sugerido para novos e relevantes estudos.
Embora o universo amostral seja reduzido, é possível concluir que os
laboratórios de administração privada produziram treinamentos mais efetivos quanto
ao tempo de aplicação do torniquete em comparação com os laboratórios públicos
estudados, sem, no entanto atingir completamente a meta que recomenda o tempo
máximo de aplicação do torniquete inferior a 60 segundos.
52
6.3 Fontes de erros associadas à coleta de sangue nos laboratórios em
estudo
Embora todos os laboratórios selecionados apresentassem manual da qualidade,
descrevendo procedimentos apropriados para a coleta de sangue, a freqüência de erros
associados a este procedimento foi muito elevada (66 a 100%) nos laboratórios
estudados (Tabela 10). Apenas o item homogeneização dos tubos foi
significativamente menor (p=0,042) nos laboratórios privados quando comparados aos
públicos.
Os dados permitem concluir que os programas de gestão da qualidade nos
laboratórios em estudo não estão transferindo aos flebotomistas com a ênfase
necessária a relevância dos itens avaliados na Tabela 10.
Também pode ser sugerida pela análise conjunta dos resultados nos itens
anteriores, que se faz necessário a introdução de indicadores nos sistemas de gestão da
qualidade, para avaliar os itens deste estudo. É senso comum, que procedimentos e
treinamentos que não tem atrelados mecanismos apropriados de verificação de
desempenho, como os observados com os tópicos anteriormente discutidos, são mais
susceptíveis a falhas no processo.
6.4 Avaliação de desempenho do sistema de iluminação transdérmica na
coleta de sangue
Após a constatação das dificuldades associadas ao apropriado controle do
tempo de aplicação do torniquete, procurei estudar procedimentos que minimizassem
ou eliminassem esta fonte de erro.
A iluminação transdérmica tem sido utilizada, embora em pequena escala, no
ambiente hospitalar primariamente na identificação de extravasamento de líquido
parenteral a infusão endovenosa (KATSOGRIDAKIS et al, 2008). O procedimento de
iluminação transdérmica também facilita a identificação do vaso a ser puncionado e
53
suprime o uso do torniquete (LIMA-OLIVEIRA et al, 2007a; LIMA-OLIVEIRA et al,
2007b).
Como esta tecnologia é pouco difundida nos laboratórios e conseqüentemente
entre os flebotomistas, foram realizados treinamentos para adaptação destes
profissionais a esta tecnologia. As dificuldades observadas na implantação deste
procedimento estão descritas na Tabela 11.
É possível concluir que as dificuldades iniciais de adaptação ao equipamento
como assepsia no sítio de punção, fixação do transiluminador, identificação do vaso a
ser puncionado e transfixação do vaso puncionado puderam ser solucionadas com
cerca de uma semana de treinamento. Os dois principais problemas que persistiram
após o treinamento são: dificuldades na punção de veias fugidias (60%) e a interrupção
no fluxo de sangue (25%), elementos comuns associados à venipunção independente
do uso do sistema de iluminação transdérmica.
Também foi possível observar que o sistema de iluminação transdérmica
utilizado neste estudo – Venoscópio IV
®
- não introduziu no processo de coleta de
sangue em sistema a vácuo novos elementos de dificuldade (Tabela 12).
Embora subjetivo, o sistema de iluminação transdérmica, foi considerado uma
ferramenta útil nas coletas de pacientes que não apresentaram identificação visual ou
táctil do vaso a ser puncionado. Este procedimento reduziu o número de “punções em
branco” caracterizadas como após a introdução da agulha o insucesso na obtenção do
fluxo de sangue.
6.5 Estudo do efeito da estase venosa em ensaios laboratoriais
Após o reconhecimento que a coleta na presença do sistema de iluminação
transdérmica é factível para a rotina do laboratório e mostra-se vantajosa em algumas
circunstâncias passamos a utilizar este sistema para avaliar o efeito da estase venosa,
resultante do tempo de aplicação do torniquete, no resultado de ensaios laboratoriais.
Considerando que a coleta realizada com a iluminação transdérmica dispensa o uso do
torniquete, as amostras obtidas com este sistema foram consideradas livres do efeito da
54
estase venosa e representando o valor dos analitos sem esta interferência. Ensaios
laboratoriais com coletas em diferentes tempos (30, 60, 90, 120 e 180 segundos) de
aplicação do torniquete cuidadosamente controlados, foram comparados com amostras
obtidas sem estase venosa utilizando o sistema de iluminação transdérmica
Venoscópio IV
®
.
6.5.1 Glicose
As concentrações de glicose sérica mostram ser pouco afetadas pelo tempo de
aplicação do torniquete de até 120 segundos (< 2% de aumento). Os experimentos para
180 segundos não puderam ser analisados por problemas técnicos com as amostras
(Tabela 13 e Figura 11).
Não foram observados estudos similares na literatura para comparação com
nossos resultados. Sendo a molécula de glicose pequena, difusível e não ligada às
proteínas, é possível supor que o processo de hemoconcentração estabelecido pela
aplicação do torniquete promova um equilíbrio rápido e homogêneo da glucose na fase
aquosa do plasma, de modo que sua concentração não seja expressivamente afetada.
Em tese, esta mesma hipótese poderia ser aplicada para moléculas como uréia e
creatinina.
6.5.2 Proteínas Totais e Albumina
O efeito da estase venosa sobre as determinações de proteínas totais e albumina
observada nas Tabelas 14 e 15, seguem o modelo esperado de comportamento para
moléculas de massa molecular grande e pouco difusível. Após 60 segundos da
aplicação do torniquete as concentrações aumentaram significativamente (p<0,001)
quando comparadas com amostras obtidas com o sistema de iluminação transdérmica.
Como o processo de hemoconcentração era esperado o aumento destes analitos e este
estudo comprovou que um tempo de aplicação do torniquete igual ou superior a 90
55
segundos aumenta a concentração destes analitos com alterações de significância
clínica (cerca de 5%).
Para a determinação de proteínas totais (Figura 12) a concentração aumenta de
forma linear com o tempo de aplicação do torniquete com incrementos de no mínimo
1,5 pontos percentuais a cada 30 segundos após o primeiro minuto.
A concentração de albumina sérica (Figura 13) segue padrão similar ao das
proteínas totais, o que era esperado, uma vez que a concentração desta molécula
representa mais de 50% das proteínas totais.
Estas análises permitem sugerir que a quantificação de outras moléculas
protéicas, como por exemplo, transferrina, imunoglobulinas, lipoproteínas, proteína C
reativa, entre outras, que apresentem massa molecular similar ou maior que a albumina
(cerca de 65000 Da) possam ser afetadas pela hemoconcentração provocada pelo uso
do torniquete, com magnitude e padrão próximos aos observados neste estudo.
O padrão de alteração das proteínas observado neste estudo foi expressivamente
superior ao descrito na literatura, que aponta para um aumento nas proteínas em cerca
de 6,8% após 6 minutos de torniquete, Figura 5, (MILLER et al, 1992; YOUNG,
1993).
6.5.3 Cálcio total
As concentrações de cálcio total foram significativamente (p<0,001) maiores
com a aplicação do torniquete após 60 segundos quando comparado à coleta com
iluminação transdérmica (Tabela 16), mas mesmo após 180 segundos de torniquete a
diferença (3,4%) não foi clinicamente significativa se considerado o limite de 5%
(Figura 14).
Nossos dados estão em consonância com outro estudo que aponta uma alteração
para o cálcio total em cerca de 4% após 6 minutos de tempo de aplicação do torniquete
(MILLER et al, 1992; YOUNG, 1993).
O efeito do tempo de aplicação do torniquete sobre as determinações de cálcio
total sérico mostrou-se diferente do que previamente supúnhamos. Nossa premissa era
56
que o padrão de interferência neste ensaio seria similar ao observado para a
determinação de albumina, uma vez que mais de 50% do cálcio está ligado a esta
molécula (TIETZ, 1995).
A análise do padrão de interferência pela hemoconcentração do cálcio total e de
proteínas sugere que outros fatores da reologia do sangue devem contribuir para que as
concentrações de cálcio total não sigam o mesmo padrão das proteínas séricas.
Postulamos que entre estes fatores, a acidose que se estabelece decorrente da
hemoconcentração pela elevação na concentração de pCO
2
possa deslocar o cálcio de
sua ligação com as proteínas, predominantemente com a albumina, e este por sua vez
se difunda rapidamente para o espaço intersticial, conseqüentemente não apresentando
uma elevação proporcional a albumina. Sugerimos que em experimentos futuros o
cálcio ionizado seja avaliado em conjunto com o cálcio total, o que poderia oferecer
maiores subsídios para a pertinência da hipótese apresentada.
6.5.4 Colesterol total e Triglicérides
Os lípides, como moléculas insolúveis em água, são transportados no sangue
em macromoléculas designadas lipoproteínas (RIFAI et al, 1999). O padrão de
interferência pela aplicação do torniquete segue o modelo esperado para moléculas
grandes não difusíveis como observado nas proteínas. Neste estudo o tempo de 60
segundos não foi avaliado por problemas técnicos com a amostra neste ensaio.
As concentrações de colesterol total sérico foram significativamente diferentes
(p<0,001) após 90 segundos de aplicação do torniquete (Tabela 17) e as diferenças
representam significância clínica (>5,3%) após este tempo, atingindo valores
superiores a 12% aos 180 segundos (Figura 15).
Os triglicérides mostraram um padrão de interferência pela hemoconcentração
(Tabela 18) menos acentuado quando comparado ao colesterol total. Com aplicação do
torniquete até 120 segundos os valores dos triglicérides não diferiram de 5% em
relação à coleta sem aplicação do torniquete (Figura 16). Como os triglicérides são
transportados no plasma primariamente pelas lipoproteínas VLDL (lipoproteína de
57
densidade muito baixa) ou quilomicrons, partículas substancialmente maiores que a
lipoproteína LDL (lipoproteína de densidade baixa), forma primária de transporte do
colesterol, era esperado para estes analitos um perfil de interferência semelhante.
Na tentativa de explicar as diferenças observadas entre os padrões de
interferência para o colesterol e os triglicérides, podemos elencar o efeito do glicerol
livre sobre a determinação dos triglicérides. Na metodologia empregada para a
quantificação dos triglicérides, não foi realizado o blank de glicerol, que remove a
interferência do glicerol livre, cerca de 5% a 10%, na população normal.
O glicerol é difusível e seu efluxo do vaso pela hemoconcentração teria
minimizado as diferenças entre o torniquete e o Venoscópio. Proponho para esclarecer
esta hipótese futuros experimento com comparações dos triglicérides realizadas com
métodos que considerem um blank de glicerol livre.
Para a determinação de colesterol total, este estudo substancia a necessidade do
rigor na fase pré-analítica, justificando a aplicação do torniquete em tempo máximo de
60 segundos, caso contrário, alterações significativas serão observadas nos resultados.
6.5.5 Fósforo sérico
A determinação de fosfatemia não foi afetada significativamente (p>0,10)
mesmo após 120 segundos pelo uso do torniquete (Tabela 19). Diferenças
significativas foram observadas somente após a aplicação do torniquete por 180
segundos (p=0,007), mesmo assim clinicamente irrelevantes (1,1%) como observado
na Figura 17. Meus dados sugerem que o fosfato sérico rapidamente se equilibra após
iniciado processo de hemoconcentração.
6.5.6 Fosfatase alcalina
O perfil de interferência da hemoconcentração produzida pela aplicação do
torniquete sobre a atividade da fosfatase alcalina sérica (Tabela 20), segue o padrão
observado para proteínas, anteriormente discutido, mostrando diferenças significativas
58
(p<0,001) em todos os tempos após 30 segundos. O efeito da estase venosa se torna
clinicamente significativamente após 120 segundos, com incremento na atividade em
5,3% (Figura 18).
6.5.7 Potássio sérico
O efeito da hemoconcentração produzida pelo torniquete sobre a potassemia é
notadamente peculiar (Tabela 21). Após 30 segundos de aplicação do torniquete, a
concentração de potássio aumenta significativamente (p<0,001). A diferença máxima
observada encontra-se no tempo de 60 segundos de aplicação do torniquete (5,5%) que
paradoxalmente diminui com o prolongamento deste tempo para valores inferiores a
3% (Figura 19).
O potássio é o cátion principal do meio intracelular apresentando neste
ambiente uma concentração de cerca de 35 vezes maior que no soro (WALMSLEY e
WHITE, 1994). Proponho que após a aplicação do torniquete, uma acidose no sítio de
punção pode se desenvolver pelo aumento de pCO
2
e incremento do ácido láctico
decorrente da glicólise anaeróbica, promovendo o efluxo de potássio do interior celular
como elemento de carga positiva de troca com o próton (H
+
) que é internalizado na
célula para tamponamento (NARAYANAN, 1996). Uma vez liberado, este potássio
rapidamente se equilibra no meio, o que justificaria rápida redução após uma liberação
acentuada.
O efeito da aplicação do torniquete sobre a concentração de potássio e a sua
rápida mobilidade do meio intracelular para o extracelular são elementos conhecidos e
podem ser observados na Figura 6 da Introdução. Meu estudo ratifica estes achados e
quantifica o efeito do tempo de aplicação do torniquete sobre este ensaio.
É importante notar que o tempo máximo recomendado para a aplicação do
torniquete (60 segundos) promove o maior efeito na concentração de potássio sérico,
sendo que com base neste estudo, os tempos de aplicação do torniquete recomendados
para este analito deveriam ser de no máximo 30 segundos ou preferencialmente a
coleta ser realizada sem este artifício.
59
6.5.8 Sódio e Magnésio
As concentrações séricas de sódio e magnésio são significativamente (p<0,001)
afetadas pela aplicação do torniquete principalmente após os 90 segundos (Tabelas 22
e 23).
O incremento máximo produzido na concentração de sódio é, no entanto, não
significativo em termos clínicos (máximo de 0,7%), o que era esperado para um
analito que rapidamente se equilibra após iniciado o processo de hemoconcentração
(Figura 20).
O efeito da aplicação do torniquete sobre a concentração de magnésio é similar
à observada com o sódio, com incremento máximo (2,6%) não significativo
clinicamente após 180 segundos de aplicação do torniquete.
Como observação relevante, proponho que o sódio sérico seja utilizado em
experimentos futuros envolvendo estudos do efeito da hemoconcentração como um
controle negativo, por este ser pouco afetado por este processo.
Na análise comparativa entre os analitos estudados, que cobrem um espectro
importante de moléculas do plasma quanto ao tamanho e difusibilidade, o efeito da
hemoconcentração devido à aplicação do torniquete esta sumarizada na Tabela 24.
Concluímos que tempos de aplicação do torniquete iguais ou inferiores a 30
segundos não promovem alterações significativas nos analitos estudados. O tempo
preconizado máximo para o uso do torniquete de 60 segundos permite alterações
significativas na concentração dos analitos sem, no entanto, afetar a interpretação
clínica destes ensaios, exceto para a determinação de potássio.
Este estudo também reforça a importância dos procedimentos que envolvem a
flebotomia na composição da qualidade do resultado final. Variações significativas nas
concentrações de proteínas e lípides, mesmo após 90 segundos da aplicação do
torniquete recomendam melhor controle desta etapa, em particular pela possibilidade
que estas fontes de variações sejam aditivas a outras fontes de erros envolvidas nos
processos laboratoriais.
60
7 CONCLUSÕES
• O tempo de aplicação do torniquete empregado pelos flebotomistas de
laboratórios sob gestão publica e privada avaliados neste estudo
ultrapassa o recomendado para este procedimento;
• O sistema de iluminação transdérmica utilizado permitiu eliminar o
efeito da estase venosa nos analitos estudados;
• O equipamento Venoscópio IV se mostrou eficiente na identificação do
vaso a ser puncionado e poderá ser utilizado em novos estudos
experimentais para monitorar a interferência associada à
hemoconcentração decorrente da aplicação do torniquete;
• Para os analitos estudados, aqueles de massa molecular elevada
(proteínas) ou associados a estes, resultados clinicamente significativos
(variações maiores que 5%) foram observadas após 90 segundos da
aplicação do torniquete;
• A determinação de potássio apresentou variações significativas (cerca de
5%) dentro do tempo máximo preconizado para a aplicação do torniquete
“60 segundos”;
• O tempo máximo de aplicação do torniquete recomendado por este
estudo, por não afetar nenhuma das determinações, é de 30 segundos;
• Os laboratórios devem desenvolver programas perenes e específicos de
verificação dos procedimentos associados à flebotomia para promover
melhorias na gestão da qualidade na fase pré-analítica.
61
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