( PDF ) Biscoito de polvilho suplementado com amido resistente : um novo alimento funcional

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CCA- CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS

DCTA-

DEPARTAMENTO DE CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS

PROGRAMA DE MESTRADO E DOUTORADO EM CIÊNCIA DE ALIMENTOS

NORMA LÚCIA DE MIRANDA PIMENTEL

BISCOITO DE POLVILHO SUPLEMENTADO

COM AMIDO RESISTENTE:

UM NOVO ALIMENTO FUNCIONAL

Londrina

2007

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NORMA LÚCIA DE MIRANDA PIMENTEL

BISCOITO DE POLVILHO SUPLEMENTADO

COM AMIDO RESISTENTE:

UM NOVO ALIMENTO FUNCIONAL

Dissertação apresentada ao Programa de Mestrado e

Doutorado em Ciência de Alimentos da

Universidade Estadual de Londrina, como requisito

para obtenção do título de Mestre em Ciência de

Alimentos.

Orientadora: Profa. Dra. Maria Victória Eiras

Grossmann.

Londrina

2007

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NORMA LÚCIA DE MIRANDA PIMENTEL

BISCOITO DE POLVILHO SUPLEMENTADO

COM AMIDO RESISTENTE:

UM NOVO ALIMENTO FUNCIONAL

Dissertação apresentada ao Programa de Mestrado e

Doutorado em Ciência de Alimentos da

Universidade Estadual de Londrina, como requisito

para obtenção do título de Mestre em Ciência de

Alimentos.

COMISSÃO EXAMINADORA

Profa. Dra. Maria Victória Eiras Grossmann

Universidade Estadual de Londrina

Profa. Dra. Laura Beatriz Karam

Pontifícia Universidade Católica do Paraná

Profa. Dra. Marta de Toledo Benassi

Universidade Estadual de Londrina

Londrina, 16 de agosto de 2007.

Aos meus amados pais Carlos e Norma

pelo exemplo de vida, amor incondicional,

incentivo e paciência..

Ao meu avô Cícero pelo exemplo de vida e a

saudade deixada após a sua partida.

AGRADECIMENTO ESPECIAL

A Profa. Maria Victória por ser essa profissional de extrema competência

que passa os seus conhecimentos com tamanha facilidade que até nos faz pensar que a tarefa

de um mestre é simples. E à pessoa Victória que nos “abraça” como uma mãe nos momentos

de dificuldade, quando passamos pelos percalços da vida, dando uma palavra amiga, uma

palavra de incentivo e nunca nos deixando desanimar.

Victória, só tenho a agradecer e dizer que se tivesse que começar tudo de

novo escolheria você novamente como minha orientadora, pois você é uma mulher que me

servirá de exemplo por toda a vida.

AGRADECIMENTOS

Às professoras Adelaide Del Pino Beléia e Marta de Toledo Benassi pela correção e valiosas

sugestões feitas ao trabalho.

Aos professores do Departamento de Ciência e Tecnologia de Alimentos – DCTA da

Universidade Estadual de Londrina, pela atenção e conhecimentos transmitidos.

Às professoras Marney Cereda e Débora de Queiroz Tavares pelos materiais concedidos.

Às técnicas do laboratório, Berenice, Elza e Marli, pelo grande auxílio em todos os momentos

solicitados.

Às empresas Tup Guar (Walter), National Starch (Karla) e Maeda, pela doação de matérias-

primas.

Ao CNPq pela concessão da bolsa de estudos.

Ao amigo Nelson pelo carinho e amizade.

À minha irmã Flávia pelo amor e cumplicidade.

Às queridas amigas Michele Rosset (Mimi) e Cícera Gonçalves (Cirça), pelo apoio, incentivo,

compreensão, paciência e amizade inestimável.

A todos os amigos, pela amizade e os bons momentos compartilhados.

E a todos que não foram citados, mas que colaboraram de alguma forma para que esse

trabalho pudesse ter sido concluído.

Em especial a Deus, sem o qual nada seria possível....

“A mente que se abre a uma nova idéia

jamais voltará ao seu tamanho original.”

Albert Einstein

PIMENTEL, Norma L. M. Biscoito de Polvilho Suplementado com Amido Resistente: Um

Novo Alimento Funcional. 2007. Dissertação (Mestrado em Ciência de Alimentos) –

Universidade Estadual de Londrina, 71p.

RESUMO

É cada vez maior a procura, pelos consumidores, por alimentos que, além de nutrir, lhes

proporcionem qualidade de vida, bem-estar e diminuição dos riscos de doenças. Os alimentos

funcionais incluem-se nessa categoria específica de alimentos, pois, quando ingeridos em

quantidade e periodicidade adequadas, são capazes de produzir efeitos benéficos à saúde. O

amido resistente (AR) tem sido extensivamente pesquisado por apresentar efeitos benéficos

similares aos das fibras. Os biscoitos de polvilho, caracterizados por grande volume e pouco

peso, são tradicionalmente consumidos em todo o território nacional, sendo assim um

interessante veículo para o AR. O objetivo desta pesquisa foi produzir AR a partir de amido

de mandioca fermentado (AF) e empregar este ingrediente para desenvolver biscoito de

polvilho com apelo funcional. O amido resistente foi produzido pelo método de esterificação

com ácido cítrico em temperatura elevada, em diferentes tempos de reação (3, 4 e 7h). Os

biscoitos foram elaborados por substituição de parte do amido fermentado usado na

formulação pelo amido fermentado resistente (AFR) produzido (4h de reação) ou por amido

resistente comercial (amido de milho), de modo a promover a adição de 3, 5 e 7% de AR. Na

análise viscoamilográfica dos AFR, nos diferentes tempos de reação, não foram observadas

as curvas de viscosidade características do amido fermentado sem esterificação. O teor de

AR apresentado pelo AF foi de 10,41% (bs) e a modificação deste, nos tempos de 3, 4 e 7h,

aumentou o conteúdo para 11,19, 17,51 e 23,28% respectivamente. Através da microscopia

eletrônica foi observado que a medida que o tempo de reação com ácido cítrico aumentou,

ocorreram aumentos na aglomeração dos grânulos, corrosão na superfície, e modificações no

formato. Os biscoitos de polvilho formulados com amido resistente comercial e AFR tiveram

menor volume específico com o aumento da concentração de AR, enquanto que praticamente

não houve diferença na dureza. No teste de aceitabilidade, empregando uma escala hedônica

de sete pontos, os biscoitos formulados com adição de 3, 5 e 7% de AR comercial, obtiveram

notas médias de 6,4, 6,2 e 6,2, respectivamente, notas equivalentes a gostei moderadamente

e, os formulados com o AFR, 6,3, 5,5 e 4,9 (notas que variaram entre gostei moderadamente

e nem gostei/ nem desgostei). Todos os biscoitos formulados com AR comercial foram bem

aceitos, já os formulados com AFR a substituição de 5% de polvilho azedo por AR foi o

limite.

Palavras-chave: amido modificado, polvilho azedo, biscoito de polvilho, amido de mandioca

fermentado.

PIMENTEL, Norma L. M. Sour cassava starch biscuits (Biscoito de polvilho)

supplemented with resistant starch: a new fuctional food. Dissertation (Food Science

Master Degree) – Universidade Estadual de Londrina, 71p.

ABSTRACT

Consumers search each time more for foods that promote not only nutrition but also life

quality, welfare and decreasing levels of diseases risks. Functional foods are included in this

specific class of foods because, when ingested in adequate amount and periodicity, are

capable to produce beneficial health effects. Resistant starch (RS) has been extensively

studied as a consequence of its effects similar to the fibers ones. Biscoitos de polvilho,

characterized by great volume and little weight, are traditionally consumed in all the

Brazilian territory, being thus an interesting vehicle for RS. The objective of this research

was to produce RS from fermented cassava starch (FCS) and to use this ingredient to develop

biscoitos de polvilho with functional claim. RS was produced by the method of esterification

with citric acid in high temperature, with different reaction times (3, 4, 7h). The biscuits were

elaborated substituting part of the fermented starch used in formulation by the produced

resistant fermented starch (RFCS) or by a commercial RS (maize starch), as a way to

promote the addition of 3, 5 and 7% RS. Viscographic analysis of RFS, with different

reaction times, did not show the characteristic curve of FCS without esterification. RS level

in FCS was 10.41% (db) and the modification with times of 3, 4 and 7h increased this level

to 11.19,17.51 and 23.28%, respectively. Electronic microscopy showed that increasing

reaction time with citric acid increased starch granule agglomeration, superficial corrosion

and changes in the conformation. Biscoitos de polvilho formulated with commercial RS or

RFS had lower specific volume with the increase of RS while the hardness practically was

not affected. When acceptability was evaluated, using a seven points hedonic scale, the

biscuits formulated with 3, 5 and 7% of commercial RS had medium notes 6.4, 6.2 and 6.2,

respectively, and the ones with RFCS, 6.3, 5.5 and 4.9 (the grades were between like slightly

and neither like nor dislike).

All biscuits that were formulated with comercial AR had good

aceitability, but those formulated with AFR, 5% cassava starch substitued for AR was the

limit.

Key words: modified starch, fermented starch, sour cassava starch biscuit, fermented cassava

starch.

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Evolução histórica da produção de amido de mandioca no Brasil -1990 a 2006. 20

Figura 2 - Distribuição estadual da produção de amido de mandioca em

2006........................................................................................................................................ 20

Figura 3 –. Principais setores compradores de fécula das fecularias em 2006..................... 21

Figura 4 – Fluxograma do processo de extração do amido de mandioca............................. 23

Figura 5 - Fluxograma de obtenção do polvilho azedo......................................................... 24

Figura 6 - Reação de ácido cítrico com amido...................................................................... 34

Figura 7 - Fluxograma de produção de citrato de amido...................................................... 40

Figura 8 - Curvas viscográficas de amido de mandioca fermentado e citratos de amido de

mandioca fermentado em condições de reação a 135°C / 3-7h............................................. 51

Figura 9 - Microscopia eletrônica de varredura do amido de mandioca nativo e

modificado.............................................................................................................................. 53

Figura 10 - Microscopia eletrônica de varredura do amido de mandioca fermentado e

modificado.............................................................................................................................. 54

Figura 11 - Biscoito de polvilho com inclusão de 3, 5 e 7% (da esquerda para a direita)

de AR, pela substituição de polvilho azedo por AR comercial.............................................. 62

Figura 12 - Biscoitos de polvilho com inclusão de 3, 5 e 7% (da esquerda para a direita)

de AR, pela substituição de polvilho azedo por AFR............................................................ 63

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Parâmetros usados no Viscógrafo Brabender para análise

viscoamilográfica.................................................................................................................. 42

Tabela 2 - Quantidades de ingredientes utilizados para a formulação do biscoito de

polvilho................................................................................................................................. 44

Tabela 3 - Caracterização dos amidos de mandioca nativo (AN) e fermentado (AF) e

respectivos amidos resistentes (ANR e AFR) nos diferentes tempos de permanência na

estufa..................................................................................................................................... 49

Tabela 4 – Teor de AR em amido de mandioca fermentado (AF) e amidos de mandioca

fermentado resistentes (AFR), com tratamento em estufa por 3, 4 e 7h.............................. 57

Tabela 5 - Volume específico dos biscoitos de polvilho com diferentes níveis de adição

de AR de fontes comercial ou AFR...................................................................................... 59

Tabela 6 - Dureza das diferentes formulações de biscoitos de polvilho.............................. 60

Tabela 7 - Valores de aceitação para as diferentes formulações dos biscoitos de polvilho

(n = 102 provadores)............................................................................................................. 61

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ABAM Associação Brasileira dos Produtores de Amido de Mandioca

AF Amido Fermentado

AFR Amido Fermentado Resistente

AN Amido Nativo

ANOVA Análise de Variância

ANR Amido Nativo Resistente

ANVISA Agência Nacional de Vigilância Sanitária

AOAC Association of Official Analitycal Chemists

AR Amido Resistente

bs Base Seca

CEPEA Centro de Estudos Avançados em Economia Aplicada

CNNPA Comissão Nacional de Normas e Padrões para Alimentos

Dióxido de Carbono

DP Desvio Padrão

g Grama

h Hora

HCl Ácido Clorídrico

Ácido Sulfúrico

KOH Hidróxido de Potássio

M Molar

MERCOSUL Mercado Comum do Sul

min. Minuto

mL Mililitro

mm Milímetro

N Newton

N Nitrogênio

NaOH Hidróxido de Sódio

n° Número

nm Nanômetro

p Peso

s Segundos

v Volume

UB Unidades Brabender

UV Ultravioleta

UVB Ultravioleta B

UVC Ultravioleta C

µm Micrômetro

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO .....................................................................................................................................

2 OBJETIVOS ...........................................................................................................................................

2.1. Objetivo Geral................................................................................................................ 18

2.2. Objetivos Específicos.................................................................................................... 18

3 REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

........................................................................................................

3.1 Aspectos Gerais.

................................................................................................................................... 19

3.2 Polvilho Doce e Polvilho Azedo...................................................................................................... 22

3.3 Propriedades do Amido de Mandioca Fermentado.................................................................... 26

3.4 Biscoito de Polvilho........................................................................................................ 30

3.5 Amido Resistente............................................................................................................ 33

4 MATERIAL E MÉTODOS...............................................................................................................

4.1 Material........................................................................................................................... 38

4.2 Métodos.......................................................................................................................... 38

4.2.1. Produção de Amido Resistente (Citrato de Amido)................................................... 38

4.2.2. Caracterização dos Amidos Nativo e Fermentado, Antes e Após a Modificação

com Ácido Cítrico (Amidos Resistentes).............................................................................

4.2.2.1.Composição Química................................................................................................ 41

4.2.2.2. Análise Viscoamilográfica..................................................................................................... 41

4.2.2.3. Microscopia Eletrônica.......................................................................................................... 42

4.2.2.4. Quantificação de Amido Resistente......................................................................... 42

4.2.3. Formulação do Biscoito.............................................................................................. 43

4.2.4. Caracterização dos Biscoitos....................................................................................................... 45

4.2.4.1. Expansão.................................................................................................................. 45

4.2.4.2. Dureza instrumental................................................................................................. 45

4.2.4.3. Avaliação Sensorial................................................................................................. 46

4.3. Análise Estatística.......................................................................................................... 46

5 RESULTADOS E DISCUSSÃO.................................................................................................... 48

5.1. Caracterização dos Amidos Nativo e Fermentado, Antes e Após a Modificação com

Ácido Cítrico (Amidos Resistentes).....................................................................................

5.1.1.Proteína e Cinzas.......................................................................................................... 48

5.1.2. Análise Viscoamilográfica.......................................................................................... 50

5.1.3. Microscopia Eletrônica................................................................................................ 52

5.1.4. Quantificação de Amido Resistente............................................................................ 55

5.2. Caracterização dos Biscoitos.......................................................................................... 57

5.2.1. Volume Específico...................................................................................................... 57

5.2.2.Dureza........................................................................................................................... 59

5.2.3. Avaliação Sensorial..................................................................................................... 60

6. SUGESTÕES PARA FUTURAS PESQUISAS............................................................ 64

7. CONCLUSÕES............................................................................................................... 65

REFERÊNCIAS...................................................................................................................... 66

1. INTRODUÇÃO

A busca do consumidor por alimentos que lhe proporcionem benefício à

saúde tem aumentado nos últimos anos. Os alimentos funcionais enquadram-se nessa

categoria específica, pois são capazes de produzir efeitos fisiológicos benéficos e contribuir

para o controle e redução do risco de doenças (LOBO e SILVA, 2003).

Muitas pesquisas têm focado as propriedades funcionais dos alimentos.

Estas são atribuídas à presença de uma substância ou um grupo de substâncias que, quando

consumidas em quantidade e periodicidade adequadas, têm efeitos benéficos na saúde humana

(WALTER, SILVA e DENARDIN, 2005). O amido resistente (AR) é um desses

componentes.

O AR e os seus efeitos no trato gastrointestinal são similares àqueles

atribuídos a outros compostos classificados como fibras (celulose, hemiceluloses, pectina,

etc). Não é degradado pelas enzimas do trato gastrointestinal e fornecem carboidratos

fermentáveis para as bactérias do cólon. Mas, os produtos finais da fermentação de AR são,

quantitativamente, diferentes daqueles da fibra, produzindo, principalmente, butirato (25-30%

do total são ácidos graxos de cadeia curta). O butirato é metabolizado e fornece energia, que é

utilizada pelas células epiteliais do cólon para inibir ou evitar a transformação dessas células

em células malignas; ou seja, o AR diminui o risco de câncer de cólon (WALTER, SILVA e

DENARDIN, 2005).

Além disso, o AR pode ser usado como substrato para promover o

crescimento de alguns microrganismos probióticos atuando como um potencial agente

prebiótico (SAJILATA, SINGHAL e KULKARNI, 2006).

O consumo de AR tem sido relacionado com implicações benéficas na

administração do diabetes e está associado com um decréscimo nos níveis de colesterol e

triglicérides. Outros efeitos do consumo de AR são o aumento da frequência de evacuação e

do bolo fecal, prevenção de constipação e hemorróidas (WALTER, SILVA e DENARDIN,

2005); e, ainda, auxílio em regimes de perda de peso (CEREDA e VILPOUX, 2003).

O AR pode ser obtido a partir de fontes naturais como, por exemplo, da

banana verde e de cereais; ou por processamento do amido não resistente (APARICIO-

SAGUILÁN et al., 2007; KOKSEL et al., 2007). Pode ser constituído de diferentes frações:

amido fisicamente inacessível, amido retrogradado, complexos formados entre nutriente-

amido, amido modificado quimicamente (CALIXTO et al., 1993; GOÑI et al., 1996).

Muitos pesquisadores têm investigado formas de modificação do amido

granular para que a porcentagem de amido resistente aumente. Entre estas, pode-se citar: o

tratamento de grânulos de amido nativo com ácido sulfúrico (H

) ou ácido clorídrico

(HCl) para remover a fração amorfa (SHIN et al., 2007), ciclos de autoclavagem,

gelatinização seguida de retrogradação do amido (NIBA, 2002, 2003) e esterificação com

ácido cítrico em alta temperatura (XIE e LIU, 2004).

O amido

de mandioca, no Brasil, recebe também a denominação de

polvilho, que pode ser doce ou azedo. O polvilho azedo é um tipo de amido de mandioca

modificado por processo de fermentação e secagem solar, que apresenta características bem

diversas das do polvilho doce. É um produto regional e geralmente de preparo artesanal

(MAEDA e CEREDA, 2001). O polvilho azedo é usado, principalmente, na fabricação de

biscoitos e de pão de queijo, e é insubstituível, devido às suas características de sabor e

propriedades funcionais, principalmente a de expansão (PALATA-OVIEDO e CAMARGO,

1998; CEREDA et al., 2003). Também pode ser utilizado na preparação de pães sem glúten,

para indivíduos intolerantes a este (BERTOLINI et al., 2001).

O biscoito de polvilho, tradicional em alguns estados do Brasil, como Minas

Gerais, São Paulo e Paraná, é um dos produtos mais característicos fabricados com polvilho

azedo. É produzido através da mistura de polvilho azedo, sal e leite até que a granulometria

característica do polvilho azedo seja desfeita. Em seguida é feito o escaldamento, com água e

gordura vegetal hidrogenada ferventes, que tem como objetivo pré-gelatinizar os grânulos de

amido para facilitar a incorporação de água na massa. Os ovos são adicionados um a um e

mais água é adicionada até a massa atingir o “ponto ideal”. Esse biscoito poderia ser um novo

veículo para amido resistente e, considerando que o polvilho azedo é essencial para conferir-

lhe as características próprias, seria interessante que a matéria-prima para a produção desse

amido resistente fosse o próprio polvilho azedo.

No texto da autora aparece a denominação fécula, em vez de amido, uma vez que, comercialmente, esta é a

terminologia aplicada a amidos de raízes e tubérculos. Para padronização, neste trabalho, o termo fécula será

sempre substituído pela denominação científica de amido.

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo Geral

Desenvolver biscoitos de polvilho com apelo funcional, devido à adição de

amido resistente.

2.2. Objetivos Específicos

• Produzir e caracterizar amido resistente a partir de amido de mandioca;

• Desenvolver biscoitos de polvilho com diferentes teores de amido resistente;

• Avaliar as características de expansão e dureza dos biscoitos;

• Avaliar a aceitação dos biscoitos.

3. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

3.1. Aspectos Gerais

A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é cultivada praticamente em todo o

território nacional e sua importância reside no fato de que suas raízes são comestíveis,

possuindo alto teor de amido (CEREDA et al., 2003).

A raiz da mandioca é um dos alimentos básicos da população brasileira,

principalmente para a de baixa renda. Porém, mais do que isso, a indústria de beneficiamento

da raiz vem apresentando um significativo desenvolvimento, garantindo a presença de vários

produtos (fécula, polvilho azedo, dextrina, álcool, etc), como matérias-primas em uma série

de indústrias, tanto alimentícias quanto não-alimentícias. Duas tendências vêm contribuindo

para o desenvolvimento do setor: (1) a crescente diferenciação de produtos, com o surgimento

de farinhas especiais, como as temperadas, por exemplo; e (2) as ótimas perspectivas para a

utilização do amido de mandioca como matéria-prima para diversos setores industriais. A

segunda tendência tem chamado a atenção do mercado, principalmente pela possibilidade de

substituição do amido de milho e de outros cereais, pelo amido de mandioca (GAMEIRO,

2002).

A produção brasileira de amido de mandioca em 2006 foi a terceira maior

dos últimos 16 anos, ficando praticamente igual à de 2001 e perdendo apenas para 2002,

quando a safra alcançou 667 mil toneladas (Figura 1) (CEPEA/ABAM, 2007).

FONTE: CEPEA/ABAM (2007).

Figura 1- Evolução histórica da produção de amido de mandioca no Brasil -1990 a 2006.

O principal estado produtor de amido de mandioca foi o Paraná, que

respondeu por 65% do total produzido em 2006, seguido pelo Mato Grosso do Sul (18%), São

Paulo (13%), Santa Catarina (4,0%) e, o estado de Goiás começou a apontar no cenário

nacional, sinalizando a nova fronteira de produção de amido de mandioca no Brasil (Figura 2)

(CEPEA/ABAM, 2007).

FONTE: CEPEA/ABAM (2007).

Figura 2 – Estados produtores de amido de mandioca em 2006.

A Figura 3 ilustra os principais setores compradores de amido de mandioca

em 2006, destacando-se o setor de papel e papelão que adquiriu mais de 26,0% da produção

total, seguido pelo setor de frigoríficos (19,5%), atacadistas (16,8%), massas, biscoitos e

panificação (14,5%), indústrias químicas (6,6%), setor têxtil (4,9%), e varejistas (4,8%). A

compra de amido de mandioca por outras fecularias representou 3,1% (CEPEA/ABAM,

2007).

FONTE: CEPEA/ABAM (2007).

Figura 3 –Principais setores compradores de fécula das fecularias em 2006.

Acrescenta-se ainda que do total comercializado pelas empresas, 61% foi de

amido nativo, 35% de amido modificado, enquanto que 3 e 2 % foram de polvilho doce e

azedo respectivamente (CEPEA/ABAM, 2007).

3.2. Polvilho Doce e Polvilho Azedo

De acordo com a Resolução RDC nº 263, de setembro de 2005 da ANVISA

(Agência Nacional de Vigilância Sanitária), amidos são os produtos amiláceos extraídos de

partes comestíveis de cereais, tubérculos, raízes ou rizoma, e, os amidos extraídos de

tubérculos, raízes e rizomas podem ser designados de fécula. O amido ou fécula de mandioca

deve apresentar umidade máxima de 18,0 % (g/100g) (BRASIL, 2005).

O amido de mandioca, também comercialmente denominado de polvilho

doce, é utilizado para diversas finalidades, inclusive a alimentícia. A sua produção ocorre em

diferentes tipos de empresas, desde aquelas artesanais, de pequeno porte, até as modernas, de

grande investimento. Neste último caso, não se desenvolvem processos de fermentação nem

se estabelecem condições de contaminação com materiais biológicos ou outras sujidades;

visto que se trata de uma matéria-prima de ampla aplicação, com uma possibilidade maior de

comercialização na América do Sul com a implantação do mercado aberto (MERCOSUL)

(DEMIATE et al., 2003).

O polvilho azedo é o amido de mandioca modificado por fermentação e

secagem solar (MAEDA e CEREDA, 2001). Apresenta cheiro característico e sabor ácido

(CEREDA et al., 2003).

A técnica utilizada para extração de amido de mandioca (Figura 4) para

fazer o amido fermentado é a mesma que se usa para obtenção do produto não fermentado. A

diferença é que este último necessita ser de melhor qualidade, em função do uso, o que só

pode ser obtido com equipamentos mais sofisticados e caros, com capacidade mínima de 80

toneladas de raízes por dia (CEREDA et al., 2003).

Figura 4 - Fluxograma do processo de extração do amido de mandioca (CEREDA et al.,

2003).

É possível obter amido fermentado a partir do amido úmido ou seco, como

se observa na Figura 5:

CASCAS

Descarte

RALAÇÃO SOB ÁGUA

PENEIRAS + ÁGUA

BAGAÇO

MANIPUEIRA DILUIDA

(resíduo líquido contendo

amido

)

AMIDO ÚMIDO

Mandioca

52% Umidade

55% Umidade

68% Umidade

85% Umidade

95% Umidade

50% Umidade

Figura 5- Fluxograma de obtenção do polvilho azedo (CEREDA et al., 2003).

AMIDO SECO AMIDO ÚMIDO

52% Umidade

água

12 a 14% Umidade

água

FERMENTAÇÃO

GOMA

PERDA DE

UMIDADE

POLVILHO

AZEDO

25%

50% Umidade

ESFARELAMENTO

SECAGEM

14% Umidade

MOAGEM

EMBALAGEM

Cereda et al. (2003), descreveram a fabricação de polvilho azedo comercial.

Os autores afirmam que o que define o produto, de características muito especiais, é o modo

como é produzido. Além de obtido pela fermentação de polvilho doce, pode também ser

produzido do amido recuperado do líquido de prensagem da massa ralada, como subproduto

da fabricação de farinha de mandioca. A maioria dos produtores inicia o processamento pela

raíz de mandioca, embora haja alguns que fermentem o polvilho doce extraído e armazenado

durante a safra. As raízes são lavadas, descascadas, raladas e submetidas à extração, onde se

separa o bagaço (massa) que contém as fibras e o "leite" de amido onde os grãos de amido

estão em suspensão. O amido purificado é transferido para tanques de fermentação e deve

permanecer nesses tanques sob uma camada de água, que no início chega a 20 cm e vai

secando a medida que o tempo passa. O tempo necessário para que a fermentação se complete

é variável. Nas regiões tradicionais produtoras de Minas Gerais a fermentação leva de 30 a 40

dias e requer um tempo maior nas regiões mais frias. O final da fermentação não é fácil de ser

constatado. A formação de bolhas na superfície, embora seja adotada por alguns autores, não

marca o final da produção de ácidos, que ocorre até 2/3 do tempo total de fermentação.

Alguns produtores contam com seus próprios critérios, avaliando a superfície da massa em

fermentação no tanque ou mesmo a acidez na boca. O valor do pH na massa de polvilho em

fermentação cai para valores entre 3,0 e 3,5, chegando até mesmo a 2,5, provavelmente

inibindo o processo fermentativo. Uma vez completada a fermentação, deixa-se secar a água

da superfície dos tanques até que o polvilho fique com umidade ao redor de 30 - 50%. O

polvilho fermentado é retirado dos tanques por meio de pás, podendo ou não passar por

esfarelador mecânico, e espalhado para secar. A secagem é sempre feita ao sol, um processo

que pode ser limitante à produção. Produtores que tentaram secagem artificial com uso de

calor asseguram que não se obtém produto seco com o mesmo poder de expansão, quando

aplicado na confecção de produtos panificáveis (como por exemplo, biscoito de polvilho e

pão de queijo), sugerindo que mais que o calor, é a radiação solar a responsável por essa

característica. No final da secagem, o polvilho azedo apresenta uma fina granulação, que lhe é

característica.

O polvilho azedo é ainda um produto artesanal, mesmo quando fabricado

em fecularias modernas. A secagem ao sol traz uma série de transtornos que vão da elevada

contaminação com poeira até a falta de padrão nos lotes (CEREDA e VILPOUX, 2003).

3.3. Propriedades do Amido de Mandioca Fermentado

Na legislação brasileira não existe ainda uma classificação do amido de

mandioca fermentado (polvilho azedo) segundo os índices de expansão ao forno, embora essa

seja a diferença primordial entre os polvilhos doce e azedo (CEREDA e VILPOUX, 2003).

Maeda e Cereda (2001) estabeleceram uma proposta de classificação,

baseando-se na expansão do polvilho azedo ao forno. Os limites propostos nesta classificação

foram: tipo A, o polvilho azedo que apresentar índice de expansão ao forno superior a 16,00

mL/g; tipo B, entre 12,00 mL/g e 16,00 mL/g e, tipo C com índice de expansão inferior a

12,00 mL/g.

O polvilho azedo apresenta características que o diferenciam do doce em

composição química, parâmetros viscográficos, índices de qualidade e tamanho de grânulos

(CEREDA et al., 2003).

A fermentação e a secagem ao sol influenciam as propriedades físico-

químicas e sensoriais do amido de mandioca fermentado. O conteúdo de proteína aumenta,

uma vez que estudos confirmaram a presença de uma microbiota natural (bactérias

diversificadas, fungos e leveduras) responsável pela fermentação, e que ao término dessa

fermentação permanecerá no produto; as propriedades de pasta, solubilidade e poder de

inchamento do amido fermentado são mudados (FRANCO, CABRAL e TAVARES, 2002). O

estudo comparativo entre os polvilhos azedo e doce mostrou que a fermentação confere ao

produto sabor e odor característicos. A curva viscoamilográfica Brabender passa a apresentar

picos menos elevados e o início do processo de gelatinização é detectado em temperatura

inferior à do polvilho doce, para as mesmas concentrações. Esse fato pode explicar a

possibilidade de gelatinização do polvilho azedo pelo processo de escaldamento. Quando se

faz o escaldamento (utilizando água e gordura ferventes) do polvilho azedo, a temperatura

desses ingredientes é suficiente para gelatinizá-lo, o que não ocorre com o polvilho doce

(CEREDA et al., 2003). O amido gelatinizado ajuda a reter CO

(dióxido

de carbono) e

expande a massa (CEREDA e VILPOUX, 2003).

Durante o processo fermentativo, o amido é o meio para o crescimento

bacteriano, quando muitos ácidos orgânicos são produzidos, principalmente o lático,

conferindo aos produtos fabricados com polvilho azedo um aroma e sabor peculiar

(PALATA-OVIEDO e CAMARGO, 1997; DEMIATE et al., 1999).

Os grânulos do amido de mandioca são modificados por ação de ácidos e

enzimas amilolíticas durante a fermentação (CAMARGO et al., 1988; MARCON et al.,

2006), mas a simples adição de ácido orgânico e/ou enzima não é suficiente para prover a

capacidade de expansão (FRANCO, CABRAL e TAVARES, 2002). O ataque ácido é

demonstrado por uma grande produção de ácidos orgânicos, incluindo os ácidos láctico,

acético, butírico, propiônico, entre outros. A ação enzimática é observada como pequenas

perfurações e fissuras em alguns grânulos de amido com o uso do microscópio eletrônico

(MARCON et al., 2006).

Palata-Oviedo e Camargo (1997) propuseram que a propriedade de

expansão de amido de mandioca hidrolisado com ácido orgânico e seco pelo sol resulta em

parte de interações químicas entre os ácidos orgânicos e o amido, catalisadas pelo segmento

UV (ultravioleta) das radiações solares, o que pode explicar a propriedade de expansão do

polvilho azedo.

Bertolini et al. (2001) afirmaram que se pode assumir que a expansão do

amido de mandioca fermentado é uma consequência de suas propriedades termomecânicas,

resultantes das mudanças estruturais do amido durante a fermentação e secagem sob o sol. A

expansão ocorre com quantidade de água adequada quando a temperatura interna da massa

está próxima à temperatura de fusão (90-100°C). Quando a temperatura da massa é a mesma

que a da evaporação da água, a umidade da massa é suficiente para iniciar a expansão. Então,

a menor viscosidade após a fusão, devido à despolimerização do amido, poderia diminuir a

força de resistência à expansão no caso de amido de mandioca fermentado, quando

comparado com amido de mandioca nativo.

Franco, Cabral e Tavares (2002) investigaram o efeito de fermentação e de

secagem sob o sol na capacidade de expansão do amido de mandioca fermentado e

observaram que o conteúdo de ácido láctico produzido durante a fermentação diminuiu em

torno de 30% durante a secagem ao sol. Esses autores sugeriram a possibilidade de ocorrência

de uma reação fotoquímica envolvendo o amido e resultando na formação de uma rede

tridimensional que retém as bolhas de gás durante o cozimento do produto final.

Outra hipótese para explicar a propriedade de expansão do polvilho azedo é

a de que bactérias lácticas produziriam exopolissacarídeos, que seriam responsáveis pela

formação de uma estrutura viscoelástica, a qual permitiria a retenção de gás e a expansão da

massa de polvilho azedo durante o forneamento (CEREDA et al., 2003).

Estudos mais recentes realizados por Vatanasuchart et al. (2005)

encontraram que amidos de mandioca modificados por hidrólise com ácido lático (1%) por 15

minutos e expostos a radiação UVB ou UVC (ultravioleta B ou C, que possuem diferentes

comprimentos de onda), por 7, 9 e 11 horas, tiveram propriedades de expansão efetivas

durante o assamento. Estes pesquisadores alegaram que as regiões amorfas dos grânulos de

amido foram parcialmente despolimerizadas pela hidrólise do ácido lático e a irradiação

ultravioleta (UV), reduzindo o tamanho das moléculas de amido e facilitando a formação de

uma estrutura de massa com menor viscosidade, conduzindo, conseqüentemente, a uma boa

expansão.

3.4.Biscoito de Polvilho

O biscoito de polvilho se caracteriza por ser um produto muito leve e

volumoso, resultado da expansão no forno (CEREDA et al., 2003). Existe uma infinidade de

formulações de biscoito de polvilho no mercado, algumas incluindo, além de polvilho azedo,

polvilho doce, farinha de milho, água, leite, ovos e sal. Estes biscoitos têm várias

denominações regionais, como: bolo de vento, rosca de polvilho, corujão, biriba, no Brasil,

pan de bono e pan de yuca, na Colômbia, e chipa paraguaya, no Paraguai (APLEVICZ,

2006).

Segundo Maeda e Cereda (2001), a formulação padrão do biscoito de

polvilho consiste em polvilho azedo, gordura vegetal hidrogenada, sal e água; podendo ainda,

o sabor ser incrementado pela a adição de leite e ovos.

A principal função do amido em produtos de panificação é absorver água e,

deste modo, estabelecer a estrutura do produto (PEREIRA et al., 2004).

A água é utilizada na fabricação de biscoito de polvilho para dissolver os

ingredientes solúveis, influenciando também no escaldamento do polvilho. A quantidade de

água é fundamental para o inchamento do grânulo de amido e sua quantidade depende dos

ingredientes da fórmula e do processo de panificação utilizado, constituindo o meio

dispersante para os outros ingredientes da formulação, além de favorecer o crescimento do

biscoito durante o assamento (PEREIRA et al., 2004; APLEVICZ, 2006). Em biscoitos de

polvilho, a quantidade total de líquido na formulação afeta a consistência e a elasticidade da

massa que deve ser suficientemente macia para ser moldada e suficientemente rígida para

manutenção da forma até que esteja assada, devendo apresentar um certo grau de elasticidade

para se expandir sem romper durante o assamento (APLEVICZ, 2006).

Em produtos de panificação, as gorduras contribuem para as propriedades

de mastigação, conferindo-lhes maciez. O aumento do conteúdo de gordura, além do efeito

amaciador, contribui para dar maior brilho e uma melhor aparência, como também atua no

valor nutricional, sendo a mais concentrada fonte de energia presente nos alimentos. A

gordura atua ainda como um lubrificante molecular, ajudando a massa a ter maior

extensibilidade, contribuindo para maior elasticidade (PEREIRA et al., 2004; SANTOS,

2006).

Nas receitas tradicionais, o leite é adicionado à mistura de escaldamento do

polvilho e a gordura presente no leite confere melhor aparência da crosta do produto final. O

leite também auxilia na obtenção de uma melhor coloração do biscoito (PEREIRA et al.,

2004; SANTOS, 2006; APLEVICZ, 2006).

O ovo tem capacidade aerante (pela formação de espuma da clara),

capacidade emulsificante (pela ação da lecitina da gema) e a contribuição nutricional,

servindo também como agente corante, de sabor e de aroma, originando biscoitos com melhor

estrutura, textura mais leve e aerada, maior volume, característica de liga, cor amarela natural,

além do fornecimento de proteínas, vitaminas (A, D e E) e minerais (PEREIRA et al., 2004;

SANTOS, 2006; APLEVICZ, 2006).

O sal contribui essencialmente para o sabor, sendo utilizado o cloreto de

sódio comum iodado na fabricação de biscoito de polvilho (PEREIRA et al., 2004; SANTOS,

2006). Estudos amilográficos mostram que o sal retarda a gelatinização do amido de

mandioca, mantendo o grânulo intacto por um tempo mais longo durante o assamento e

influencia também o escaldamento, por aumentar a temperatura da mistura (SANTOS, 2006).

Na fabricação de biscoitos de polvilho escaldados, o polvilho azedo

proporciona ao produto sabor agradável, com crosta fina, crocante, com maior volume, além

de maior absorção de água, fazendo com que se obtenha maior rendimento em biscoitos. O

escaldamento é uma das principais etapas na fabricação do biscoito de polvilho por afetar a

textura, o sabor e a aparência final do produto. Consiste em adicionar ao polvilho, água ou

leite ferventes, que podem ser ou não acompanhados por óleo e também por sal. A mistura do

escaldamento depende do produto, sendo comum adicionar um pouco de água antes do

escaldamento a fim de hidratar o polvilho e promover o inchamento dos grânulos facilitando o

processo. Uma parcela de produtores indica a mistura com água, leite, óleo e sal como a que

resulta em biscoitos com melhor textura, sabor e aparência (APLEVICZ, 2006).

O biscoito apresenta, no seu interior, uma matriz de amido gelatinizado, que

é responsável pela sua expansão e textura. Análises microscópicas permitem comprovar que

os grânulos apresentam-se com diferentes graus de integridade, segundo a sua posição no

biscoito: os grânulos da superfície apresentam-se íntegros e sem inchamento. É provável que,

durante o forneamento, os grânulos da superfície sejam desidratados e aqueles do interior

sejam gelatinizados, provocando a expansão do biscoito (CAMARGO et al., 1988).

Silva et al. (1998) investigaram a influência do teor de água, o efeito da pré-gelatinização do

amido fermentado e a adição de amilose e de amilopectina no crescimento do biscoito, e,

concluíram que: o tempo de formação do biscoito demonstrou ser altamente dependente do

teor de água presente na sua formulação; os biscoitos formulados com amilose ou

amilopectina em substituição ao amido fermentado, apresentaram baixo grau de expansão

quando comparados ao padrão; e, a gelatinização total do amido modificado por fermentação,

parece destruir completamente suas propriedades de expansão, pois não foi observado

crescimento do biscoito com uma formulação padrão contendo apenas amido totalmente

gelatinizado.

3.5. Amido Resistente

O amido é classificado em função da sua estrutura físico-química e da sua

susceptibilidade à hidrólise enzimática. Segundo Englyst, Kingman e Cummings (1992), de

acordo com a velocidade com o qual é digerido “in vitro”, o amido divide-se em: rapidamente

digerível, quando, ao ser submetido à incubação com amilase pancreática e amiloglicosidase

em uma temperatura de 37°C, converte-se em glicose em 20 minutos; lentamente digerível,

se, nas condições anteriores, é convertido em glicose em 120 minutos e amido resistente

(AR), que resiste à ação das enzimas digestivas.

O amido resistente é definido como amido ou produtos de degradação do

amido que não são degradados pelas enzimas do trato gastrointestinal de indivíduos saudáveis

e podem ser completa ou parcialmente fermentados no cólon (FARAJ, VASANTHAN e

HOOVER, 2004).

De acordo com Faraj, Vasanthan e Hoover (2004), o AR é classificado em

quatro categorias: fisicamente inacessível à α-amilase pancreática (AR1), amido granular

(AR2), amido retrogradado (cristais de amilose) (AR3) e amido térmica ou quimicamente

modificado (AR4). Por serem amidos nativos, os AR1 e AR2, perderão o potencial de amido

resistente se forem gelatinizados durante o processamento do alimento (MUN e SHIN, 2006).

Xie e Liu (2004) mostraram que o tratamento de amidos de milho (normal,

ceroso e com alto conteúdo de amilose), com ácido cítrico (140°C, 7h) aumentou o seu

conteúdo de amido resistente para 78% ou mais, dependendo do tipo de amido de milho. O

ácido cítrico é inofensivo à saúde humana, e a taxa de digestão do amido esterificado pela

pancreatina diminui com o aumento do grau de substituição por citrato. De acordo com a

Figura 6, quando o ácido cítrico é aquecido, este se desidrata para produzir um anidrido. O

anidrido cítrico pode então reagir com o amido para formar o citrato de amido.

Figura 6- Reação de ácido cítrico com amido (XIE e LIU, 2004).

Segundo Sajilata, Singhal e Kulkarni (2006), o AR pode substituir uma

porcentagem da farinha de trigo sem afetar significativamente o manuseio ou a reologia da

massa de produtos panificáveis. Comparando a adição de AR com a adição de fibras no

resultado final desses produtos, foi encontrado que o AR promove uma textura mais macia,

aparência e sabor. Uma outra propriedade funcional do AR citada por estes pesquisadores é a

sua capacidade de melhorar a crocância do produto.

O AR pode ser adicionado em vários alimentos, devido às suas diferentes

propriedades físico-químicas em função do tipo e pode ser aplicado no desenvolvimento de

gêneros alimentícios de baixa caloria e pouca gordura (MUN & SHIN, 2006). Aplicações

potenciais incluem pães, tortilhas, massa de pizza, “cookies”, “muffins”, “wafer”, cereais

matinais, “snacks”, bem como leites fermentados reduzidos de gordura, bebidas lácteas

saborizadas e pré-misturas para sopas instantâneas e bebidas de chocolate (APARICIO-

SAGUILÁN et al., 2007).

Aparicio-Saguilán et al. (2007) prepararam “cookies” adicionados de AR

produzido a partir de amido de banana (19,34% de AR). Após aplicação de um teste sensorial

afetivo, não encontraram diferença na preferência entre os “cookies” adicionados de AR e o

controle.

Na pesquisa realizada por Wepner et al. (1999) sobre adição de citrato de

amido em sistemas alimentares, encontraram que a adição de 10% de citrato de amido

produzido através de diferentes fontes (amidos de trigo - 57,5% de AR, batata – 50,2% de

AR, ervilha – 45,9% de AR e milho – 50,8% de AR) em pão provocou diminuição no volume

deste (destacando uma maior diminuição no volume do pão após adição de citrato de amido

de milho) e mudanças em outras características do produto (como por exemplo, as estruturas

alveolares no miolo do pão apresentaram-se mais grosseiras e mais irregulares). Estes pães

com adição de citrato de amido também apresentaram cor mais amarelada do que o padrão e o

pão sem adição de citrato de amido foi claramente preferido na avaliação sensorial.

Comentaram que a diminuição no volume e as mudanças em outras características do produto

devido à adição de citrato de amido poderiam ser compensadas por nova variação na receita,

assim como um aumento no conteúdo de água, ou ainda, que a adição de menor quantidade de

AR poderia resultar em produto com características ótimas. No preparo de “wafer” com

adição de citrato de amido, concluíram através da avaliação sensorial que um produto

aceitável com um aumento no conteúdo de AR pode ser alcançado adicionando 7,5% de

citrato de amido em “wafers” e que, quando maior quantidade de citrato de amido é

adicionada ao produto, variações adicionais na receita conduziriam a um produto aceitável,

nem tão duro e nem tão quebradiço. Na adição de citrato de amido em macarrão, foram

observadas mudanças nas características do produto, tais como na dureza, na cor e na perda de

sólidos durante o cozimento o que, poderia ser compensada através de alterações na receita

em termos de níveis de ovo e/ou conteúdo de umidade. Observaram também que para a

aplicação de citrato de amido no aumento do conteúdo de fibra nos alimentos, tem que ser

levado em consideração que o conteúdo de AR pode mudar durante a produção do alimento

devido à degradação deste.

Não se tem conhecimento de estudos em que o amido resistente tenha sido

incorporado em biscoitos de polvilho.

Considerando que, hoje em dia, muitas doenças resultam de alimentação

inadequada, e que algumas podem estar relacionadas com insuficiente ingestão de fibra, é

razoável assumir que um aumento no consumo de componentes não digeríveis seria

importante. Neste contexto, as fontes de AR seriam preferencialmente incluídas na dieta, já

que não causam alterações sensoriais pronunciadas como fazem as tradicionais fontes de

fibras (WALTER, SILVA e DENARDIN, 2005).

4 MATERIAL E MÉTODOS

4.1. Material

Para a produção dos biscoitos foram utilizados amido de mandioca

fermentado, ovos, sal, leite e gordura vegetal hidrogenada, adquiridos no comércio local.

Amido de mandioca resistente, outro ingrediente dos biscoitos, foi

produzido em laboratório, a partir de amidos de mandioca nativo e fermentado, adquiridos no

comércio local, segundo o item 4.2.1. Também foi utilizado o amido de milho resistente

comercial (Hi-maize®260), doado pela National Starch & Chemical (Brasil), caracterizado

através da metodologia do item 4.2.2.3.

4.2. Métodos

4.2.1. Produção de Amido Resistente (Citrato de Amido)

O amido resistente foi produzido pelo método de esterificação com ácido

cítrico em temperatura elevada, de acordo com a metodologia proposta por Xie e Liu (2004).

Amidos de mandioca nativo e fermentado foram utilizados como matéria-prima

O método de produção de amido resistente (Figura 7) consistiu em dissolver

20g de ácido cítrico em 20mL de água e ajustar o pH para 3,5 com NaOH 10M e completar o

volume final para 50mL adicionando água destilada. A solução de ácido cítrico (50mL) foi

misturada com 50g de amido e condicionada à temperatura ambiente por 16 horas.

Posteriormente, o amido foi colocado em estufa com circulação de ar forçado, a 50°C, e foi

seco até atingir um nível de umidade de 5-10%. A mistura foi moída e seca em estufa com

circulação de ar forçado por 3, 4 e 7h em uma temperatura de 135°C a fim de ocorrer a

esterificação. A mistura seca foi lavada com 3 litros de água para remover o ácido cítrico que

não reagiu. O amido lavado foi seco à temperatura ambiente até atingir umidade de 10 a 15%

e, finalmente, moído.

Para a modificação do amido de mandioca fermentado, foram testados os

três tempos de estufa (3, 4 e 7h). Para a do amido de mandioca nativo, foi testado apenas o

tratamento em estufa pelo maior tempo (7h), para verificar a possível diferença com o amido

de mandioca fermentado, frente ao tratamento químico.

Figura 7- Fluxograma de produção de citrato de amido.

Amido nativo

Solução de ácido cítrico

pH=3,5

Mistura de amido com ácido cítrico

Condicionamento (16h, temperatura ambiente)

Moagem

Secagem (50°C, até umidade de 5-10%)

Esterificação (135°C / 3, 4 e 7h)

Lavagem

Secagem

(35°C, até umidade de 10-15%)

Moagem

Citrato de amido

4.2.2. Caracterização dos Amidos Nativo e Fermentado, Antes e Após a Modificação com

Ácido Cítrico (Amidos Resistentes)

4.2.2.1 Composição Química

O teor de umidade, proteínas e cinzas dos amidos, antes e depois da

modificação foi determinado conforme descrição da Association of Official Analytical

Chemists (AOAC, 1998).

4.2.2.2. Análise viscoamilográfica

A análise viscoamilográfica foi realizada em suspensões de amido a 10%

(p/v, bs), no Viscógrafo Brabender (Brabender, Duisburg – Alemanha), equipado com

cabeçote de 700cm.g de sensibilidade, para os amidos de mandioca nativo e fermentado e

para as suas respectivas modificações (3, 4 e 7h de estufa a 135°C). Na Tabela 1, estão

apresentados os parâmetros empregados no teste.

Tabela 1 – Parâmetros usados no Viscógrafo Brabender para análise viscoamilográfica

PARÂMETROS DO VISCÓGRAFO

Temperatura inicial (°C) 30

Razão para aumento da temperatura (°C/min) 1,5

Temperatura máxima (°C) 95

Tempo de permanência em temperatura máxima (min) 20

Razão para diminuição da temperatura (°C/min) 1,5

Temperatura mínima (°C) 50

Tempo de permanência em temperatura mínima (min.) 0

4.2.2.3. Microscopia eletrônica

Foi realizada a observação do aspecto superficial dos grânulos de amido de

mandioca nativo, fermentado e modificados, em microscópio eletrônico de varredura – The

Quanta 200 – Philips (Holanda). Pequenas quantidades de amostras foram fixadas sobre

“stubs” em fitas de carbono. Foram recobertas com uma camada de carbono, e em seguida,

com uma camada de ouro com 20nm de espessura.

4.2.2.4. Quantificação de amido resistente

Para a quantificação do teor de amido resistente, foi utilizado um kit de

determinação de AR adquirido na Megazyme (Irlanda). É um método aprovado pela AOAC

(método 2002.02) e pela AACC (método 32-40).

A quantificação foi realizada de acordo com o proposto no kit, porém, com

modificações: foi feita a digestão do amido não resistente utilizando as enzimas α-amilase e

amiloglucosidase, e as soluções contendo este amido foram separadas por centrifugação. Após

a determinação da fração digerível através da medida da absorbância de cada solução, por

diferença encontrou-se o valor do amido resistente. Esta modificação foi necessária porque o

método utiliza o hidróxido de potássio (KOH) para solubilizar o AR (após este já ter sido

separado do amido não resistente) mas, de acordo com Shin, Song e Seib (2004), o KOH não

solubiliza totalmente o AR4 devido à presença de ligações cruzadas.