( PDF ) O uso da dexametasona e a fertilidade do touro

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ

SETOR DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS VETERINÁRIAS

TALITA ELLY TREML

O USO DA DEXAMETASONA E A FERTILIDADE DO TOURO

CURITIBA

2010

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TALITA ELLY TREML

O USO DA DEXAMETASONA E A FERTILIDADE DO TOURO

Dissertação apresentada ao Programa

de Pós-Graduação em Ciências

Veterinárias, Linha de Pesquisa

Reprodução e Melhoramento Genético

Animal, do Setor de Ciências Agrárias

da Universidade Federal do Paraná,

para obtenção do título de Mestre em

Ciências Veterinárias.

Orientador: Prof. Dr. Romildo Romualdo

Weiss.

CURITIBA

2010

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III

A meus pais e minha irmã, por estarem sempre presentes nos bons

e maus momentos de minha vida, pelo apoio, paciência, dedicação,

incentivo e carinho...

À minha amiga Ana Cristina e meus amigos e colegas de trabalho

pelo enorme apoio, indispensável à conclusão deste mestrado...

Ao meu grande amigo Anselmo Reynaud dos Santos, pelo apoio,

dedicação, incentivo e amizade, sem os quais jamais teria

conseguido chegar até aqui;

E à pessoa, cujo apoio embora recente já fez uma grande

diferença, Cristiano Schmitt.

AGRADECIMENTOS

Ao Prof. Dr. Romildo Romualdo Weiss, que além de meu Orientador foi meu grande

incentivador à realização deste mestrado, e que como Orientador sempre esteve

presente e disposto a me passar todo seu conhecimento com enorme presteza e

responsabilidade;

Aos Médicos Veterinários Milton da Silva Nemecek e Rubem Rosso Baptista, por

abrirem as portas para que este projeto pudesse ser realizado, pelo grande apoio e

ajuda na realização deste e pela transmissão de conhecimentos;

À equipe do laboratório de Patologia Clínica do Hospital Veterinário da UFPR, em

especial ao técnico Olair Carlos Beltrame, pela amizade e apoio para a realização

das análises bioquímicas;

À Profa. Dra. Rosana Moraes e a aluna Katlyn Barp Meyer, pela disposição e

dedicação na realização das análises de Testosterona;

À minha grande amiga M.Sc. Tatiane Micheletti, a pessoa que mais entende de

estatística que eu conheço, e que sem sua enorme ajuda eu estaria perdida.

SUMÁRIO

LISTA DE FIGURAS.......................................................................................... VIII

LISTA DE TABELAS.......................................................................................... IX

RESUMO............................................................................................................

ABSTRACT........................................................................................................

INTRODUÇÃO................................................................................................... 12

OBJETIVO GERAL ...........................................................................................

OBJETIVOS ESPECÍFICOS..............................................................................

CAPÍTULO 1: REVISÃO DE LITERATURA: EFEITOS DA

DEXAMETASONA NA CLÍNICA MÉDICA E REPRODUTIVA.........................

RESUMO............................................................................................................

ABSTRACT........................................................................................................

INTRODUÇÃO................................................................................................... 16

CARACTERÍSTICAS DOS GLICOCORTICÓIDES...........................................

PROPRIEDADES FARMACOLÓGICAS...........................................................

Propriedades Antiinflamatórias...................................................................... 20

Propriedades Imunossupressoras................................................................. 20

EFEITOS COLATERAIS....................................................................................

EFEITOS NA REPRODUÇÃO...........................................................................

Efeitos na Reprodução das Fêmeas...............................................................

Efeitos na Reprodução dos Machos.............................................................. 25

CONCLUSÃO.................................................................................................... 29

REFERÊNCIAS..................................................................................................

CAPÍTULO 2: O USO DA DEXAMETASONA E A FERTILIDADE DO

TOURO..............................................................................................................

RESUMO............................................................................................................

ABSTRACT........................................................................................................

INTRODUÇÃO................................................................................................... 37

MATERIAL E MÉTODOS.................................................................................. 38

Animais e Manejo............................................................................................. 38

Plano Experimental.......................................................................................... 39

Exames Reprodutivos......................................................................................

Exame Morfológico dos Testículos.................................................................... 40

VII

Comportamento Sexual......................................................................................

Colheita do Sêmen.............................................................................................

Avaliação do Sêmen.......................................................................................... 40

Análise de Testosterona..................................................................................

Análise de Frutose e Ácido Cítrico.................................................................

Análise Estatística............................................................................................

RESULTADOS...................................................................................................

DISCUSSÃO...................................................................................................... 51

CONCLUSÃO.................................................................................................... 52

REFERÊNCIAS..................................................................................................

VIII

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 – Aferição visual da concentração espermática em sêmen bovino..

Figura 2 – Comparação das médias dos valores de frutose e ácido cítrico

entre os grupos experimental e controle pré e pós tratamento.....

Figura 3 – Comparação das médias dos valores de morfologia espermática

entre os grupos experimental e controle pré e pós tratamento.....

Figura 4 – Comparação das médias dos valores de concentração de

espermatozóides entre os grupos experimental e controle pré e

pós tratamento...............................................................................

Figura 5 – Comparação das médias dos valores de volume e pH entre os

grupos experimental e controle pré e pós tratamento...................

Figura 6 – Comparação das médias dos valores de motilidade entre os

grupos experimental e controle pré e pós tratamento...................

Figura 7 – Comparação das médias dos valores de turbilhonamento e vigor

entre os grupos experimental e controle pré e pós tratamento.....

Figura 8 – Comparação das médias dos valores de testosterona entre os

grupos experimental e controle pré e pós tratamento...................

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 – Comparação entre grupo controle (n=3) e experimental (n=3)

das variáveis avaliadas por estatística paramétrica por teste

ANOVA.......................................................................................

Tabela 2 – Comparação entre grupo controle (n=3) e experimental (n=3)

pré e pós tratamento das variáveis avaliadas por estatística

não-paramétrica por teste Kruskall-

Wallis..........................................................................................

Tabela 3 – Comparação de médias e desvio padrão entre os grupos

controle (n=3) e tratamento (n=3) das variáveis testadas por

estatística paramétrica por meio do teste

ANOVA.......................................................................................

Tabela 4 – Comparação de médias e desvio padrão entre os grupos

controle (n=3) e tratamento (n=3) das variáveis testadas por

estatística não-paramétrica por meio do teste Kruskal

Wallis..........................................................................................

RESUMO - Desde que os efeitos benéficos da cortisona foram descobertos, os

esteróides adrenais e seus derivados sintéticos têm sido utilizados em larga escala e

muitas vezes de maneira exagerada. A sua grande utilização se deve aos seus

efeitos antiinflamatórios e imunossupressores, porém estes são acompanhados de

efeitos metabólicos gerais, responsáveis pela maioria dos efeitos colaterais

observados no uso crônico e/ou maciço. Já os efeitos destes medicamentos na

reprodução animal são pouco conhecidos, principalmente no que diz respeito às

funções sexuais dos machos. Visto que este grupo de medicamentos é de grande

importância no tratamento de diversas afecções, tendo seu uso bastante amplo,

torna-se necessária a investigação de possíveis interferências que o uso destes

fármacos possa trazer à atividade de reprodutores. O objetivo deste estudo foi

avaliar os possíveis efeitos que este grupo de medicamentos têm sobre a função

sexual de touros. Para tanto foram avaliados 6 touros provenientes de uma central

de inseminação de Santa Catarina, divididos em dois grupos, sendo um

experimental e outro controle.

Palavras-chave: antiinflamatórios; esteróides; uso crônico; machos

ABSTRACT - Since the benefits of cortisone were discovered, the adrenal steroids

and its synthetically derivable medicaments have been largely used, sometimes

abused. This great utility is linked to its anti-inflammatory and immunosuppressive

actions. Unfortunately, these good effects can’t be separated from its collateral

effects, mainly when these drugs are used for long periods of time. But these effects

on animal reproduction aren’t largely known, mainly about the male reproductive

functions. As this group of medicaments is so important in the treatment of several

affections, it become necessary an investigation of possible interferences, that the

use of them can bring to the male reproduction. The aim of this study was to evaluate

the possible effects that these drugs may have to the bull’s sexual function. To

achieve this objective six bulls from an insemination central in Santa Catarina state

were evaluated and divided into two groups, one experimental and other control.

Key words: anti-inflammatory; male; steroids

INTRODUÇÃO

A dexametasona é um fármaco sintético inserido no grupo dos glicocorticóides.

Estes são hormônios esteróides sintetizados a partir do colesterol na porção cortical

das glândulas adrenais, os corticosteróides ou corticóides. Estes hormônios podem

ser classificados como mineralocorticóides, glicocorticóides e esteróides sexuais. Os

glicocorticóides são amplamente utilizados na Medicina Veterinária para o

tratamento dos sinais clínicos de desordens inflamatórias, alérgicas e

imunomediadas.

Estes fármacos possuem atividade antiinflamatória e imunossupressora, porém

não é possível a dissociação destas duas características dos efeitos metabólicos

gerais, como a ação sobre o metabolismo de carboidratos e de proteínas, mesmo

em preparações sintéticas, porém nestas a atividade antiinflamatória e

imunossupressora foi ampliada.

Os fármacos glicocorticóides mais utilizados são a hidrocortisona (de ação

rápida), a prednisona e a prednisolona (de ação intermediária) e a dexametasona e

betametasona (de ação prolongada).

Em geral, a dose imunossupressora é duas vezes maior que a dose

antiinflamatória, sendo esta dez vezes maior que a dose fisiológica.

Os efeitos benéficos objetivados na terapia com glicocorticóides são pronta e

seguramente atingidos. Por outro lado, sabe-se que seu uso contínuo leva ao

aparecimento de inúmeros efeitos indesejáveis. Dentre estes efeitos estão a

interferência na vascularização, secreção gástrica e nos mecanismos de

reepitelização da mucosa; inibição da síntese de material conjuntivo, com

conseqüente diminuição da espessura dérmica dificultando a cicatrização; atrofia e

fraqueza muscular, devido ao seu efeito proteolítico (SPINOSA et al., 1999).

Muito se sabe a respeito das ações, indicações, efeitos colaterais e toxicidade

dos glicocorticóides. Porém, há pouca informação sobre os seus efeitos na

reprodução, principalmente com relação aos machos.

O objetivo deste trabalho é avaliar o efeito da administração de um

glicocorticóide (dexametasona) sobre o comportamento sexual e características

seminais do touro.

OBJETIVO GERAL

Avaliar os efeitos da administração do glicocorticóide dexametasona sobre as

funções sexuais dos touros.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Avaliar o efeito da dexametasona no comportamento sexual dos touros, no

desenvolvimento dos órgãos genitais palpáveis, no pH do sêmen, vigor dos

espermatozóides, volume do ejaculado, concentração espermática, porcentagem de

espermatozóides anormais, na concentração plasmática de testosterona e na

concentração de frutose e ácido cítrico no plasma seminal.

CAPÍTULO 1

REVISÃO DE LITERATURA: EFEITOS DA DEXAMETASONA NA CLÍNICA

MÉDICA E REPRODUTIVA

EFEITOS DA DEXAMETASONA NA CLÍNICA MÉDICA E REPRODUTIVA

(dexamethasone effects on medical and reproductive clinics)

RESUMO – A dexametasona, glicocorticóide sintético, possui inúmeras

atividades. Destacam-se entre elas sua ação antiinflamatória, sendo um potente

antiinflamatório esteroidal de longa ação. Possui também efeito imunossupressor, e

age na regulação de genes cancerígenos. Por todos estes efeitos benéficos tornou-

se um fármaco amplamente utilizado na clínica tanto de seres humanos quanto de

animais. Apesar de apresentar tantos benefícios, este glicocorticóide sintético causa

vários efeitos colaterais, principalmente quando usado por períodos prolongados.

Esta revisão tem como objetivo abordar as características da dexametasona, seus

efeitos benéficos e colaterais e outras atividades, como é o caso de sua atuação na

consolidação da memória e sua utilização no diagnóstico de certas afecções.

Palavras-chave: antiinflamatório; glicocorticóide; reprodução

ABSTRACT – Dexamethasone, a synthetic glucocorticoid, has many functions.

One of the most important is the anti-inflammatory action. Dexamethasone is a

potent long action steroidal anti-inflammatory, and it also has function as an

immunosuppressant, it regulates cancer cells’ genes. Because these benefits,

dexamethasone has become a drug largely used in human and veterinary medicine.

However, dexamethasone has side-effects when used for long period of time. The

aim of this literature review is to dissert over dexamethasone drug characteristics,

contraindications and side-effects, and other functions such as memory consolidation

and in a diagnostic context.

Key words: anti-inflammatory; glucocorticoid; reproduction

INTRODUÇÃO

Os corticosteróides ou corticóides são hormônios esteróides sintetizados a

partir do colesterol na porção cortical das glândulas adrenais. Estes hormônios

podem ser classificados como mineralocorticóides, glicocorticóides e esteróides

sexuais (SPINOSA et al., 1999).

Os glicocorticóides possuem atividade antiinflamatória e imunossupressora,

porém não é possível a dissociação destas duas características dos efeitos

metabólicos gerais, como a ação sobre o metabolismo de carboidratos e de

proteínas, mesmo em preparações sintéticas, muito embora nestas a atividade

antiinflamatória e imunossupressora tenha sido ampliada. Ainda assim, estes

fármacos estão entre os grupos de medicamentos usados com maior freqüência na

Medicina Veterinária e são amplamente utilizados no tratamento de diversas

condições clínicas, sendo comumente prescritos para o tratamento dos sinais

clínicos de ampla variedade de desordens inflamatórias, alérgicas e imunomediadas

(SPINOSA et al., 1999).

Os efeitos benéficos objetivados na terapia com glicocorticóides são pronta e

seguramente atingidos. Por outro lado, sabe-se que seu uso contínuo leva ao

aparecimento de inúmeros efeitos indesejáveis. Dentre estes efeitos estão a

interferência na vascularização, na secreção gástrica e nos mecanismos de

reepitelização da mucosa; inibição da síntese de material conjuntivo, com

conseqüente diminuição da espessura dérmica dificultando a cicatrização; atrofia e

fraqueza muscular, devido ao seu efeito proteolítico (SPINOSA et al., 1999).

Em indivíduos normais o produto fisiológico do estresse, os corticosteróides

(cortisol em humanos e corticosterona em ratos), normalizam a atividade axial por

meio de feedback negativo em múltiplos locais, incluindo o hipotálamo, glândula

pituitária e córtex adrenal. A inibição desta ação resulta em secreção endógena e

níveis anormais de glucocorticóides, o que é correlacionado com várias doenças

como hipertensão, inflamação, obesidade, doenças cardíacas e diabetes (BAID e

NIEMAN, 2004; WITHWORTH et al., 2005; PASQUALI et al., 2006; TOMLINSON e

STEWART, 2007; TAIT et al., 2008).

Recentemente, a combinação de CRH (hormônio liberador de corticotropina) e

dexametasona, provou ser 90% eficiente para diagnosticar indivíduos imuno-

suprimidos (VARGHESE e BROWN, 2001).

Os corticosteróides também são amplamente utilizados na Medicina em seres

humanos, e são utilizados em aplicações pré-natais com a finalidade de promover a

maturação pulmonar fetal em gestantes com início de trabalho de parto prematuro.

Esta aplicação também tem como benefícios a redução da ocorrência em

prematuros da síndrome do desconforto respiratório, da hemorragia peri e

intraventricular e da mortalidade neonatal (MENEGUEL et al., 2002).

A presente revisão tem como objetivo reunir informações sobre o

glicocorticóide sintético dexametasona, medicamento amplamente utilizado tanto na

clínica de seres humanos como na medicina veterinária, abordando todos os seus

efeitos benéficos, importantes no tratamento de diversas afecções, seus efeitos

colaterais, e outras aplicações deste fármaco, enfocando suas ações na área

reprodutiva.

CARACTERÍSTICAS DOS GLICOCORTICÓIDES

A função vital do córtex adrenal depende de sua produção e secreção regulada

de um grupo de hormônios, todos de natureza esteróide. Demonstrou-se que no

córtex adrenal existem mais de cinqüenta esteróides naturais, mas que apenas

poucos têm efeitos biológicos significativos. De acordo com o efeito biológico

predominante, os esteróides adrenocorticais são classificados em

mineralocorticóides e glicocorticóides. Estudos das propriedades químicas dos

esteróides adrenocorticais demonstraram que a atividade antiinflamatória tem

grande correlação com sua atividade glicocorticóide. Os efeitos colaterais

indesejáveis em cães e gatos (retenção sódica, edema) são associados com a

atividade mineralocorticóide (FELDMAN e NELSON, 1991).

Numerosos hormônios glicocorticóides têm sido sintetizados com a intenção de

aumentar a potência antiinflamatória e reduzir a atividade mineralocorticóide

(WESTERHOF e PELLICAN, 1995).

A dexametasona, glicocorticóide sintético, é o fármaco de primeira escolha

para a indução de uma terapia com corticóides. Alguns clínicos preferem iniciar a

terapia com dexametasona e depois substituí-la pela prednisona ou prednisolona

quando a doença estiver em remissão. A dexametasona tem custo mais elevado e é

o fármaco deste grupo com maior potencial de causar efeitos colaterais durante uma

terapia prolongada em cães e gatos (MULLER, 1989).

Os glicocorticóides atuam na consolidação da memória, o que facilita a

memorização de situações estressantes. Nesse sentido demontrou-se que o

tratamento prolongado com dexametasona promoveu uma fixação de memória clara

em pacientes com desordem de estresse pós-traumático (ROHLEDER et al., 2009).

Além de todas estas atividades, este glicocorticóide também possui ação

inibitória sobre a secreção e/ou atividade de algumas substâncias. Evidências

experimentais demonstraram que fêmeas de Setaria cervi, parasitas de bovinos,

contêm níveis significantes da enzima prostaglandina H sintase e que a

dexametasona inibe tal enzima (RATHAUR et al., 2009).

PROPRIEDADES FARMACOLÓGICAS

A dexametasona mostrou-se eficaz na redução dos efeitos provocados por

endotoxemia experimental em eqüinos com lipopolissacarídeos de Escherichia coli.

Dentre estes efeitos inclui-se a temperatura retal, dimimuída com a aplicação do

glucocorticóide, tendo este medicamento atenuado também a neutropenia, linfopenia

e leucopenia resultantes do quadro de endotoxemia (ROSA et al., 2003).

A diminuição da temperatura decorrente do uso da dexametasona pode ser

devido à inibição que este medicamento faz da liberação de muitas substâncias

biologicamente ativas, incluindo substâncias quimioatrativas dos leucócitos. Os

corticosteróides interferem nos mediadores quimiotáticos, bloqueando o último

passo de migração, retendo os neutrófilos entre o endotélio e a membrana basal

(ROSA et al., 2003).

A dexametasona possui efeitos regulatórios sobre a expressão de genes de

células cancerígenas mamárias e pode ser usada como tratamento de carcinomas

mamários. Em comparação com outros reguladores como o acetato de

medroxiprogesterona (MPA), a enzima R5020, a progesterona e a

dihidrotestosterona (DHT), a dexametasona fica em segundo lugar em potência de

inibição dos genes cancerígenos, sendo a ordem decrescente de inibição: MPA,

dexametasona, R5020, progesterona e DHT (PENNANEN et al., 2009).

Propriedades Antiinflamatórias

Os glucocorticóides são amplamente usados pela sua atividade

imunossupressiva e antiinflamatória. Esses medicamentos possuem efeito inibitório

na produção e ação das citocinas (ROSA et al., 2003).

Os glicocorticóides sintéticos têm a capacidade de previnir ou suprimir as

reações inflamatórias. Eles inibem os fenômenos iniciais do processo inflamatório

como a formação do edema, deposição de fibrina, migração leucocitária, dilatação

capilar e atividade fagocitária. Também limitam as manifestações tardias da

inflamação como a proliferação fibrocapilar, acúmulo de colágeno e cicatrização

(BEVIER, 1990).

Segundo BLACKWELL (1980), estes fármacos podem impedir os neutrófilos de

se aderirem às células endoteliais nas áreas de inflamação. Além disso, impedem

que os neutrófilos produzam uma enzima que converte plasminogênio em plasmina,

a qual facilita a migração leucocitária para as áreas inflamadas.

Devido às sua atividades antiinflamatórias, os corticosteróides têm sido usados

na prevenção de displasia broncopulmonar em humanos, mas em um estudo com

recém-natos de 10 a 14 dias de vida, demonstrou-se que o uso destes

medicamentos, não reduziu a incidência de displasia broncopulmonar, e causou uma

desaceleração no crescimento destes indivíduos (MATALOUN et al., 2005).

Propriedades Imunossupressoras

Dependendo da dose, um glicocorticóide pode ter um efeito imunossupressor

sobre diferentes componentes da resposta imune em bovinos, incluindo linfopenia,

eosinopenia, redução da atividade mitogênica e redução da ação citotóxica

(DOHERTY et al, 1995).

De acordo com FELDMAN e NELSON (1991), quando doses altas são

administradas em cães e gatos, a produção de anticorpos diminui, principalmente se

for um glicocorticóide de ação prolongada.

Segundo FEKETY (1992), os glicocorticóides modificam vários aspectos do

sistema imune, secundariamente a suas propriedades antiinflamatórias. Eles alteram

a função dos macrófagos, monócitos e neutrófilos, deprimindo a fagocitose,

respostas quimiotáticas e o ingresso dessas células até os sítios de inflamação.

Glicocorticóides causam rápida lise das células linfóides em algumas cobaias

de laboratório (incluindo ratos, camundongos e coelhos), mas outras espécies

animais (humanos, cães e gatos) chegam a ser resistentes a este tipo de lise

(SARGISON, 1993). Segundo STUCK (1989), apesar desta resistência geral, células

da leucemia linfoblástica aguda e linfomas podem ser lisados pelos glicocorticóides.

A dexametasona incita a inibição de uma molécula de adesão leucocitária

poucas horas após a administração. Em um estudo com vacas que apresentavam

mastite subclínica, demonstrou-se que a aplicação de glucocorticóides levou ao

aparecimento de sinais clínicos, possivelmente devido à imunossupressão causada

por estes medicamentos (MALLARD et al., 2009).

A aplicação de dexametasona também causa uma redução dramática na

secreção de interferon-γ pelas células mononucleares e inibe a secreção de IgM

pelas células B (MALLARD et al., 2009).

EFEITOS COLATERAIS

Os corticosteróides afetam o metabolismo de carboidratos, proteínas, gorduras

e purinas, além de influenciar no equilíbrio hidroeletrolítico (CALVERT e

CORNELIUS, 1990).

De acordo com observações de FELDMAN e NELSON (1991), os efeitos no

metabolismo são geralmente de natureza catabólica.

Os níveis plasmáticos de corticosteróides também influenciam os sistemas

cardiovascular e nervoso, rins, músculos esqueléticos e outros órgãos e tecidos.

Glicocorticóides promovem doença ulcerativa progressiva e hemorragia

gastrointestinal por aumento da secreção de ácido e pepsina e retardo na

cicatrização. Esse efeito pode ser agravado se o corticóide for associado à outra

droga antiinflamatória não esteróide (BUTTERWORTH e WEAVER, 1992).

A administração prolongada de altas doses de glicocorticóides causa uma

redistribuição da gordura corporal. Segundo CORAH et al. (1995), em um estudo

com bovinos, o cortisol atuou no tecido adiposo facilitando a lipólise.

Hormônios glicocorticóides estimulam a síntese de proteína em alguns tecidos

tais como o fígado. Em outros, o efeito é catabólico, como no caso das células

linfóides e fibroblastos. Esta ação catabólica dos glicocorticóides é refletida em

atrofia dos tecidos linfóides, redução da massa muscular, osteoporose, diminuição

da atividade dos fibroblastos e redução da espessura dérmica (DESLER et al.,

1995).

Os glucocorticóides podem causar laminite em eqüinos por meio da

potencialização da ação das catecolaminas no tono vascular e imunossupressão

(ROSA et al., 2003).

O uso prolongado destes fármacos no período antenatal em seres humanos

levou a redução do peso ao nascimento, redução do perímetro cefálico, maior risco

de óbito, infecção neonatal e supressão adrenal mais prolongada e evidente

(MENEGUEL et al., 2002).

A exposição pré-natal à aplicação de dexametasona em roedores machos

tratados cruzados com fêmas controle resultou numa diminuição de peso da

progênie de ambos os sexos. Já o cruzamento de fêmeas tratadas com machos

controle afetou apenas os machos da progênie (DRAKE et al., 2005).

EFEITOS NA REPRODUÇÃO

Efeitos na Reprodução das Fêmeas

Os glicocorticóides induzem ao abortamento tardio, no terço final da gestação,

nos ruminantes, podendo também ser utilizados para induzir o parto nestas

espécies. Em vacas gestantes recomenda-se 20 mg de dexametasona ou 5 a 10 mg

de flumetasona, para no mencionado período da gestação determinar o abortamento

ou indução prematura do parto. Nesses animais o abortamento ou parto é induzido

em até 80% dos casos, entre 2 a 4 dias após a aplicação do corticosteróide. O

abortamento ocorre por contração uterina conseqüente à abrupta e intensa

diminuição da concentração sangüínea de progesterona e ao aumento dos valores

sangüíneos de estrógenos e prostaglandina. Na maioria dos casos, o abortamento

ou parto são seguidos de retenção da placenta, fato que exigirá, para perfeito

controle da evolução do caso, antibioticoterapia profilática e adequado tratamento

para que não ocorram as complicações, entre as quais, destacam-se: endometrites,

provocando vários graus de catarro genital e esterilidade (GRUNERT, et al., 2005).

As doses elevadas de glicocorticóides usadas para tratar transtornos

imunomediados, problemas alérgicos agudos e outras afecções importantes podem

levar ao aborto (AUSTAD E LUNDE, 1976).

VIGHIO e LIPTRAP (1990) demonstraram que altas doses de glicocorticóides

administradas na metade do ciclo estral de vacas podem adiar o início do próximo

estro. Este atraso parece ser atribuído a uma atividade luteal prolongada. O

mecanismo deste efeito não foi esclarecido.

A administração parenteral de dexametasona em vacas no período de diestro

pode atrasar a transição deste período para o estro. Este atraso se dá em função da

extensão do período para reiniciar o ciclo estral após a luteólise. Com isto há

inibição do crescimento folicular. Há uma interferência sobre a capacidade

esteroidogênica tanto do folículo em crescimento como do corpo lúteo em regressão,

além de existir diminuição da secreção de gonadotropinas da pituitária anterior. A

freqüência e amplitude dos pulsos de LH são diminuídas inibindo o desenvolvimento

dos folículos e a produção de estradiol, muito embora a produção basal de LH não

seja afetada (BROUSSARD et al., 1997).

Em um trabalho feito com o objetivo de avaliar os efeitos da indução de parto

com dexametasona em vacas, MALMA (1993) observou um aumento na incidência

de retenção de placenta, mortalidade materna, nascimento de bezerros mortos ou

extremamente fracos. Relatos não confirmados em pesquisa realizada com vacas

tratadas com uma dose única de 20 mg de dexametasona, que após 265 dias de

gestação, apresentaram o parto entre 36 e 47 horas após a injeção. A incidência de

retenção de placenta foi de 40% e não foram observados efeitos adversos quanto à

viabilidade dos bezerros, produção leiteira, fertilidade ou involução uterina (MEDINA

e ULBERICH, 1997).

Há estudos que demonstram que 10 dias de tratamento com dexametasona na

dose de 5 mg duas vezes ao dia ocasiona morte intra-uterina e reabsorção

embrionária quando feita até os 30 dias de gestação e promove aborto se a

administração for iniciada a partir dos 35 dias (FELDMAN, 1991).

Ratas expostas à administração de dexametasona no período pré-natal

apresentaram queda no peso da progênie, e a aplicação de dexametasona nesta

mesma espécie no útero não gravídico, teve como conseqüência uma progênie de

baixo peso ao nascimento, intolerância à glucose, e altos níveis de produção

hepática de glucose, normalizando-se a partir da terceira geração (DRAKE et al.,

2005).

Nos casos de hidropsia, a dexametasona na dose de 20 a 40mg, juntamente

com a prostaglandina F2α, é utilizada com sucesso no tratamento desta afecção. A

hidropsia é o acúmulo anormal de líquido seroso em tecidos ou cavidades, e pode

ocorrer durante a prenhez na cavidade alantóica ou amniótica, na membrana

corioalantóica da placenta, ou no feto propriamente. A dexametasona, juntamente

com a prostaglandina usada nestes casos, tem como finalidade a indução do parto

em 24 a 48 horas (MOMONT, 2005).

Em ratas demonstrou-se que este glicocorticóide inibe a produção da segunda

isozima da enzima ciclooxigenase (COX), enzima esta importante na formação de

prostaglandina (BROUSSARD et al., 1997).

A dexametasona mimetisa os efeitos do cortisol na supressão da reponsividade

da pituitária ao GnRH (BREEN e KARSCH, 2006).

Efeitos na Reprodução dos Machos

TAHA et al. (1981) mostraram que injeções de betametasona na dose de 2 mg

aplicadas duas vezes por semana em dois machos Beagle causaram alterações nas

características seminais logo no primeiro dia de tratamento, com redução no volume

do ejaculado, na concentração de espermatozóides e na concentração de

testosterona plasmática. Não houve alteração significante na motilidade espermática

e em um dos animais houve aumento no número de espermatozóides anormais.

Como resultado da supressão da secreção de gonadotropinas, observou-se um

declínio na testosteronemia e nos níveis de FSH plasmático, com conseqüente

atrofia testicular, ausência de libido, oligospermia e infertilidade no cão.

O trabalho de FELDMAN e NELSON (1991) revelou que a medicação com

corticóides no cão leva à oligospermia pela supressão do FSH e LH, efeito este

reversível logo após a interrupção da medicação.

O tratamento com este gicocorticóide sintético durante 21 dias em cães, com

doses iniciais de 0,5 mg/kg, reduzida a 0,25 mg/kg e então para 0,125 mg/kg, não

teve efeito na libido e na morfologia externa dos órgãos reprodutivos. Também não

houve efeito no aspecto do sêmen e no vigor dos espermatozóides, e na

porcentagem dos espermatozóides anormais no ejaculado. Entretanto, houve uma

redução significativa no volume do ejaculado, na concentração espermática e no

número total de espermatozóides no ejaculado, assim como na concentração de

testosterona (WEISS et al., 2001).

A administração oral de vitamina E em cães superou os efeitos negativos na

qualidade do sêmen que o tratamento com dexametasona (para mimetizar estresse)

induziu (HATAMOTO et al., 2006).

Em um estudo com seis touros, nos quais foram injetadas 20 mg de

dexametasona, realizando-se dosagem de testosterona e LH em intervalos de meia

hora, por seis horas consecutivas, dois dias antes e dois dias após a aplicação,

constatou-se que as taxas de LH decresceram rapidamente após a aplicação, e as

taxas de testosterona sofreram um pico imediatamente após a aplicação e esses

níveis caíram a concentrações baixas até quatro horas após a injeção. Concluiu-se

que a dexametasona suprime a secreção de testosterona. Também diminui a

liberação de LH e indiretamente reduz a síntese e/ou liberação de testosterona

(THIBIER et al., 1976).

A aplicação de 20mg de dexametasona altera a resposta da aplicação de LH-

RH, provocando um aumento menor nas concentrações de androstenediona em

touros da raça Holandesa (CHANTARAPRATEEP et al.; 1981).

BOLY et al. (1994) observaram que a administração de 20 mg de

dexametasona intra-muscular diminui drasticamente as concentrações de LH e

testosterona em touros.

HORN et al. (1999) induziram degeneração testicular experimental por meio de

aplicação de 20 mg de dexametasona durante sete dias consecutivos em touros de

uma raça taurina pura (Aberdeen Angus) e de sua sintética derivada (Brangus-

Ibagé) com o objetivo de averiguar o comprometimento da espermatogênese e o

tempo de recuperação entre estas duas raças. Demonstraram que a aplicação de

dexametasona levou a um decréscimo qualitativo significativo no aspecto do

ejaculado, turbilhonamento e vigor dos espermatozóides. As médias de motilidade e

espermatozóides normais apresentaram decréscimo já no segundo dia após o início

do tratamento. A recuperação do quadro normal se deu no 44º dia do início da

aplicação do corticóide, mas não houve diferenças entre os dois grupos.

Em um estudo realizado com ovinos, o uso da dexametasona em aplicações

semanais por três semanas, levou a um aumento no volume do ejaculado, aumento

da motilidade em massa e motilidade individual. Não se observou diferença

significativa na concentração espermática e na concentração plasmática de

testosterona (ALKASS, 2009).

TOHEI et al. (1997) demonstraram que ratos machos tratados com

dexametasona apresentaram um declínio nos níveis plasmáticos de testosterona e

inibina, mas o mesmo não ocorreu com os níveis de LH e FSH.

Em roedores o estresse materno pré-natal pode desmasculinizar e feminilizar o

comportamento sexual adulto da progênie, efeito este que pode ser simulado com a

aplicação pré-natal de ACTH e dexametasona. Tal estresse resulta numa diminuição

da ação da 3β-hidroxiesteróide desidrogenase nos testículos fetais e reduz a

concentração basal de testosterona nos machos adultos (FERIN, 2006).

O aumento do cortisol em humanos e de corticosterona em roedores, resultado

de situações de estresse, predispõe a problemas de saúde como hipertensão e

disfunções reprodutivas na vida adulta. O estresse induzido em fêmeas de roedores

resultou numa queda de peso da ninhada ao nascimento, e um encurtamento da

distância anogenital nos machos. Alterações no comportamento sexual dos machos

adultos também foi correlacionado com a administração pré-natal de dexametasona,

sendo que o excesso do nível de glicocorticóides sangüíneo pode ser uma das

causas da síndrome da disgenesia testicular (HU et al., 2009).

A dexametasona é capaz de diminuir o comportamento agressivo de machos

de marsupiais até dois meses antes da temporada de acasalamento, por inibir a

secreção de cortisol. Mas durante a temporada, esta inibição não tem mais efeito.

Este glicocorticóide também é capaz de reduzir os níveis de testosterona no mesmo

período, mas não quando o nível deste hormônio está próximo de seu pico

(WINGFIELD, 2006).

CONCLUSÃO

A dexametasona, glucocorticóide sintético, é um fármaco de ampla utilização

no tratamento de uma grande variedade de afecções, seja por suas atividades

antiinflamatórias e imunossupressoras, como por sua capacidade de regular genes

cancerígenos, ou na reprodução animal como indutor de parto. Entretanto também

traz uma série de efeitos colaterais, principalmente quando é utilizado em períodos

prolongados. Por essas razões é importante o estudo e o conhecimento de todos os

efeitos da dexametasona, sejam eles benéficos ou colaterais, para que o uso deste

medicamento seja feito de maneira racional e com o sucesso esperado. Nesta

revisão sentiu-se falta de maior número de estudos envolvendo os efeitos da

dexametasona na reprodução animal, principalmente no que diz respeito aos

machos, sendo que as poucas pesquisas nesta área ainda estão um pouco

defasadas. Mostra-se assim, a necessidade de desenvolver pesquisas sobre o efeito

da dexametasona na fertilidade de machos.

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CAPÍTULO 2

O USO DA DEXAMETASONA E A FERTILIDADE DO TOURO

(use of dexamethasone and the fertility of the bull)

RESUMO - A dexametasona, antiiflamatório esteroidal sintético de longa ação,

é amplamente utilizada no tratamento de afecções inflamatórias, alérgicas e

imunomediadas. Além destas ações, os antiinflamatórios esteroidais também

possuem atividade hiperglicemiante, efeito sobre o metabolismo protéico e lipídico,

promovem retenção de sódio, excreção de potássio e expansão do volume

extracelular, levam ao incremento da diurese e agem sobre o metabolismo do cálcio.

Na área reprodutiva podem levar a aborto, retenção de placenta, disfunções do ciclo

estral e redução da fertilidade de machos. O objetivo deste estudo foi o de avaliar os

efeitos da dexametasona na reprodução de touros. Para tanto avaliou-se a atividade

sexual de 6 touros divididos em dois grupos, sendo um experimental que recebeu

dexametasona, e outro controle. A função reprodutiva destes animais foi avaliada

durante duas espermatogêneses, sendo uma antes e uma após a aplicação do

medicamento. Sobre as funções avaliadas, libido, morfologia dos testículos, níveis

de frutose e ácido cítrico no plasma seminal, níveis de testosterona sangüínea,

volume e pH do ejaculado, concentração de espermatozóides no ejaculado,

motilidade, turbilhonamento, vigor e defeitos morfológicos dos espermatozóides, não

foi observada qualquer alteração significativa com o uso da dexametasona.

Palavras-chave: antiinflamatório; esteróide; machos; reprodução

ABSTRACT – Dexamethasone, a long action steroidal anti-inflammatory, is

largely used on treatment of inflammatory, allergic and immunomediated diseases.

Besides these actions, steroidal anti-inflammatory have hyperglycemiant activity,

effect on protein and lipid metabolism, promote sodium retention, potassium

excretion, and expand the extracellular volume. Besides they also have a diuretic

effect. In the reproductive area, this drugs can cause abortion, placenta retention,

dysfunctions of the estral cycle, and decrease on male fertility. The aim of this study

was to evaluate the effect of dexamethasone on bull’s fertility. In order to achieve this

goal the sexual activity of six bulls was evaluated. These animals were divided into

two groups. One of these groups received dexamethasone. The other group was

taken as control. The evaluation of the sexual activity was made during the period of

two spermatogenesis, one before and one after the treatment with dexamethasone.

Above the functions evaluated, libido, testicles morphology, biochemistry of seminal

plasma, blood testosterone, volume and pH of the ejaculate, vigor and morphological

defects of the spermatozoids, wasn’t observed any significantly effect with the use of

dexamethasone.

Key words: anti-inflammatory; male; reproductive; steroidal

INTRODUÇÃO

Os hormônios esteróides são produzidos na porção cortical das glândulas

adrenais, glândulas estas presentes em todos os animais vertebrados. Estes

hormônios podem ser classificados em mineralocorticóides, glicocorticóides e

esteróides sexuais. Os mineralocorticóides interferem na manutenção do equilíbrio

hídrico e eletrolítico. Os glicocorticóides afetam o metabolismo de carboidratos e

proteínas, e possuem atividade antiinflamatória e imunossupressora. Nos esteróides

de ocorrência natural os efeitos mineralocorticóides e glicocorticóides estão

associados em maior ou menor escala. Devido às atividades antiinflamatórias e

imunossupressoras dos glicocorticóides, estes se tornaram medicamentos

amplamente utilizados tanto na medicina como na medicina veterinária para o

tratamento de desordens inflamatórias, alérgicas e auto-imunes. Porém estes efeitos

benéficos não podem ser dissociados dos efeitos colaterais como hiperglicemia,

retenção de sódio, aumento da excreção de potássio, alteração no metabolismo de

carboidratos, proteínas e gorduras entre outros. Para minimizar estes efeitos

indesejáveis e potencializar as atividades benéficas dos glicocorticóides foram

desenvolvidas preparações sintéticas, sendo uma destas a dexametasona, um

glicocorticóide sintético de longa ação (SPINOSA et al., 1999).

Na reprodução o uso da dexametasona tem dentre outras funções combater

desordens inflamatórias, determinar abortamento ou indução do parto.

Em ruminantes os medicamentos à base de corticóides causam abortamento

no terço final de gestação. Isto ocorre por contração uterina conseqüente à abrupta

e intensa diminuição da concentração sangüínea de progesterona e ao aumento dos

valores de estrógeno e prostaglandina (GRUNERT et al., 2005). Porém o uso destes

medicamentos para abortamento ou indução de parto pode levar à ocorrência de

retenção de placenta (MALMA, 1993).

Em cães machos demonstrou-se que a aplicação de dexametasona leva à

redução do volume do ejaculado, concentração espermática e no número total de

espermatozóides do ejaculado, assim como diminuição dos níveis de testosterona

sangüínea (WEISS et al., 2001). Porém ainda existem poucos estudos a respeito da

influência que o uso da dexametasona possa trazer à fertilidade de machos. O

objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos que este fármaco pode ter sobre a

fertilidade de touros.

MATERIAL E MÉTODOS

Animais e Manejo

Foram utilizados 6 touros, sendo 4 touros da raça Jersey, 1 da raça Nelore e 1

da raça Red Angus. Os mesmos possuíam peso aproximado de 600kg e idade em

torno dos 5 anos. Estes animais são provenientes de uma Central de Inseminação

do sul do Brasil, cujo nome será mantido em sigilo por se tratar de um

estabelecimento comercial.

Todos os animais foram submetidos à avaliação clínica e andrológica,

vacinados e vermifugados anteriormente ao início do trabalho.

Durante o experimento, os animais foram alimentados com ração balanceada,

pastoreio em piquetes individuais e sal mineral ad libitum.

Plano Experimental

O experimento foi conduzido no período de 22/04/2008 a 12/08/2008, durante

18 semanas, tempo correspondente a duas espermatogêneses, e dividido em dois

períodos, preliminar e experimental.

Durante a fase preliminar, foi colhido um ejaculado de cada touro uma vez por

semana, por um período de 9 semanas, com o objetivo de avaliar o seu perfil

seminal durante uma espermatogênese. Os exames bioquímicos foram realizados

semanalmente durante cinco semanas. Também foram realizadas colheitas de

amostras de sangue dos animais para dosagem de LH e testosterona sangüínea.

Esta colheita foi realizada semanalmente durante quatro semanas, posteriormente

se realizou esta colheita durante quatro dias consecutivos até o primeiro dia de

aplicação de dexametasona.

A fase experimental foi iniciada com a divisão dos animais em dois grupos

compostos por três indivíduos cada grupo, sendo um experimental e outro controle.

O grupo experimental recebeu aplicações diárias de 20 mg dexametasona I.M

durante cinco dias, e o grupo controle recebeu aplicações equivalentes de solução

salina 0,9%. De ambos os grupos foi colhido um ejaculado de cada touro uma vez

por semana, durante 9 semanas para avaliação do perfil seminal. Os exames

bioquímicos do sêmen foram realizados por mais 10 semanas. Para dosagem de

testosterona sangüínea nos animais na fase experimental, foram realizadas

colheitas de sangue durante os cinco dias correspondentes às aplicações de

dexametasona.

Exames Reprodutivos

Exame Morfológico dos Testículos

Durante o experimento, foram realizados exames físicos semanais do aparelho

genital em todos os touros. Os testículos foram explorados sistemática e

sucessivamente, por meio de palpação manual e inspeção visual, para verificação

de tamanho, consistência e simetria.

Comportamento Sexual

Os animais foram avaliados quanto ao comportamento sexual pela

classificação da libido (CHENOWETH, 1980) com escore variando de 0 a 6, com

este representando o valor máximo da libido.

Colheita do Sêmen

O sêmen foi colhido por meio de vagina artificial modelo Hannover.

Avaliação do Sêmen

As amostras de sêmen foram avaliadas imediatamente após a colheita. As

características avaliadas foram: volume, pH, turbilhonamento, vigor, motilidade,

concentração, e morfologia espermática.

O volume foi avaliado pela verificação do tubo de ensaio coletor graduado de 0

a 10 ml.

O pH foi aferido por meio de fitas indicadoras de pH.

O vigor foi classificado de 0 a 3, sendo 0 = ausência de motilidade, 1 = pouca

força de deslocamento, 2 = força de deslocamento moderada e 3 = força de

deslocamento rápida.

A motilidade foi avaliada de maneira subjetiva, em gota pendente entre lâmina

e lamínula, previamente aquecidas a 38ºC, observada no microscópio em aumento

de 400 vezes.

A concentração espermática foi aferida por meio de tubo graduado, sendo a

leitura efetuada em tabela própria.

Figura 1 – Aferição visual da concentração espermática em sêmen bovino.

A avaliação da morfologia dos espermatozóides foi realizada em esfregaço

celular de sêmen, previamente conservado em formol salina, utilizando-se

microscopia de contraste de fase.

Análise de Testosterona

O sangue proveniente da colheita foi centrifugado e o soro congelado até o

momento da análise, realizada no laboratório de Fisiologia da Reprodução Animal da

Universidade Federal do Paraná.

A dosagem foi realizada pelo método de enzima-imuno-ensaio (ELISA -

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay), com leitura de absorbância em 405 nm,

conforme descritos por BROWN et al. (2004).

Para este ensaio inicialmente 66,7µl do anticorpo (Polyclonal anti-testosterona

R156/7, Coralie Munro, University of California, Davis, EUA.) foram diluídos em 5 ml

de tampão (coating buffer; Na

, NaHCO

, H

O ultra pura, pH ajustado para 9,6)

e 50µl desta solução de anticorpo foram adicionados em cada poço da placa (NUNC

Immuno TM plates, Maxisorp). Após isso, a placa foi coberta com selador plástico e

mantida a 4ºC por 12 horas no máximo.

Uma vez preparada a placa, preparou-se a curva padrão, por meio de diluições

seriadas de 250µl do padrão de concentração 600 pg/50µl de testosterona (17-

hydroxy-4-androsten-3-one, Steraloids, Sigma A6950) até a concentração de 2,3

pg/50µl, em 250µl de solução de ensaio de ELISA (NaH

; Na

HPO

; NaCl; BSA -

Sigma Aldrich, A7906; H

O ultra pura, pH ajustado para 7,00). O hormônio

conjugado com a enzima HRP (Testosterone-horseradish Peroxidase) foi também

diluído (33,3µl em 5 ml da solução de ensaio de ELISA).

Imediatamente antes de dar início ao ensaio, a placa foi lavada 5 vezes com a

solução de lavagem (NaCl; Tween 20 – Sigma, P1379; H

O ultra pura) e o excesso

de solução é retirado batendo-se a placa em papel toalha. A seguir, em cada poço

correspondente foram pipetados 50µl dos padrões, controles e amostras e logo após

50µl da HRP, com o cuidado de não se ultrapassar mais que 10 minutos neste

processo. A placa foi novamente coberta com o selador e deixada incubando por

exatamente 1 hora, em temperatura ambiente. Após esse período foi repetido o

procedimento de lavagem.

Finalmente, preparou-se, imediatamente antes do uso, a solução de substrato

para ELISA combinando 40µl 0,5M H

, 125µl 40 mM ABTS (Calbiochem, ABTS

Chromophore, Diammonium Salt) e 12,5 ml de solução de substrato para ELISA

(ácido cítrico; H

O ultra pura, pH ajustado para 4,00). Adicionou-se 100µl em todos

os poços contendo padrão, controle ou amostra. Cobriu-se a placa, para incubar em

temperatura ambiente e sob agitação (Multi-Pulse Vortexer; modelo 099A VB4,

50/60Hz – Glass-Col), até que a densidade óptica dos poços zero fique entre 0.9 e

1. Procedeu-se então a leitura no leitor de microplacas (TECAN).

Todas as amostras foram lidas em duplicata, com coeficiente de variação intra

e inter-ensaio menor do que 10%.

Análise de Frutose e Ácido Cítrico

A amostra de sêmen foi centrifugada e o plasma foi congelado até o momento

da análise. Esta foi realizada no Laboratório de Patologia Clínica do Hospital

Veterinário da UFPR. Para tanto foi utilizado kit para aferição de componentes

bioquímicos do sêmen e a leitura realizada em espectrofotômetro.

A determinação de ácido cítrico se baseia no desenvolvimento de uma

coloração amarela originada quando o ácido cítrico reage com a piridina e anidrido

acético. Para a realização do teste pipetou-se 0,5ml de água deionizada para os

tubos branco, teste e padrão, 25µL de plasma seminal para os tubos teste e 25µL de

solução padrão (frutose 300mg/dL, ácido cítrico 300mg/dl e ácido benzóico 0,1%)

para o tubo padrão. Colocou-se os tubos em banho de gelo por dois minutos. Ainda

no banho pipetou-se 0,6ml de piridina para os tubos branco, teste e padrão. Foi

realizada então homogeneização. Posteriormente pipetou-se 2,5ml de anidrido

acético para todos os tubos. Homogeneizou-se e manteve-se no banho por mais

dois minutos. Depois os tubos foram transferidos para o banho-maria a 37ºC e

incubados por cinco minutos. Posteriormente efetuou-se as leituras em 420nm (filtro

azul). O resultado foi calculado dividindo-se a absorbância do teste pela absorbância

do padrão, sendo este valor multiplicado por 300.

A determinação da frutose baseia-se na reação de Selivanoff, que provoca a

transformação da frutose em furfural, que junto com o resorcinol produz uma

coloração rosa. O procedimento foi realizado pipetando-se 0,5ml de água deionizada

para os tubos branco, teste e padrão, 25µL de plasma seminal para os tubos teste,

25µL de solução padrão (frutose 300mg/dL, ácido cítrico 300mg/dl e ácido benzóico

0,1%) para o tubo padrão, 0,5ml de reagente de cor (resorcinol 0,1%, tiouréia 0,1% e

etanol 100%) para todos os tubos e 2,5ml de reagente ácido (ácido clorídrico 55%)

também para todos os tubos. Homogeneizou-se e colocou-se em banho fervente por

cinco minutos. Os tubos foram esfriados e as leituras realizadas em 530nm (filtro

verde). O resultado foi calculado dividindo-se a absorbância do teste pela

absorbância do padrão, sendo este valor multiplicado por 300.

Análise Estatística

Os resultados de frutose, ácido cítrico, porcentagem de defeitos morfológicos e

concentração foram submetidos à análise estatística paramétrica por meio do teste

ANOVA (Análise de Variância) para comparar os grupos tratamento e controle. Já os

valores encontrados para testosterona, volume, pH, motilidade, turbilhonamento e

vigor foram submetidos a estatística não-paramétrica por se tratarem de valores não

normais ou não homogêneos, sendo avaliados pelo teste de Kruskall-Wallis para os

mesmos grupos. Para ambos os testes foi utilizado um alfa de 0,05 (diferenças

significativas = p<0,05).

RESULTADOS

Durante os quatro meses que compreenderam o experimento, incluindo o

período pré e pós tratamento, não houve alteração no comportamento sexual dos

touros avaliados, sendo a libido dos mesmos mantida em pontuação 6, segundo a

classificação de CHENOWETH, 1980, representando o valor máximo da libido.

Também não houve nenhuma alteração na morfologia dos testículos, sendo a

consistência, tamanho e simetria mantidos desde o início até o final do estudo.

Para as variáveis, frutose, ácido cítrico, concentração e morfologia, avaliadas

por estatística paramétrica pelo teste de ANOVA, não houve diferença estatística

entre os grupos controle e experimental pré e pós tratamento.

Tabela 1 – Comparação entre grupo controle (n=3) e experimental (n=3) das

variáveis avaliadas por estatística paramétrica por teste ANOVA.

Variáveis Controle X Experimental

Frutose (ng/dL) 0,434062

Ácido Cítrico (ng/dL) 0,551094

Concentração 0,778565

Morfologia (%) 0,761880

Não existe diferença significativa para as variáveis testadas

Para as variáveis, volume, pH, motilidade, turbilhonamento, vigor e

testosterona, avaliadas por estatística não paramétrica pelo teste Kruskall-Wallis,

houve diferença significativa apenas para uma das variáveis testadas.

Tabela 2 - Comparação entre grupo controle (n=3) e experimental (n=3) pré e pós

tratamento das variáveis avaliadas por estatística não-paramétrica por

teste Kruskall-Wallis.

Variáveis Controle X Experimental

Volume (mL) 0,663500

pH 0,113495

Motilidade 0,529660

Turbilhonamento 0,198710

Vigor 0,358605

Testosterona (ng/mL) 0,00740

Não existe diferença significativa para as variáveis testadas.

Existe diferença significativa para a variável testada.

Comparando-se as médias entre os grupos, pré e pós tratamento observamos

esta homogeneidade de valores.

Tabela 3 – Comparação de médias e erro padrão entre os grupos controle (n=3) e

tratamento (n=3) das variáveis testadas por estatística paramétrica por

meio do teste ANOVA.

Pré Tratamento Pós Tratamento

Variáveis Controle Experimental Controle Experimental

Média EP Média EP Média EP Média EP

Frutose 339,05 31,04 278,77 30,55 422,06 29,34 412,82 28,97

Ácido Cítrico 715,66 55,06 597,81 68,19 889,05 47,85 722,81 42,49

Concentração 1269,67 89,06 1418,14 66,96 1464,23 61,96 1445,03 60,04

Morfologia (%) 10 0,92 8 0,83 6 0,61 7 0,54

*EP= Erro Padrão

Tabela 4 – Comparação de médias e erro padrão entre os grupos controle (n=3) e

tratamento (n=3) das variáveis testadas por estatística não-paramétrica

por meio do teste Kruskal Wallis.

Pré Tratamento Pós Tratamento

Variáveis Controle Experimental Controle Experimental

Média

EP Média EP Média EP Média EP

Volume 6,20 0,43 5,80 0,60 6,00 0,27 5,30 0,29

pH 6,59 0,03 6,50 0,00 6,55 0,02 6,42 0,06

Motilidade 90,71 1,62 92,85 0,81 86,16 1,85 80,70 3,55

Turbilhonamento 4,86 0,10 4,95 0,05 4,66 0,09 4,23 0,26

Vigor 4,95 0,05 4,95 0,05 4,83 0,07 4,43 0,23

Testosterona (ng/mL) 5,18 0,61 8,18 1,53 4,70 0,70 3,11 0,62

*EP= Erro Padrão

Graficamente temos os seguintes perfis, comparando-se as médias entre os

grupos experimental, composto pelos indivíduos 1, 2 e 3 e o grupo controle,

composto pelos indivíduos 4, 5 e 6.

Figura 2 – Comparação das médias dos valores de frutose e ácido cítrico entre os

grupos experimental e controle pré e pós tratamento.

Nesse caso, o perfil gráfico da bioquímica, tanto para frutose quanto para o

ácido cítrico, apresentou um pequeno aumento após o tratamento. Porém este

aumento ocorreu tanto no grupo experimental, como no grupo controle, não tendo

sua origem na aplicação da dexametasona. Este fato também não apresentou

significância estatística.

Figura 3 – Comparação das médias dos valores de morfologia espermática entre os

grupos experimental e controle pré e pós tratamento.

Figura 4 – Comparação das médias dos valores de concentração de

espermatozóides entre os grupos experimental e controle pré e pós

tratamento.

Figura 5 – Comparação das médias dos valores de volume e pH entre os grupos

experimental e controle pré e pós tratamento.

Figura 6 – Comparação das médias dos valores de motilidade entre os grupos

experimental e controle pré e pós tratamento.

Figura 7 – Comparação das médias dos valores de turbilhonamento e vigor entre os

grupos experimental e controle pré e pós tratamento.

Figura 8 – Comparação das médias dos valores de testosterona entre os grupos

experimental e controle pré e pós tratamento.

Para os níveis de testosterona sagüínea, observamos um decréscimo após o

tratamento, somente no grupo experiemental. Sendo esta a única variável para a

qual encontramos diferença estatística (α= 0,05). Mesmo assim esta significância é

pequena, próxima de ruídos.

DISCUSSÃO

No presente estudo constatou-se que houve uma pequena interferência

negativa na concentração sangüínea de testosterona, fato este também encontrado

nos estudos de TAHA ET al. (1981) em cães, THIBIER et al. (1976) em touros,

BOLY et al. (1994) por meio de injeções intra-testiculares em touros, TOHEI et al.

(1997) em ratos, WEISS et al. (2001) em cães e WINGFIELD (2006) em marsupiais.

Já ALKASS (2009) não encontrou diferença significativa na concentração plasmática

de testosterona em ovinos.

TAHA et al. (1981) ainda relatou em seu estudo que o declínio na

testosteronemia resultou em atrofia testicular, ausência de libido, oligospermia e

infertilidade no cão, com redução no volume do ejaculado, concentração de

espermatozóides e até aumento de anormalidades dos espermatozóides. Alguns

destes fatos são corroborados por estudo posterior realizado por WEISS et al.

(2001) na mesma espécie, como redução do volume do ejaculado, na concentração

de espermatozóides, e no número total de espermatozóides no ejaculado. Porém,

não houve interferência na libido dos animais, na morfologia dos testículos, no vigor

dos espermatozóides, e na porcentagem de espermatozóides anormais.

No estudo realizado por ALKASS (2009) em ovinos, além de não ter havido

interferência nos níveis de testosterona, houve aumento no volume do ejaculado, na

motilidade em massa e na motilidade individual.

Em uma degeneração testicular experimental em touros provocada por

dexametasona, HORN et al. (1999) encontraram um decréscimo qualitativo

significativo no aspecto do ejaculado, turbilhonamento e vigor dos espermatozóides.

Já os touros avaliados neste presente estudo, apresentaram uma diferença muito

pequena nos níveis sangüíneos de testosterona, e não só não tiveram interferência

na libido como a mantiveram em níveis máximos de pontuação. Para os outros

parâmetros houve apenas uma diferença pouco significativa em um indivíduo para a

variável motilidade, sendo esta tenuamente reduzida. Volume, pH, turbilhonamento,

vigor, concentração, porcentagem de espermatozóides anormais, níveis de frutose e

ácido cítrico no plasma seminal permaneceram inalterados.

Estatisticamente os resultados encontrados nesta pesquisa não diferenciam

significantemente entre o grupo controle e o grupo experimental. Mesmo a única

variável que apresentou diferença significativa entre os dois grupos, a testosterona,

tem essa diferença muito tênue. Diante disso e de todas as controvérsias entre os

estudos realizados até hoje, que até mesmo são escassos, faz-se necessária a

averiguação de tais resultados, principalmente no que diz respeito aos bovinos, pois

não foram encontradas evidências suficientes para afirmar que a dexametasona

cause algum prejuízo à fertilidade de touros. Nestes animais ainda há o agravante

da dificuldade de conseguir um número grande de indivíduos a serem testados. Mas

é importante que estas avaliações sejam feitas em um número maior de indivíduos e

que as análises sejam feitas com maior freqüência.

Aconselha-se evitar o uso do medicamento até que próximos estudos sejam

realizados e que venham a confirmar a inocuidade deste fármaco à vida reprodutiva

de machos bovinos.

CONCLUSÃO

No presente experimento podemos concluir que o uso da dexametasona no

grupo experimental não causou nenhum dano aos parâmetros reprodutivos nos

indivíduos deste grupo, comparando-se aos parâmetros reprodutivos dos animais do

grupo controle. Não houve alteração significativa para as variáveis avaliadas, sendo

estas libido, morfologia dos testículos, níveis de frutose e ácido cítrico no plasma

seminal, níveis de testosterona sangüínea, volume e pH do ejaculado, concentração

de espermatozóides no ejaculado, motilidade, turbilhonamento, vigor e defeitos

morfológicos dos espermatozóides.

REFERÊNCIAS

ALKASS, Z.M.Y. The effect of the dexamethasone on sperm characteristic and

testosterone level on Awassi rams. Journal of Animal and Veterinary Advances, v.

8, n. 3, p. 598-602, 2009.

BOLY, H.; HUMBLOT, P.; TILLET, Y. Imunohistochemistry of LH and FSH secreting

cells and response of plasma LH and testosterone to combined dexamethasone and

GnRH treatment. Journal of Reproduction and Fertility, v. 100, p. 157-162, 1994.

BROWN, J. L.; WALKER, S. E.; STEINMAIN, K. Endocrine manual for the

reproductive assessment of domestic and non-domestics species. Conservation

and Research Center, Smithsonian´s National Zoological Park, Front Royal, Virginia

– EUA, 93 p, 2004.